אנדותל של וריד הטבור האנושי (HUVEC) אנדוטליזציה של פלטפורמת כלי דם על צלחת (VOP)

כדי להתחיל, לטבול בקבוקון של HUVECs בהקפאה באמבט מים 37 מעלות במשך שתי דקות. לאחר מכן שטפו את הבקבוקון עם 70% אתנול כדי למנוע זיהום. פיפטה חמישה מיליליטר של ECGM שחומם מראש לתוך צינור חרוטי 15 מיליליטר.

בעזרת מיקרופיפטה, מעבירים בזהירות את התאים המופשרים מהבקבוקון לתוך הצינור החרוט. לאחר מכן הוסף מיליליטר אחד של מדיום טרי שחומם מראש לקריוביאל כדי לשטוף את החלק הפנימי ולהעביר את כל התאים הנותרים לתוך הצינור החרוט. לאחר השלכת supernatant, להשעות מחדש את התאים ב 10 מיליליטר של מדיום טרי.

לאחר מכן להעביר את התאים צלוחיות T75. לדגור את הבקבוק באינקובטור פחמן דו חמצני לח ב 37 מעלות צלזיוס. שטפו את תאי HUVEC המשתלבים 90% בבקבוק T75 עם 10 מיליליטר DPBS.

לאחר מכן הוסף מיליליטר אחד של 0.25% TE לצלוחית. לאחר הדגירה, טפחו בעדינות על דפנות הבקבוק והוסיפו חמישה מיליליטר של תמיסת נטרול טריפסין. לאחר מכן להעביר את התאים צינור חרוטי 15 מיליליטר.

לאסוף את התאים הנותרים עם חמישה מיליליטר של ECGM טרי ולהעביר אותם לתוך צינור חרוט. עכשיו צנטריפוגה את הצינור החרוטי ב 250 x גרם במשך שלוש דקות כדי לאסוף את גלולת התא. לאחר השלכת הסופרנטנט, השהה מחדש את גלולת התא במיליליטר אחד של אקג"מ טרי וספור את התאים.

לאחר צנטריפוגה שוב, להשליך את supernatant ולהשהות מחדש את התאים ב 90 מיקרוליטר של ECGM טרי. לאחר מכן, ואקום לזמן קצר לשאוב את התעלות של הכלים המודפסים על צלחת כדי לנקות את לומן. עם micropipette, לטעון בעדינות את הערוץ עם 15 מיקרוליטר של השעיית תא HUVEC.

מניחים את הצלחת שטוחה בתוך אינקובטור למשך שעתיים. לאחר מכן, להפוך את הצלחת ל 180 מעלות, לשמור אותו במצב שטוח במשך השעתיים הבאות. לאחר ארבע שעות, שטפו את התעלה עם DPBS כדי להסיר תאים לא דבקים ומתים.

ואז פיפטה שני מיליליטר של ECGM טרי לתוך כל באר. מקם את התרבות הדינמית על נדנדה בזווית הטיה של 10 מעלות ובחמישה סל"ד. תאי HUVEC התחברו במהירות והתרבו כדי לכסות את פני השטח הלומינליים של תעלות כלי הדם של VOP.

ההבשלה של האנדותל אומתה על ידי immunostaining עבור CD31 5 ימים לאחר זריעת תאים, אשר הדגימה את הלוקליזציה של CD31 בצמתים הצפופים.