אנליזה אימונוהיסטוכימית של מדבקת פייר מבודדת ממודל IgAN Murine

כדי להתחיל להסיר שעווה מקטעי פרפין שהוכנו בעבר של מדבקת פייר שבודדו מאימונוגלובולין A או עכבר מודל נוירופתיה IgA, טבלו כל חלק ברצף בשיפועי קסילן ואתנול במשך חמש דקות. לאחר מכן, שטפו את החלק במים מזוקקים. לשליפת אנטיגן, חממו תמיסת נתרן ציטראט במשך שתי דקות באוטוקלב.

לאחר מכן, מניחים את פרוסת הרקמה בתמיסה ומחממים אותה בטמפרטורה גבוהה במשך חמש דקות. לאחר הקירור, יש לדגור על החלק בתמיסת מי חמצן 3% למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר, הרחק מהאור. לאחר מכן, יש למרוח סרום עיזים 10% באופן שווה על מקטע הרקמה ולדגור במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר כדי לחסום את המקטע.

לאחר ניעור פתרון החסימה, להחיל כמות מתאימה של הנוגדן הראשוני מוכן על כל קטע. דוגרים על החלקים המונחים שטוחים בקופסה רטובה למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס. למחרת, כסו את הרקמה בטיפת נוגדן משני המסומן על ידי HRP ודגרו עליה בטמפרטורת החדר למשך 50 דקות.

לאחר מכן, החל תמיסה כרומוגנית DAB טרייה שהוכנה על כל חלק והמתן עד לפיתוח צבע. מכתימים את הקטע עם hematoxylin במשך כדקה. לאחר מכן שטפו את החלקים במשך 10 דקות במי ברז עד שהם חוזרים לצבע כחול.

להתייבשות, הניחו כל חלק ברצף בשיפועים של אתנול וקסילן למשך חמש דקות כל אחד. לאחר שכל החלקים מיובשים מעט, אוטמים כל חלק במסטיק ניטרלי. תוצאות אימונוהיסטוכימיות הראו כי סמני תאי B CD20 וביטוי CXCR5 היו גבוהים משמעותית בקבוצת מודל נוירופתיה IgA, בהשוואה לקבוצת הביקורת.

עם זאת, דיוקין יכול לעכב את הביטוי של סמנים מולקולריים.