התחל על ידי צנטריפוגה של תא עצבי טהור murine ב 300 G במשך שמונה דקות. שאפו בעדינות את הסופרנאטנט והשעו מחדש את הגלולה ב-80 מיקרוליטר HBSS עם תמיסת 0.5 BSA. לאחר הוספת הנוגדן הספציפי, לדגור על הצינורות בארבע מעלות צלזיוס במשך 10 דקות.
שטפו את עודפי הנוגדנים בתמיסת HBSS-BSA ובצנטריפוגה. הוסיפו 20 מיקרוליטר של מיקרו-כדוריות אנטי-ביוטין לכדוריות, המושהות מחדש ב-HBSS-BSA. לדגור על הצינור בארבע מעלות צלזיוס במשך 10 דקות.
לאחר מכן, הוסף 0.5 מיליליטר HBSS עם תמיסת BSA של 0.5% לכל 10 לשבעת התאים. שטפו את העמוד עם 0.5 מיליליטר HBSS עם תמיסת BSA של 0.5%. לאחר הפסקת הטפטוף, הניחו צינור של 15 מיליליטר מתחת לעמוד והעבירו דרכו 0.5 מיליליטר של תרחיף התא.
לאסוף את eluate המכיל תאים עצביים לא ספציפיים, ולאחר מכן לנקות את העמודה עם שלוש שטיפות של 0.5 מיליליטר של HBSS עם 0.5% BSA. כעת הסר את העמוד מהמגנט והנח אותו בצינור חדש של 15 מיליליטר. הוסף מיליליטר אחד של HBSS עם 0.5% BSA והשתמש בבוכנה כדי לשטוף את תאי היעד.
לאחר צנטריפוגה ושאיפת סופרנאטנט, להשהות מחדש את הגלולה ב 0.5 מיליליטר של מדיום ציפוי. ספרו את התאים בתא ספירה של נויבאואר תחת מיקרוסקופ שדה בהיר. צלחת את תאי היעד כבקרה החיובית ואת התאים הלא ספציפיים כבקרה השלילית בלוח 24 בארות מוכן.
יש לדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 12 שעות. נוירונים חיוביים ל-LepR החלו ליצור נוירוטים לאחר 48 שעות. ב DIV4, הרחבות אקסונליות הראו התקדמות, בעוד תהליכים דנדריטיים החלו להופיע.
ב-DIV6, תאי העצב היו מפותחים מספיק. מחקרים אימונופלואורסצנטיים הראו כי לא נצפו תאי גלייה או תאים אחרים שאינם נוירונים. האופי העצבי של התאים אושר על ידי צביעת חלבון 2 הקשור למיקרוטובול.
ב-DIV10, 30% מהתאים החיוביים ל-LepR ביטאו POMC. קישוריות סינפטית ופונקציונליות נצפו בתרבויות כלליות המכילות אוכלוסיות עצביות היפותלמיות הטרוגניות.
