כדי להתחיל, הניחו את תבניות המיקרווול PDMS, תמיסת שטיפה נגד היצמדות ושחיקת מעבדה הכרחית במכסה מנוע של תרבית רקמות. כדי לשטוף את תבניות microwell PDMS, להשתמש פיפטה 1, 000 מיקרוליטר להוסיף 300 מיקרוליטר של פתרון שטיפה נגד דבקות לכל באר. ואז צנטריפוגה את הצלחת, 1, 620 גרם במשך שלוש דקות.
השתמשו במשאבת ואקום ופיפטה של פסטר כדי לשאוף את התמיסה. לאחר מכן, מניחים 500 מיקרוליטר של תרחיף התא בריכוז הרצוי במיקרו-בארות וצנטריפוגה את הצלחת ב -1, 620 גרם למשך שלוש דקות. מניחים את הצלחת באינקובטור לח כדי לאפשר היווצרות ספרואידים.
כדי לקצור את הספרואידים, באמצעות פיפטה 1, 000 מיקרוליטר, להוסיף בחוזקה 500 מיקרוליטר של מדיום שלם לתוך כל באר. פיפטה התווך הנוסף למעלה ולמטה בכל רביע שלוש עד ארבע פעמים כדי לעקור את הזרעונים. לאחר מכן השתמש פיפטה כדי לשאוף בעדינות את המדיום המכיל את הספרואידים לתוך צינור מיקרוצנטריפוגה.
מעבירים 50 מיקרוליטר של תרחיף הסטרואידים בצינור מיקרוצנטריפוגה. לאחר מכן הוסיפו לתוכו ברצף אקרילט PEG בעל 4 זרועות ודיתיול PEG. מערבבים את התמיסה המתקבלת על ידי פיפטציה למעלה ולמטה בערך 10 פעמים.
כדי להניב 100 מיקרוליטר של תמיסת קודמן הידרוג'ל PEG במשקל של 10% לפי נפח, פיפטה 20 מיקרוליטר של תמיסת קודמן הג'ל בין שתי שקופיות זכוכית מרופדות פרפילם המופרדות בספייסרים סיליקון של מילימטר אחד ודגרה על המגלשות עם תמיסת קודמן ג'ל כדי לאפשר ג'לציה. לאחר השלמת ג'לציית הידרוג'ל, באמצעות מרית, קלפו בעדינות את הג'לים ממגלשות הזכוכית המופרדות. הכניסו ג'ל אחד לכל באר לתוך צלחת של 24 בארות, וודאו שהמשטח המכיל את הספרואידים פונה כלפי מעלה.
מוסיפים 500 מיקרוליטר של מדיום שלם לכל באר כדי לטבול את ההידרוג'ל לחלוטין. מניחים את הצלחת מרובת הבארות באינקובטור לח כדי לגדל את התאים. הטכניקה המתוארת באמצעות תבניות microwell הביאה להיווצרות של spheroids עם צורות כדוריות ו polydispersity מבוקר היטב.
עבור ספרואידים עם 3, 300 תאים למיקרו-באר, גודל הספרואיד הממוצע היה כ-250 מיקרון והמעגליות הייתה גדולה מ-0.8, בהתחשב בערך של 1 ככדור מושלם. הקטרים הכדוריים היו תלויים בגודל המיקרו-באר ובמספר התאים למיקרו-באר.
