צביעה אימונוהיסטוכימית פלואורסצנטית מחזורית מרובת מחזורים של קטעי רקמה סרטנית

כדי להתחיל, השג שקופיות שהוכנו בעבר המכילות קטעי רקמה סרטנית. הכינו תערובת עבודה של נוגדנים ראשוניים. מוסיפים את קומפלקס הנוגדנים לאזור המגלשה ודגרים במשך שעה בטמפרטורת החדר.

לאחר מכן שטפו את המגלשה שלוש פעמים עם PBS של 0.1% במשך חמש דקות. הכינו תערובת נוגדנים משנית פלואורסצנטית. מוסיפים אותו בטיפה על המגלשה ודוגרים עליו בטמפרטורת החדר למשך שעה.

לאחר מכן בצע סבב שני של דגירה ראשונית של נוגדנים בטמפרטורת החדר למשך שעה. שטפו את המגלשה שלוש פעמים עם PBS של 0.1% טווין במשך חמש דקות כל אחת. ובאמצעות נייר סינון, להסיר עודפי מים מהיקף הרקמה.

באופן דומה, בצע סבב שני של דגירה משנית של נוגדנים ושטיפה כפי שהודגם קודם לכן. עכשיו, להוסיף מגיב אשלגן permanganate לרקמה. לאחר דקה, שטפו אותו במים זורמים במשך חמש דקות.

בצע התייבשות עם ריכוזים הולכים וגדלים של אלכוהול. לבסוף, הוסף DAPI כדי לכסות לחלוטין את קטע הרקמה ומקם תלוש כיסוי להדמיה מולטי-ספקטרלית. הדמיית מולטיפלקס אימונופלואורסנציה הצביעה על נוכחות של CD שלושה חיוביים, CD שמונה חיוביים, CD 20 תאים חיוביים ברקמת גרורות במוח של סרטן ריאות.