שיטות התחדשות וברירה עבור Brassica napus DH12075 Regenerants וצמחי T1

בתנאים סטריליים, באמצעות פינצטה, מעבירים חמישה עד 10 קווי שורש שעירים של Brassica napus על צלחת המכילה מדיום רגנרציה. אטמו את המנה עם סרט דבק חדיר לגז ותרבית בטמפרטורה של 21 מעלות צלזיוס בפוטופריוס של יום ארוך. כל שלושה עד ארבעה שבועות, מעבירים את השורשים השעירים לצלחת פטרי עם מדיום התחדשות טרי.

התבונן בהיווצרות הקשתית לאחר כשבועיים וירה מהקלוס לאחר שבועיים נוספים של היווצרות קשוחה. התאימו אישית את הנבטים והעבירו אותם לקופסת תרבית הצמחים המכילה את מדיום הארכת הנבטים. לאחר שבועיים-שלושה, חותכים את שאריות הנבטים מהנבטים ומעבירים את הנבטים המוארכים לקופסת תרבית הצמחים המכילה מדיום השראת שורשים.

כעת העבירו את הצמח המושרש לאדמה ואקלמו אותו תחילה בפיטוטרון ואז העבירו את הצמח לחממה לפריחה. כדי להאיץ את הייצור של צמחי T1, אספו סיליקים המכילים זרעים ירוקים בוגרים ממתחדשים T0. תוך כדי עבודה בקופסת זרימה סטרילית, משטח לעקר את הסיליקים עם 70% אתנול.

הניחו את הסיליקים על מכסה צלחת או על מגלשה. באמצעות מחט 24 מד המורכבת על מזרק של מיליליטר, חתכו את הסיליקים לאורך שולי השסתום. פתחו את הקרפלים והניחו אותם בצד.

אספו את הזרעים הלא בשלים והעבירו אותם לצלחת המכילה מדיום נביטת זרעים. אטמו את הצלחת והניחו אותה בחדר טיפוח עד לנביטה. בהשוואה לסוג הפראי, התחדשות שורשים שעירים של B.napus הציגה פנוטיפ ננסי עם מערכות שורשים צפופות, עלים מקומטים וזמן פריחה שונה.