mOrange-Nano גיוס ל-disiLID Functional Supported Lipid Bilayers (SLBs) ליצירת תבניות חלבונים

כדי להתחיל, לקחת מיקרו שקופית 18-באר זכוכית החדר התחתון, להוסיף 150 מיקרוליטר של הידרוקסיד נתרן לתוך כל באר של החדר לדגור במשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. לאחר מכן להסיר את הפתרון hydroxide נתרן ולשטוף את הבארות שלוש עד חמש פעמים עם מים deionized, ואחריו שלוש שטיפות עם חיץ המכיל 10 מילימולרי סידן כלורי. לאחר מכן, להוסיף 15 מיקרוליטר של SUV מוכן טרי לתוך בארות המכילות 150 מיקרוליטר חיץ עם 10 מילימולרי סידן כלורי.

לאחר 30 דקות של דגירה בטמפרטורת החדר, שטפו את ה-SLB לפחות שבע פעמים עם חיץ שאינו מכיל סידן כלורי. עבור פונקציונליזציה של SLBs biotinylated עם streptavidin, להוסיף פתרון של streptavidin. לאחר מכן שטפו את SLBs לפחות חמש פעמים עם חיץ כדי להסיר עודפי סטרפטווידין.

לאחר מכן, להוסיף b-disiLID לריכוז סופי של מיקרומולר אחד לבאר. לאחר 30 דקות של דגירה בטמפרטורת החדר, שטפו את עודפי החלבון עם חיץ לפחות חמש פעמים. לאחר מכן הוסף mOrange-Nano לריכוז סופי של 200 ננו טוחנת.

מכסים את הדגימה ברדיד אלומיניום ושומרים בחושך. לאחר מכן, הניחו את המגלשה מתחת למיקרוסקופ הפלואורסצנטי. הגדר את הלייזר בגודל 552 ננומטר כדי להמחיש את mOrange-Nano.

מיקרוסקופ פלואורסצנטי גילה mOrange-Nano בתבנית SLBs המתפקדים עם b-disiLID. לאחר הפעלת התמונה, יש עלייה מהירה באות הפלואורסצנטי בערוץ הכתום באזור העניין. פלואורסצנטיות של mOrange-Nano עולה לאחר כל הפעלת תמונה רוויה תוך 120 שניות ולאחר מכן יורדת לרמות רקע ב-120 השניות הבאות.