בצינור מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מיליליטר על קרח, שלב 10 מיקרוליטר של תמצית ללא תאים עם ארבעה מיקרוגרם של DNA פלסמיד ו -25 מיקרוליטר של חיץ סינתזת חלבון ללא תאים 2X. הכינו עד נפח כולל של 50 מיקרוליטר עם מים מזוקקים פעמיים להכנת תמיסת סינתזת חלבון ללא תאים. שוקלים 0.75 גרם אגרוז ומוסיפים אותו ל -100 מיליליטר של חיץ מים מזוקק כפול להכנת 0.75% אגרוז.
חממו את האגרוז 0.75% בהתפרצויות של 30 שניות בהספק גבוה ופיפטה 50 מיקרוליטר של האגרוז המותך לתוך צינורות מיקרוצנטריפוגות של 1.5 מיליליטר או לתוך תבניות בעלות צורה רצויה. מניחים את האגרוז המותך על בלוק חום שנקבע ל-50 מעלות צלזיוס ומאפשרים לאגרוז להתקרר אך לא להתפלמר. לאחר מכן, ערבבו את האגרוז המותך עם תמיסת סינתזת החלבון נטולת התאים על ידי פיפטציה וערבוב עם קצה הפיפטה.
מניחים לג'לים להתקרר לטמפרטורת החדר ומתפלמרים במשך כשתי דקות. מעבירים את האגרוז הפולימרי לצינורות מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מיליליטר עם מרית והקפאת הבזק בחנקן נוזלי. הכניסו את ההידרוג'לים הקפואים במהירות הבזק לאחסון של מינוס 80 מעלות צלזיוס למשך שעה.
לאחר מכן, הסר את מכסי צינור מיקרוצנטריפוגה. מכסים את הצינורות בסרט שעווה ומנקבים את הסרט כדי לאפשר ללחות להתייבש. כוונו את טמפרטורת מייבש ההקפאה למינוס 20 מעלות צלזיוס ואת הלחץ ל-0.1 מיליבר וייבשו בהקפאה את מכשירי סינתזת החלבון ללא תאים למשך 18 שעות או למשך הלילה.
התייבשו מחדש את המכשירים המיובשים בהקפאה למשך 30 דקות עם 50 מיקרוליטר מים מזוקקים פעמיים ללא נוזל עודף, והעבירו את הג'לים לצלחת מיקרוטיטר שחורה של 384 בארות באמצעות מרית. לבסוף, הנח את צלחת המיקרוטיטר על קורא לוחות והשתמש בהגדרות קורא הלוחות המוצגות על המסך לצורך זיהוי וניתוח פלואורסצנטיות. סינתזת חלבון ללא תאים של eGFP ו- mCherry בהידרוג'ל באמצעות ליזטים של תאי E.coli מוצגת באיור זה.
0.75% ג'ל אגרוז הוכנו ללא תבנית DNA עם ארבעה מיקרוגרם של תבנית eGFP או mCherry או עם ארבעה מיקרוגרם של תבנית eGFP ותבנית mCherry. מוצגת גם שכבת-על של שני הערוצים, והכיסוי כולל את תמונת ניגודיות ההתאבכות הדיפרנציאלית. התוצאות אישרו את הביטוי המשותף של mCherry ו- eGFP באגרוז.
