כדי להתחיל, להפשיר את דגימות פלסמה הדם מבודד ב 37 מעלות צלזיוס. העבירו 100 מיקרוליטר מכל דגימת פלזמה לצינורות של 1.5 מיליליטר. הוסיפו מיליליטר אחד של חוצץ HBSA נטול סידן לכל צינור.
צנטריפוגה הדגימות ב 20, 000 גרם במשך 15 דקות בארבע מעלות צלזיוס. שאפו את הסופרנאטנט ל-20 מיקרוליטר מבלי להפריע לכדור. לאחר מכן, הוסיפו מיליליטר אחד של מאגר HBSA נטול סידן לכל צינור.
ואז פיפטה למעלה ולמטה כדי ליצור מחדש את הכדור. מערבלים כל צינור למשך מספר שניות כדי להבטיח פיזור שווה של השלפוחיות החוץ תאיות. ואז צנטריפוגה ב 20, 000 גרם במשך 15 דקות בארבע מעלות צלזיוס.
שוב, שאפו את הסופרנאטנט ל-20 מיקרוליטר מבלי להפריע לכדור. לאחר מכן הרכיבו מחדש את הגלולה ב-80 מיקרוליטר של מאגר HBSA נטול סידן. פיפטה את המתלים למעלה ולמטה כדי לקבל מתלים אחידים.
כדי למדוד את פעילות רקמת השלפוחית החוץ תאית, ראשית, פיפטה 40 מיקרוליטר של דגימת השלפוחית החוץ תאית לשתי בארות של צלחת 96 בארות. לתוך הבאר הראשונה, להוסיף 11 מיקרוליטר של עכבר מעכב נגד TF IgG אנושי. לבאר השנייה, להוסיף 11 מיקרוליטר של עכבר שליטה IgG.
לאחר הדגירה, מוסיפים 50 מיקרוליטר של תמיסת תערובת הגורמים לכל באר. מכסים את הצלחת בסרט, ואז דוגרים על הצלחת במשך שעתיים בחום של 37 מעלות צלזיוס. הוסף 25 מיקרוליטר של חיץ HBSA EDTA כדי לעצור את ייצור פקטור Xa.
הרכיבו מחדש את המצע הכרומוגן במים מזוקקים לריכוז של ארבעה מילימולות. עכשיו להוסיף 25 מיקרוליטר של המצע כרומוגני לתוך כל באר. מכסים את הצלחת בסרט ולאחר מכן עוטפים אותה ברדיד אלומיניום.
לדגור על הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות. לאחר מכן, צנטריפוגה את הצלחת ב 1, 500 גרם במשך דקה אחת כדי להסיר כל בועות. לאחר מכן הניחו את הצלחת בקורא לוחות בגודל 405 ננומטר.
השתמש בעקומה הסטנדרטית הנוצרת עם גורם רקמה רקומביננטי משומן כדי להמיר את יצירת פקטור Xa של כל באר. לאחר מכן חשב את פקטור הרקמה תלוי גורם Xa דור. שישה מתוך 11 תורמים היו מגיבים לליפופוליסכריד בינוני עד גבוה, ואילו חמישה מתוך 11 תורמים היו מגיבים לליפופוליסכריד נמוך.
