כדי להתחיל, להמיס אבקת נילוס אדום באצטון בריכוז של שלושה מיליגרם למיליליטר. לדגור על התמיסה במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר עם ערבוב תקופתי. סנן את התמיסה באמצעות מסנן 0.22 מיקרומטר פעם או פעמיים בהתאם לכמות המשקע שנותרה בתמיסה.
לאחר מכן הכן את פתרון העבודה על ידי דילול פתרון המניות ביחס של אחד ל- 500 ב- DPBS. הוסיפו 200 מיקרוליטר של תמיסת העבודה לתאי RPE הקבועים בפרפורמלדהיד ודגרו במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר על שייקר המגן מפני אור. לאחר הדגירה, לשטוף את הדגימות פעמיים עם DPBS, ולאחר מכן להוסיף 200 מיקרוליטר של DPBS, ולאחסן אותם בארבע מעלות צלזיוס.
עבור צביעת BODIPY, להכין ריכוז מלאי 3.8 מילימולרי על ידי המסת BODIPY ב DMSO נטול מים. לאחר מכן הכן את פתרון העבודה על ידי דילול פתרון המניות ביחס של אחד ל -300 ב- DPBS. הוסיפו 200 מיקרוליטר של תמיסת העבודה של BODIPY לתאי RPE קבועים פרפורמלדהיד ודגרו לילה על נדנדה בטמפרטורת החדר.
למחרת, לשטוף את התאים פעמיים עם DPBS ולהוסיף 200 מיקרוליטר של DPBS לפני אחסון אותם בארבע מעלות צלזיוס. עבור APOE immunostaining, הכן פתרון חיץ על ידי שילוב DPBS עם 1%BSA, 0.5%Tween 20 ו- 0.5% Triton X-100. לחסום ולחדור את תאי RPE קבועים paraformaldehyde ב 200 מיקרוליטר של תמיסת חיץ במשך שעה אחת.
לאחר הדגירה, יש להוסיף נוגדן ראשוני של APPLE המדולל ב-1 עד 100 בתמיסת החיץ ולדגור למשך הלילה בטמפרטורת החדר. למחרת, שטפו את הדגימות פעמיים עם DPBS. לאחר מכן להוסיף 200 מיקרוליטר של תמיסת נוגדנים משנית מדולל ב אחד עד 1000 במשך שעה אחת בטמפרטורת החדר.
לאחר הדגירה, לשטוף את התאים פעמיים עם DPBS ולהוסיף 200 מיקרוליטר של DPBS לפני אחסון אותם בארבע מעלות צלזיוס.
