IPSC Differentiation into Posterior Primitive Streak and Nephrogenic Intermediate Mesoderm

התחל על ידי שטיפת תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים או iPSCs על מטריצת הממברנה מצופה צלחת 6 באר עם שני מיליליטר DPBS. שאפו את ה-DPBS באמצעות פיפטה. לאחר מכן, הוסף מיליליטר אחד של פתרון ניתוק התאים הזמין מסחרית כדי לנתק את iPSCs.

לאחר מכן הכניסו את התא לאינקובטור בטמפרטורה של 37 מעלות למשך חמש דקות. כעת יש למרוח מיליליטר אחד של mTeSR על תאי הגזע הפלוריפוטנטיים הפלוריפוטנטיים (iPSC), ולהבטיח שהתאים נפרדו מפני השטח של הפלסטיק. צנטריפוגות תאים אלה ב 400 גרם במשך שלוש דקות בטמפרטורת החדר.

השהה מחדש את גלולת התא, ולאחר מכן ספור את מספרי התאים באמצעות המוציטומטר. לאחר מכן זרעו מגוון של צפיפויות תאים על צלחת בת 6 בארות שצופתה במטריצת ממברנה. תרבית אלה עם mTeSR בתוספת 10 מעכב Rho-kinase micromolar.

תרבית את הצלחות למשך הלילה באינקובטור פחמן דו חמצני שנקבע על 37 מעלות צלזיוס. למחרת שואפים את mTeSR ולשטוף את התאים עם שני מיליליטר של DPBS. לאחר מכן, הוסף שני מיליליטר של מדיום שלב 1 לתאים.

לאחר מכן מניחים את התאים באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס למשך ארבעה ימים. ביום הרביעי, להסיר את שלב 1 בינוני ולשטוף את התאים עם שני מיליליטר של DPBS. לאחר מכן הוסף שני מיליליטר של מדיום שלב 2 לתאים לפני הדגירה על התאים כמו קודם.

מיום האפס ועד היום הרביעי, תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים התרחבו במהירות ולבשו צורות רומבואידיות או משולשות. המפגש הגיע ל 90 עד 100% והצטבר באופן שווה עד היום השביעי. עם תרבית התלייה, הצברים יוצרים באופן ספונטני מבני נפרון לאחר התנתקות ביום השביעי.