הכנת כרומוזומים וניתוח קריוטיפ של תאי HELA בתיווך CRISPR/Cas9 CENP-E

בתור התחלה, קחו את תרביות תאי HeLa מוטנטיות מסוג Wild ו-CENP-E והוסיפו 300 ננו-מולארי קולכיצין לפני שתדגרו עליהן במשך חמש שעות. לאחר מכן, לדגור על התאים עם 0.25% trypsin-EDTA ב 37 מעלות צלזיוס במשך שלוש דקות, ולאסוף את התאים לתוך צינורות צנטריפוגה 1.5 מיליליטר. לאחר מכן, צנטריפוגו את התאים ב 1000 גרם במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר, להשליך את supernatants ולהוסיף 1.2 מיליליטר של 0.075 תמיסת אשלגן כלורי טוחנת.

לדגור על התאים ב 37 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות. בסוף הדגירה, צנטריפוגות את התאים, משליכות את הסופרנטנט, ומוסיפות 0.2 מיליליטר של תמיסה מקובעת לקידומת. מערבבים בעדינות במשך דקה אחת, ואז אוספים את כדורי התא כפי שהודגם קודם לכן, ומוסיפים 1.5 מיליליטר של תמיסה מקבעת בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות.

לאחר צנטריפוגה של התאים והשלכת הסופרנטנט, הוסיפו 0.6 מיליליטר של תמיסות הקיבוע כדי ליצור תרחיף תא. בזהירות לזרוק שלוש עד חמש טיפות של מתלי התא מ 35 עד 40 ס"מ על מגלשות הקרח. יבשו מיד את המגלשות באמצעות מנורת אלכוהול והכתימו אותן בתמיסת 10% של Giemsa למשך שבע דקות.

שטפו את המגלשות במים זורמים במשך שתי דקות, ולאחר מכן בחנו את הדגימות באמצעות מיקרוסקופ אור המצויד ביעד צמצם מספרי בהגדלה של פי 40 פי 40. ניתוח הקריוטיפ גילה ירידה במספר הכרומוזומים בתאי HeLa המוטנטיים CENP-E בהשוואה לתאי הסוג הפראי.