הטבעה וקריוסקציה של רקמת העין בתרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית להדמיית פלואורסצנטיות

לאחר השלמת ההגנה הקריורו של עין הארנב, העבירו אותה מתמיסת 30% סוכרוז לצלחת דיסקציה של 100 מ"מ. תחת מיקרוסקופ ניתוח, בזהירות להפוך את העין כדי להסיר תמיסת סוכרוז עודף מן החלק הפנימי של העין. בעזרת מגבון, נגבו בעדינות את עודפי תמיסת הסוכרוז מהחלק החיצוני של העין, מלאו תבנית הטבעה חד פעמית בטמפרטורת חיתוך אופטימלית או תרכובת OCT לעומק של 0.5 עד סנטימטר.

מניחים את העין בתבנית ההטבעה הפונה כלפי מעלה וממלאים לאט לאט את החלק הפנימי של העין בתרכובת OCT, תוך הימנעות מהיווצרות בועות. ברגע שהעין יוצאת בתרכובת OCT, ואינה נוגעת במשטחים הפנימיים של התבנית, עוטפים את תבנית ההטבעה בפרפין ומאחסנים אותה בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה. למחרת, מניחים את תבנית ההטבעה בכלי דיסקציה.

במידת האפשר, הסירו בעדינות את תרכובת ה-OCT מתוך העין בעזרת מגבון. מעבירים את העין לתבנית הטבעה חדשה מלאה בתרכובת OCT טרייה. לאחר מכן מלאו את התבנית כפי שנעשה בעבר כדי להבטיח שמדיום ההטבעה הסופי נקי מפסולת או פגמים.

תייגו את התבנית למטרות התמצאות. מקמו את העין כלפי מעלה בתבנית הקריו, כך שתרכובת OCT מצפה את הרשתית הפנימית. השתמש בראש עצב הראייה כנקודת ציון לקביעת החלק העליון של העין הניחו את תבנית ההטבעה המסומנת על קרח יבש, וודאו שהעין אינה נוגעת במשטחים הפנימיים של העובש או חשופה לאוויר.

הרכיבו את הבלוק על ההקפאה כאשר החלק העליון של העין פונה למעלה והחלק התחתון למטה. כאשר הקרנית והקשתית הנותרות פונות ימינה או שמאלה. מקם להב רענן במקביל לציר האנכי של העין כדי לחתוך אותו.

לאחר חיתוך החלקים וייבוש למשך הלילה, מניחים מגלשה במקפיא בטמפרטורה של 80 מעלות. התמונות הפלואורסצנטיות של קריוסקציה רשתית שלמה של עין הארנב הדגימו שכבת אפיתל פיגמנט פיגמנט רשתית אחידה ללא ניתוק משמעותי משכבת הפוטורצפטור שמעליה. תמונת שדה בהיר של קטע הרשתית מדגימה עוד יותר מורפולוגיית רשתית שלמה של כל השכבות.