דיסקציה של עין ארנב שלם והכנת רקמת עין לניתוח היסטולוגי

לאחר enucleation transconjunctival של עין הארנב, מיד לשים 50 מיליליטר של 4% paraformaldehyde ו PBS על קרח. לאחר 15 דקות, העבירו את העין לצלחת דיסקציה של 100 מ"מ ומלאו את המנה ב-PBS כדי למנוע מהעין להתייבש. תחת מיקרוסקופ דיסקציה, באמצעות להב כירורגי, מתחילים לבצע חתך מילימטר אחד קדמי ללימבוס, תוך שמירה על מקבילה למישור הקשתית.

מכניסים מספריים מעוקלים לחתך הראשוני וממשיכים לחתוך היקפית, תוך שמירה על מרחק מילימטר אחד מהלימבוס. לאחר מכן להסיר את הקרנית עם מלקחיים לנגב בעדינות PBS עם מגבון מעבדה. הניחו את הקרנית בתמיסת 30% סוכרוז בטמפרטורת החדר להגנה קריואקטיבית.

בצע חיתוך ראשוני עם מספריים מעוקלים דרך הקשתית. לאחר מכן לחתוך סביב העין, בדומה להסרת הקרנית, כדי להפריד את הקשתית משאר הרקמה. הסר את הקשתית עם מלקחיים ונגב בעדינות עודפי PBS עם מגבון המעבדה.

הניחו את הקשתית בתמיסת 30% סוכרוז בטמפרטורת החדר להגנה קריואקטיבית. לאחר הסרת הקרנית והקשתית, הניחו את העין ב-50 מיליליטר של 4% פאראפורמלדהיד והניחו אותה על שייקר לתסיסה עדינה. השאירו את העין ב-4% פרפורמלדהיד בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה.

למחרת, מניחים את העין בכלי דיסקציה וממלאים את המנה ב- PBS. תחת מיקרוסקופ דיסקציה, השתמש במלקחיים כדי לתפוס בזהירות את קפסולת העדשה הקדמית. לאחר מכן הכנס בזהירות את המספריים לחדר האחורי, כיוון הלהבים אחורית לאורך העדשה.

בצע חיתוך ראשוני דרך זונולי העדשה עם מספריים מעוקלים. המשך לבצע חתכים קטנים בתבנית היקפית דרך זונולי העדשה. כדי לאשר את הסרת העדשה, אחזו בעדינות בכמוסת העדשה הקדמית במלקחיים ונסו להרים אותה.

לאחר ההפרדה, הניחו את העדשה בתמיסת 30% סוכרוז בטמפרטורת החדר להגנה קריואקטיבית. הכניסו את העין ל-50 מיליליטר של 30% סוכרוז ו-PBS בארבע מעלות צלזיוס למשך 24 עד 48 שעות להגנה בהקפאה. כדי לזרז את ההגנה מפני קריוהגנה, החלף את תמיסת הסוכרוז הראשונית בתמיסת סוכרוז טרייה לאחר שמונה עד 12 שעות.