כדי להתחיל, להכין מדיום תרבית אורגנואיד המכיל 10 מיקרומולר Y-27632, ו 2.5 מיקרומולר CHIR-99021. לאחר ציפוי ה-ECM על גבי המעי-על-שבב, נתק את צינור היציאה מתעלת המיקרו העליונה תוך שמירה על צינור המעקף של המיקרו-ערוץ העליון פתוח. באמצעות תפס קלסר, אבטח הן את הכניסה והן את היציאה של המיקרו-ערוץ התחתון.
באמצעות מיקרופיפטה P100, הוסף 20 מיקרוליטר של תרחיף התא לחור היציאה של המיקרו-ערוץ העליון. אבטח את המעקף ואת צינורות הכניסה של המיקרו-ערוץ העליון באמצעות תפסי קלסרים. חבר מחדש את צינור היציאה לחור היציאה של המיקרו-ערוץ העליון, וודא שהצינור נשאר פתוח לאורך כל התהליך.
לאחר שתסיים, אבטח בהדרגה את צינור היציאה של המיקרו-ערוץ העליון באמצעות תפס קלסר. לאחר מכן, תחת מיקרוסקופ, ודא כי התאים מפוזרים באופן שווה ברחבי microchannel העליון. הניחו את מכשיר המעיים על השבב ואינקובטור פחמן דו-חמצני לח בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
חבר את המזרק המחובר למיקרו-ערוץ העליון של השבב למשאבת מזרק הממוקמת בתוך אינקובטור. הגדר את קצב הזרימה ל -30 מיקרוליטר לשעה והתחל את הזרימה הרציפה של מדיום הישיבה עבור המיקרו-ערוץ העליון. במהלך תקופה זו, להשאיר את microchannel התחתון מהודק.
למחרת הישיבה, החליפו את המדיום במדיום תרבית אורגנואיד המכיל רק A-83-01. לאחר הקמת החד-שכבה עבור המיקרו-ערוץ העליון, התחל את זרימת מדיום הישיבה הרציפה למיקרו-ערוץ התחתון. לאחר מכן, להציג מדיום תרבות אורגנואידים לתוך שני microchannels העליון והתחתון כדי ליזום את הפיתוח של מורפוגנזה תלת מימדית בשבב.
הגדל את קצב הזרימה ל -50 מיקרוליטר לשעה כדי להשיג לחץ מוחלט של 0.02 dine לסמ"ר בעיצוב מעיים על שבב. באמצעות ביוריאקטור מווסת מחשב, יש להפעיל זן מחזורי של 10% ותדר של 0.15 הרץ על התאים שגודלו בתרבית במכשיר מעי על שבב למשך יומיים-שלושה כדי ליצור מורפוגנזה תלת-ממדית. לאחר שישה עד תשעה ימים של זרימה בינונית, נצפתה מדי פעם התקבצות של מורפוגנזה תלת ממדית של תאי אפיתל של מעי כלבים ברחבי המיקרו-ערוץ.
צביעה אימונופלואורסצנטית העריכה את המבנה התלת-ממדי של חד-שכבות שמקורן באורגנואידים ומבנים דמויי וילוס בשבבים מיקרופלואידים. תפקוד מחסום המעי שנמדד על ידי TEER הראה ערכי TEER יציבים ביום החמישי של התרבית.
