בתור התחלה, שמרו על סטריליות על ידי ניקוי כפפות, מחסניות וצלחות תרבית עם 70% אתנול. לאחר מכן, הפעל את המדחס עבור המדפסת הביולוגית ובחר את הלחצן המאותחל כדי לאתחל את המדפסת. נגבו משטחים בתוך המדפסת עם 70% אתנול.
באמצעות הלחצן Print Run, טען את קובץ ההדפסה ופתח את Print Protocol PDF. הפשירו ביו-דיו, נוזלים מפעילים ו-50 מיליליטר של מדיה מלאה בטמפרטורת החדר. הכן את מחסנית ההדפסה בהתאם להוראות במסמך PDF של פרוטוקול ההדפסה, כדי להבטיח את הנפחים הנכונים של ריאגנטים בתאים שצוינו.
לאחר מכן, הוסף 1.2 מיליליטר של F3 ל- C1, 1.2 מיליליטר של F32 ל- C2, ו- 200 מיקרוליטר של F261 ל- C4. הסר את הצלחת המצופה פוליאתילנימין ולמינין מהאינקובטור. הגדר את תא מחזיק הצלחת לצלחת בעלת פרופיל נמוך. הכנס את הלוחית לתא מחזיק הלוחות הימני של המדפסת.
הסירו את המכסה מהצלחת והניחו אותו במחזיק המכסה. הכנס את מחסנית ההדפסה למדפסת הביולוגית ובחר בלחצן Print Inert Base כדי להתחיל בהפעלת ההדפסה. לאחר ההפשרה, צנטריפוגו את הנוירונים והאסטרוציטים הגלוטמטרגיים, שואפים את הסופרנאטנט ומשעיפים מחדש את שני סוגי התאים בנפרד במיליליטר אחד של מדיה שלמה.
ערבבו 20 מיקרוליטר של תרחיף התא עם אותו נפח של טריפאן כחול וספרו את התאים כדי לקבוע ריכוז תאים בר קיימא עבור כל סוג תא. לאחר מכן, שלב 3 מיליון נוירונים גלוטמטרגיים עם מיליון אסטרוציטים בצינור של 15 מיליליטר, והוסף מדיה שלמה כדי ליצור נפח סופי של שמונה מיליליטר. צנטריפוגו את מתלה התא ושאפו את הסופרנאטנט מבלי להפריע לכדור.
להשעות את הגלולה ב 200 מיקרוליטר של נוזל activator F299 על ידי pipeting למעלה ולמטה. הנח את המכסים על המחסנית ועל צלחת התרבית והסר אותם מהמדפסת הביולוגית. בארון בטיחות ביולוגית, הוסף 200 מיקרוליטר של מתלה תאים לבאר C3 של מחסנית ההדפסה.
הכנס מחדש את המחסנית למדפסת הביולוגית והסר את המכסה כפי שהודגם קודם לכן. התחל את שלב דגמי ההדפסה של ריצת ההדפסה. במקביל, החלף את המדיה הרבודה מלוח הבקרה הדו-ממדי במדיה מלאה.
הכנס את לוח מיקוד ההדפסה הביולוגית למדפסת הביולוגית והסר את המכסה. התחל בתהליך פילוח ההדפסה הביולוגית. כשתתבקש, הסר את לוח היעד מהמדפסת הביולוגית.
השתמש במדריך כדי לזהות מיקומים שבהם ניתן לצפות בטיפות על הצלחת. הכנס מחדש את לוח היעד למדפסת הביולוגית כדי לחזור על תהליך הדפסת הטיפות והבחירה. כשתתבקשו, החלף את לוח היעד בלוח תרבית תאים.
לאחר ההדפסה, הוסף מדיה שלמה לכל בארות התרבות המשותפת בתלת-ממד, ודגר בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו-חמצני. לבסוף, יש להשליך מחסניות ונוזלים שנותרו. על פי פרוטוקולי המעבדה.
לאחר שבעה ימי הדפסה, כמעט ולא נותרו תאים בודדים וצרורות מחוברים של נוירוטים ותחזיות אסטרוציטיות נראו מבוצרים. צמיחת הנוירוט גדלה באופן ליניארי בין 12 ל -156 שעות. במהלך צמיחת תאי עצב, אשכולות גוף התא גדלו גם הם.
ניתוח כדאיות התאים הראה כי כ-72% מכלל התאים היו חיים ביום הרביעי בעוד 29% היו מתים. אימונוסטיין אישר את המורפולוגיה התאית הבריאה של תאי העצב והאסטרוציטים המודפסים ביולוגית, כאשר שני סוגי התאים הציגו צמיחה של בליטות תאיות. הפנוטיפ הגלוטמטרגי של הנוירונים אושר באמצעות צביעה חיסונית עבור קולטן גלוטמט 2.
