כדי להתחיל, שלפו שתי צינוריות שימור בהקפאה המכילות תאי גזע מזנכימליים אנושיים קפואים שמקורם בשומן אנושי במעבר השלישי מחנקן נוזלי. יש להסעיר אותם באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס עד להפשרה מלאה. לאחר מכן יש לחטא את הצינורות באמצעות 75% אלכוהול.
הניחו את צינורות החיטוי על שולחן נקי במיוחד. באמצעות פיפטה, שואפים את תרחיף התא ומעבירים אותו לצינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר. צנטריפוגה את הצינור בצנטריפוגה במהירות נמוכה של 250 גרם וארבע מעלות צלזיוס למשך חמש דקות.
בינתיים, הכינו ארבע מנות תרבית של 10 ס"מ והוסיפו תשעה מיליליטר של מדיום לכל מנה. סמן את השם, סוג התא, הדור ותאריך הניסוי בכל מנה. ואז לחמם אותם באינקובטור תאים תרמוסטטיים של 37 מעלות צלזיוס.
בתום חמש הדקות של הצנטריפוגה, יש לחטא את צינור הצנטריפוגה לפני העברתו לשולחן נקי במיוחד. בעזרת פיפטה, להסיר את supernatant ולהוסיף ארבעה מיליליטר של תווך כדי להשיג את ריכוז התא הרצוי. בעדינות להתסיס את הפתרון עד שהוא מתפזר באופן שווה.
לאחר מכן, הוסיפו מיליליטר אחד של תרחיף תאים לכל צלחת שחוממה מראש ונערו אותה על ידי התסיסה על משטח ישר בתבנית צלב. התבוננו בתאים בהגדלה של פי 40 תחת מיקרוסקופ אופטי לפני שתכניסו את הכלים לאינקובטור של 37 מעלות צלזיוס. ביום השני, התבוננו במצב התא תחת המיקרוסקופ האופטי בהגדלה של פי 40 לפני שתמשיכו להכנת אמצעי החלפה.
לאחר החיטוי, העבירו את כלי התרבית לשולחן נקי במיוחד עם רמת בטיחות ביולוגית 2. מוציאים את המדיום מכל מנת תרבית. שטפו את התבשיל בעדינות עם שני מיליליטר של תמיסת PBS פעמיים והוסיפו 10 מיליליטר בינוני לכל מנה.
מעבירים את התאים לאינקובטור עד שהם מוכנים לאיסוף סופרנטנטים.
