בידוד שברים מיטוכונדריאליים מועשרים מתרביות תאים ומדגימות רקמות של בעלי חיים קטנים לצורך בדיקות פעילות ג'ל

כדי להתחיל, השהה מחדש את גלולת התא הארוזה בנפח של חיץ היפוטוני השווה פי שבעה מנפח כדורי התא. מעבירים את תרחיף התא להומוגנייזר של Potter-Dounce, ודגרים על קרח במשך שתי דקות, מה שמאפשר לתאים להתנפח. שברו את קרומי התא על ידי ביצוע 8 עד 10 פעימות בהומוגנייזר המחובר למזיק טפלון מונע מנוע המסתובב ב-600 סל"ד.

הוסף נפח שווה של חיץ היפרטוני לתרחיף התא כדי ליצור סביבה איזוטונית. מעבירים את ההומוגנט לצינור של 10 עד 15 מיליליטר. צנטריפוגה ב 1, 000G במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס ולאסוף את supernatant לתוך צינור פוליפרופילן 1.5 מיליליטר.

כדי לאסוף את החלק הגולמי המיטוכונדריאלי, צנטריפוגה במיקרופוגה ב 16, 000G למשך שתי דקות בארבע מעלות צלזיוס. השליכו את הסופרנטנט, והשהו מחדש את הגלולה המועשרת במיטוכונדריה עם 0.5 מיליליטר של חיץ A. שלבו את תכולתם של שני צינורות לאחד וצנטריפוגה כפי שהודגם קודם לכן. לאחר הצנטריפוגה האחרונה, יש להשהות מחדש את הגלולה ב-300 מיקרוליטר של חיץ A.לכמת את ריכוז החלבון המיטוכונדריאלי באמצעות בדיקת ברדפורד.

באמצעות מספריים, לחתוך את 20 עד 30 מיליגרם של רקמת בעלי חיים. לשטוף את הרקמה שלוש עד ארבע פעמים בחיץ הומוגניזציה בעזרת מסננת, תוך הקפדה על הימנעות מאובדן חתיכות קטנות יותר. מעבירים את חתיכות הרקמה עם חיץ להומוגנייזר.

עבור רקמות כבד, טחול וכליות, בצע ארבע עד שש משיכות למעלה ולמטה ב- LVM Potter עם מזיק טפלון מונע מנוע ב -600 סל"ד.