Patch-Clamp Recording to Study the Electrical Responses of Motor Neurons to Spinal Cord Stimulation

כדי להתחיל, הניחו את פרוסת חוט השדרה המוכנה בתא ההקלטה. לאחר מכן מקם את האנודה של מערכת המיקרו-מניפולציה ליד קו האמצע הגבי בקתודה קרוב לאזור הכניסה של השורש הגבי למיקום נכון של מגרה חוט השדרה. כעת עברו לעדשה אובייקטיבית של 60X כדי לזהות תא עצב בריא בעל משטח חלק ובהיר ללא גרעינים נראים לעין.

הפחת מעט את עוצמת האינפרא אדום, הפעל את מקור האור הפלואורסצנטי והתאם את מסנן האור לאפשרות העירור האולטרה סגול בפס רחב. כעת, בחר נוירון מוטורי חיובי פלואורו-זהב מתאים והורד בהדרגה את האלקטרודה עד שהיא קרובה לנוירון. כאשר פיפטה באה במגע עם פני השטח שלה, חפש שקע קרום קטן בגובה הקצה ושחרר את הלחץ החיובי שהופעל בעבר.

לאחר מכן להחיל לחץ שלילי על פיפטה באמצעות מזרק ולחכות עד ערך ההתנגדות עולה gigaohms על ממשק התוכנה. מהדקים את פוטנציאל הממברנה במינוס 70 מיליוולט. לחץ על כפתור פיצוי הקיבול המהיר בממשק התוכנה של המגבר, ולאחר מכן הפעל לחץ שלילי קצר כדי לקרוע את קרום התא ולחץ על כפתור פיצוי הקיבול האיטי בממשק התוכנה של המגבר.

החל את גירוי חוט השדרה למשך שנייה או שתיים תוך שמירה על המשרעת בין מיליאמפר אחד ל -10 מיליאמפר. קבע את סף המנוע על ידי הגדלה הדרגתית של משרעת הגירוי עד לפוטנציאל הפעולה הראשון שנצפה. הבחינו בין נוירונים מוטוריים מושהים ויורים מיידיים באמצעות הזרקת זרם דה-פולריזציה של חמש שניות סביב בסיס הריאו במצב המהדק הנוכחי.

לאחר כיבוי גירוי חוט השדרה, המשך להקליט את פוטנציאלי הממברנה כדי ללכוד את פוטנציאלי הפעולה הספונטניים שנורים. כאשר המשרעת של גירוי חוט השדרה הועלתה, פוטנציאל הממברנה גדל, ופוטנציאלי הפעולה הופעלו כל 10 עד 20 פעימות. לאחר שהגירוי של חוט השדרה כבה, תא העצב ירה סדרה של פוטנציאלי פעולה ספונטניים לפרק זמן קצר.

לאחר מכן, פוטנציאל קרום המנוחה חזר למינוס 65 מיליוולט.