התכוננו להדמיה באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי יומיים לאחר טרנספקציה של נוירונים ראשוניים בהיפוקמפוס. חממו את חיבור תא התא החי פי 60 סובייקטיבי ואת שמן העדשה ל-37 מעלות צלזיוס ואזנו את התא ל-5% CO2. באמצעות חתיכות העין, לזהות נוירונים נגועים בתעלה המכילה את חלבון המטען.
לאחר מכן, לחץ על סריקה כדי לצלם את הנוירונים ולזהות את המקטע הראשוני של האקסון של ערוץ SCI-5. הגדר את שדה הראייה לתיבה מלבנית של 32 על 128 פיקסלים והזז אותה כדי לצלם אזור של האקסון בגודל 50 עד 150 מיקרון דיסטלי למקטע הראשוני של האקסון . רשום את כיווניות הובלת המטען ואת כיוון החזר ההשקעה, ולאחר מכן לחץ על שמירה בשם כדי לשמור אותו כקובץ.
שים לב שהנקודות בתיבה יופיעו בחלק העליון והימני בתמונות הבאות. הקלט את הצד של התמונה הקרוב ביותר לגוף התא ואת הצד הקרוב ביותר למסוף האקסון כדי להבטיח כיוון נכון של הקומגרף Polyline. הגדר את עוצמת הלייזר 561 ל- 1.40, את חור הסיכה ל- 7.8, את הגודל ל- 128 פיקסלים מרובעים ואת המהירות ל- 32 פריימים לשנייה.
התאם את הרווח כדי לדמיין את ההובלה של שלפוחיות מטען בודדות מבלי להיות מוסתר על ידי אות רקע. בחר צייר החזר השקעה מלבני מהתפריט הנפתח החזר השקעה וצייר את החזר ההשקעה כך שיכסה את כל שדה הראייה. לאחר מכן לחץ לחיצה ימנית ובחר השתמש כגירוי ROI S1. לאחר מכן, בכרטיסייה הגדרת ND, לחץ על רכוש תמונה כדי לאסוף את תמונת הייחוס לגירוי מראש.
לאחר מכן הגדר את הגירוי ל- ROI S1, מרווח ללא עיכוב, משך של 1.64 שניות ולולאות לשבע. לאחר מכן לחץ על רכוש תמונה כדי לאסוף תמונת התייחסות לגירוי פוסט. בחר המתנה, ללא רכישה, שתי דקות כדי לספק תקופת התאוששות למטען פלואורסצנטי כדי לאכלס מחדש את החזר ההשקעה המולבן.
בחר מרווח זמן לרכישה, ללא עיכוב, משך חמש דקות, לולאות, 8, 615. לחץ על הלחצן החל הגדרות גירוי בכרטיסיה הגדרת ND, ולאחר מכן הפעל כעת. כמו כן, אספו סרטוני העברה משני תאי עצב לצורך ניתוח.
אפס את שדה הראייה לתמונה כולה ולאחר מכן אסוף תמונה של תא העצב המלא בערוצים 561 ו- 647 עם התיבה החזר השקעה כלולה. רשום את קואורדינטות XY שבהן התמונה צולמה לאישור לאחר קיבוע ביטוי החלבון. הדמיה חיה של תא עצב נגוע המבטא את חלבון המטען סינפטופיזין של mAPL בוצעה באמצעות פרוטוקול זה.
גם התחום החיצוני של נוירו פאסין בקטע הראשוני של האקסון סומן. הדמיה של הובלת מטענים בוצעה באזור האקסונלי של עניין. ניתוח נוסף לאחר הדמיה אימונופלואורסנציה אישר את הביטוי המשותף של חלבון טאו וסינפטופיסין mAPL.
