פתח את תוכנת LightBox לרכישת תמונות. לבחירת ערכות הלייזר והסינון, השתמשו בפרמטרים לצבע כתום על ידי בחירת הצבע המשמש לצביעה מרשימת הצבעים. באמצעות סקירה, לחץ על שידור חי כדי למקד את התאים.
ברגע שהתאים נמצאים במיקוד, התאם את הגדרות הרכישה הקונפוקלית. לאחר מכן, בחר את לחצן החזר ההשקעה המלבני וצור אזור עניין סביב מיטוכונדריה מעניינת על ידי לחיצה וגרירה כדי לעצב את האזור. כדי להתאים את gating הגלאי עבור דלדול פליטה מגורה או רכישת יציבות, לצד התפריט הכללי, בחר בתפריט gating או לחץ והחזק כדי להוסיף את התפריט לתצוגה.
לרכישת יציבות, הגדר את לייזר העירור ל- 15% עד 20% ואת לייזר דלדול היציבות ל- 20% עד 25% עם הצטברות של 10 שורות. השתמש בזמן שהייה של פיקסלים של ארבע מיקרו-שניות וגודל פיקסלים של 20 עד 25 ננומטר. בצע קיטועי זמן על-ידי בחירת התפריט הנפתח שעה ולאחר מכן הגדרת מספר האיטרציות לחמש ומרווח זמן של 25 או 30 שניות.
ניתן לבצע מחסנית Z באמצעות אפשרות עוצמת הקול והתאמת טווח עוצמת הקול Z הרצוי וגודל המדרגה. תוכנת Open stead image deconvolution כדי לבטל תמונות stead גולמיות עם אלגוריתם התוכנה. לאחר שווידאתם שהפרמטרים המיקרוסקופיים נכונים, בחרו בכפתור האקספרס וקבעו את סוג הדה-קונבולוציה מהיר, סטנדרטי, אגרסיבי או שמרני מדי עבור דרגות שונות של עוצמת דה-קונבולוציה.
בצע את הדה-קונבולוציה. שמור את התמונות בתבנית ICS2. בתמונה J, לחץ על קובץ ולאחר מכן פתח כדי לפתוח את קבצי ICS2 מתוכנת deconvolution.
בחר תוספים, ולאחר מכן סגמנטציה ואחריה סגמנטציה Weka ניתנת לאימון כדי לפתוח את תמונות הסטטוס המפותלות בתוסף סגמנטציה Weka הניתן לאימון. בהגדרות הסגמנטציה, בחרו בטשטוש גאוס, בהקרנות קרום ובתכונות מסנן סובל. תייגו מחלקה אחת כ-cristae ואת השנייה כרקע.
לאחר מכן, צייר קו מעל המבנה כדי להקצות לכל אחת מהכיתות. לאחר מכן בחר את כפתור ההוספה בצד ימין עבור cristae או רקע. לאחר מכן בחר את כפתור מסווג הרכבת בצד שמאל כדי ליצור מפה המבוססת על המידע שסופק לתוסף.
לחץ על לחצן שמור מסווג כדי לשמור את הגדרות המסווג עבור פילוח עתידי. השתמש במפת ההסתברות cristae כדי לסף את התמונה בתמונה J כדי ליצור מסיכה בינארית, ולאחר מכן עבור לנתח, ולאחר מכן לנתח חלקיקים. לבסוף, ציירו קו רב-נקודתי, התאימו את עובי הקו לרוחב של מספר פיקסלים וקשרו את הקו כך שיתאים למיטוכונדריה.
במחקר זה, הדמיה של מיטוכונדריה בחומצה רטינואית לא ממוינת בתאי SH-SY5Y עם הדמיית קיטועי זמן כפי שמוצג. ניתן להשתמש בתמונות הסטד המפותלות כדי לקבוע מחזוריות של cristae באזור נתון ומדידות גודל וצורה של cristae.
