Microdissection Protocol for Isolating the Murine Left Atrium (LA) with the Pulmonary Veins

כדי להתחיל, הניחו את הלב והריאות המיובשים מבודדים מעכבר לתוך צלחת דיסקציה המכילה 40 עד 50 מיליליטר של PBS. מקמו אותו מתחת למיקרוסקופ בעל שדה בהיר עם הגדלה של פי 10 והגדירו את התאורה. לאחר מכן הניחו את המשטח הגבי של הלב על צלחת הדיסקציה.

באמצעות מספריים כירורגיים, להפריד בזהירות את החדרים מן אטריה לאחר זיהוי המעבר בין דופן החדר ואת פרוזדורים. מניחים את האטריה המופרדת על צלחת הדיסקציה כשבסיס הלב פונה כלפי מעלה. כיוון האטריה עם אונות הריאה הממוקמות מאחור, האטריום השמאלי ונספחו ממוקם מימין והאטריום הימני ונספחו ממוקם משמאל.

הצמד את רקמת החדר השמאלי הנותרת לצלחת הדיסקציה כדי לאבטח את ההכנה. מורחים את אונות הריאה בעדינות מבלי להפעיל כוח מופרז ומצמידים אותן לצלחת. לאחר מכן, מצא את אבי העורקים עם קשת אבי העורקים במרכז בסיס הלב.

הסר רקמת חיבור ושומן סביב בסיס הלב תוך שמירה על כל ציוני הדרך שזוהו. כמו כן, הסר את קשת אבי העורקים כדי לנקות את הנוף של בסיס הלב. זהה את גזע הריאה ישירות מימין לאבי העורקים ועקוב אחר מסלולו לכיוון הגב כדי לזהות את עורקי הריאה.

כדי לאשר את מיקומם, עקבו אחר מסלולם לאונה השמאלית ולאונות העליונות או האמצעיות הימניות כדי לאתר את הילום הריאה. קבע את המיקום של הסמפונות הראשיות השמאלית והימנית מאחורי אבי העורקים. אשר את מיקומם על ידי התחקות אחר דרכם לכיוון הילום הריאות.

לאחר מכן זהה את הווריד קאווה העליון משמאל לאבי העורקים ועקוב אחר מסלולו לאטריום הימני ליד תוספתן הפרוזדורים הימני. באמצעות דיסקציה קהה עם מלקחיים עדינים, נתקו בזהירות את עורקי הריאה מהמשטח העליון של האטריום, ואז נתקו אותם בהילום הריאה והזיזו אותם הצידה כדי לחשוף את הקיר השמאלי נטול הפרוזדורים ואת ורידים ריאתיים לעיני כל. הסר את הסמפונות הראשי מן הילום הריאה ולהשליך את רקמת הסימפונות.

בדוק את הילום הריאה כדי לזהות את האוסטיום של עורק הריאה ואת הסימפונות הראשי. כדי להפריד את האטריה והחדרים, בצע חתך מהחלק הקדמי של החדר הימני הנותר ועבור כלפי מעלה דרך המסתם הטריקוספיד לצד הקדמי של הווריד קאווה העליון, ופתח את האטריום הימני מהצד הקדמי. לאחר מכן חתכו את הקיר החופשי הפרוזדורי הימני האחורי הסמוך למחיצת הפרוזדורים כדי ליצור חלוקה בין אטריום ימין ושמאל.

חתכו את דופן החדר הימני האחורי ליד המחיצה הבין-חדרית כדי לנתק לחלוטין את החדר השמאלי והימני. הסר חלק מרקמת הריאה הבסיסית כדי לקצץ את גודל אונות הריאה, והשאיר שלושה עד ארבעה מילימטרים מרקמת הריאה.