לאחר הדגירה של זרעי בוטנים, לאחר חיסון נבג Aspergillus flavus, השתמש במלקחיים כדי להסיר את חתיכות הזרעים מהאגר. הכניסו את חתיכות הזרעים לבקבוקוני חרוזים מסומנים של שבעה מיליליטר המכילים 13 חרוזי קרמיקה זירקוניום. עבור מיצוי של phytoalexins ו aflatoxins, בהתאם לגודל הזרע, להוסיף שניים או ארבעה מיליליטר של תערובת מים מתנול בקבוקון חרוזים לכתוש ב 5.5 מטר לשנייה במשך 45 שניות.
ואז צנטריפוגה ב 1, 860 x גרם במשך שלוש דקות, ולאסוף את supernatant בבקבוקון טרי. עבור ניתוח aflatoxins, באמצעות מוט זכוכית, לחתוך בזווית 90 מעלות, להכניס פוליאתילן נקבובי frit לתוך עמוד פוליפרופילן 1.5 מיליליטר. בעזרת כף מדידה בהתאמה אישית, הוסיפו 50 מיליגרם של ג'ל מגנזיום סיליקה לעמודה.
מכסים את העמוד עם פריטה זהה ודוחפים אותו למטה עם מוט זכוכית. הוסיפו 0.5 מיליליטר של סופרנאטנט לעמוד המיני הארוז בהתאמה אישית ואפשרו לתמצית להתנקז באמצעות כוח הכבידה לבקבוקון זכוכית של ארבעה מיליליטר. הוסיפו מיליליטר אחד של תערובת מי מתנול לעמוד כדי לשטוף זיהומים על ידי כוח הכבידה לאותו בקבוקון.
לאחר השלכת הפולטים המשולבים מהבקבוקון, מוסיפים 1.2 מיליליטר של אצטון אצטיל ניטריל מים, תערובת חומצה פורמית 88% לתוך העמוד כדי ללוט את מקטע אפלטוקסין לתוך בקבוקון זכוכית נקי. מתאדה ממס מהבקבוקון בזרם של חנקן בגוש חימום בטמפרטורה של 45 מעלות צלזיוס. לאחר האידוי, מכסים את הבקבוקון ומקררים אותו בקוביות כתושות למשך דקה.
הניחו את מסנני פיפטה פסטר בהתאמה אישית במבחנות חד פעמיות והניחו אותם על קרח כדי למזער אידוי בעת הסינון. ממיסים את השאריות היבשות במידה מדויקת של 0.25 עד 1.0 מיליליטר של תערובת מי מתנול. לאחר מערבולת, להעביר aliquot של 0.2 מיליליטר לתוך המסנן.
השתמש בגז חנקן כדי לזרז את הסינון לבקבוקון דוגם אוטומטי של 400 מיקרוליטר. הניחו את הבקבוקון בדוגמית האוטומטית של UPLC והגדירו את נפח ההזרקה ל-0.1 עד 3.0 מיקרוליטר. עבור פיטואלכסין, העבירו 200 מיקרוליטר של סופרנאטנט מבקבוקון הצנטריפוגה של שבעה מיליליטר לתוך מסנן פיפטה של פסטר.
לאחר הסינון, מניחים מכסה תואם עם מחיצת פוליטטרה-פלואוראתילן על הבקבוקון. להפרדות של אפלטוקסינים, יש לבצע שיפוע באמצעות מים, מתנול ואצטיל ניטריל עם הרכבים וזמני ריצה באחוזים ספציפיים. הגדר את קצב הזרימה ל- 0.45 מיליליטר לדקה ואת זמן הריצה ל- 9.5 דקות.
במחמם עמודת המערכת, הגדר את טמפרטורת העמודה ל -40 מעלות צלזיוס. כדי לכמת אפלטוקסינים, הגדר אורכי גל עירור ופליטה ל -362 ו -440 ננומטר, בהתאמה. לאחר מכן באמצעות שיטת עקומת הכיול ומדריך התוכנה UPCL, בצע את הניתוח כדי לקבוע ריכוזי אפלטוקסין בדגימות הבדיקה.
להפרדת סטילבנואידים, השתמש בשיפוע המורכב ממים, מתנול וחומצה פורמית 88% עם אחוזים ספציפיים תנאים וזמנים. הגדר את קצב הזרימה ל- 0.5 מיליליטר לדקה ואת זמן הריצה ל- 12 דקות. באמצעות שיטת עקומת הכיול, לקבוע את ריכוזי הסטילבנואידים ולהשוות את אזורי השיא של דגימת הבדיקה עם סטנדרטים טהורים ואותנטיים.
שיטת כימות אפלטוקסין מבוססת UPLC משיגה כימות רגיש של אפלטוקסין B1 עם מגבלה של שני פיקוגרמות לכל זריקה. תמצית מטוהרת של זרעים שנקטפו ממין ארקה פראי הראתה כימות חד משמעי של אפלטוקסינים. גישת עמודת ג'ל מגנזיום סיליקה מסירה ביעילות זיהומים ממקטע האפלטוקסין ומדגימה יעילות גבוהה של כימות בניגוד לשיטות קודמות.
בנוסף, שיטה זו מסייעת גם בכימות של phytoalexins בוטנים.
