Calcium Imaging of Drosophila Ex Vivo Brain for Epileptiform Analysis

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

184 Views

•

01:52 min

•

October 13th, 2023

DOI :

10.3791/200734-v

October 13th, 2023

•

Ming-Feng He¹, Chu-Qiao Liu², Xi-Xing Zhang², Yong-Miao Lin², Yu-Ling Mao³^,⁴, Jing-Da Qiao¹

¹Department of Neurology, Institute of Neuroscience, Key Laboratory of Neurogenetics and Channelopathies of Guangdong Province and the Ministry of Education of China, the Second Affiliated Hospital, Guangzhou Medical University, ²The Second Clinical Medicine School of Guangzhou Medical University, ³Department of Obstetrics and Gynecology, Center for Reproductive Medicine, Guangdong Provincial Key Laboratory of Major Obstetric Diseases, The Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University, ⁴Key Laboratory for Reproductive Medicine of Guangdong Province, The Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University

Transcript

כדי להתחיל, לחורר את הפתרון החיצוני עם מלוחים מחומצנים במשך חמש דקות. בעזרת פיפטה, מעבירים 10 מיקרוליטר מתמיסת הדיסקציה לצלחת פטרי. כעת, השתמשו במחטי מזרק ומיקרוסקופ כדי לנתח בזהירות את מוחותיהם של זבובי הבר המבוססים והמורדמים.

עם פיפטה, להעביר את המוח מוכן לתוך צלחת הקלטה עם חמישה מיליליטר של פתרון חיצוני. לשתק את המוח עם מחזיק C חד. לאחר מכן, צלם את התמונה הקונפוקלית של כל מוח במהירות של פי 20.

השתמש במצב סריקה XYT וזהה את נוירוני גוף הפטריות בהגברה דיגיטלית נוספת של פי 4.5. הגדר את עירור הלייזר ל -488 ננומטר עם כוח לייזר של 16 מיקרו וואט כדי להשיג את כל פליטת GCaMP6m במוח. לאחר מכן הגדר את פרמטרי הסריקה למהירות 1400 עם גודל פיקסל של 256 על 256 פיקסלים.

הגדר את קצב הרכישה ל -5.3 הרץ והקלט במשך שלוש דקות. לנתח את הפלואורסצנטיות של חמישה עד שמונה אזורים של עניין. לקבוע באופן ידני את גוף התא של נוירונים בגוף פטריות כמו האזור של עניין.

השתמשו בתמונה J כדי לתייג את תאי העצב שזוהו ולמדוד את עוצמות הפלואורסצנטיות שלהם. נתח את נתוני הפלואורסצנטיות של GCaMP6m כפי שמוצג. הגדירו את הפלואורסצנטיות התוך-תאית הגדלה בין שתיים ל-2.5 סטיות תקן כקוצים קטנים ואת אלו הגדלות ביותר מ-2.5 סטיות תקן כקוצים גדולים.

אותות סידן נצפו בגוף הפטריות של הזבובים. זבובי הקאק הראו יותר קוצים גדולים מאשר קוצים קטנים.

Explore More Videos

JoVE

From the series

ניטור אירועים אפילפטיים בדרוזופילה באמצעות הדמיית סידן