כדי להתחיל, הכינו את תמיסת הציפוי המתאימה בחיץ של Tyrode שונה וציפו מיקרו-מגלשה בעלת שמונה בארות על ידי דגירה במשך שעתיים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן שטפו את המגלשה המצופה פעמיים עם החיץ של Tyrode שונה. דגרו על המיקרו-גלישה במאגר של Tyrode שונה המכיל חמישה מיליגרם למיליליטר BSA למשך 30 דקות לפחות כדי להרוות הידבקות לא ספציפית.
כדי להכין טסיות שטיפה, צנטריפוגה ציטראט נוגדי קרישה דם שלם ב 200 גרם במשך 20 דקות כדי לקבל פלזמה עשירה טסיות. לאחר מכן הוסיפו אינדומתצין ו-PGE1 לפלזמה ולצנטריפוגה העשירה בטסיות דם ב-500 גרם למשך 10 דקות. השהה מחדש את גלולת הטסיות המתקבלת בחיץ HEPES של Tyrode שונה ב 37 מעלות צלזיוס כדי להשיג צפיפות של ארבע פעמים 10 בחזקת שבע טסיות למיליליטר.
אפשרו לטסיות המבודדות לנוח במשך 30 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, הוסף תמיסת DHE לתרחיף הטסיות כדי להשיג ריכוז סופי של 10 מיקרומולר ולדגור ב 37 מעלות צלזיוס למשך דקה אחת. לאחר הדגירה, הסר את הפתרון החוסם מהמיקרקופית ומקם אותה על במת המיקרוסקופ להדמיה.
לאחר מכן מוציאים בעדינות את טסיות הדם. השתמש בעדשת טבילת שמן 40X במיקרוסקופ קונפוקלי הפוך כדי לפקח על ההמרה של DHE ל- 2-hydroxyethidium. תמונה במשך 10 דקות, איסוף תמונות כל 10 שניות.
כדי לפקח על ייצור אניון סופראוקסיד בתגובה לאגוניסט, הוסף אגוניסט מסיס 10 דקות לאחר ניפוק טסיות הדם ואסוף תמונות פלואורסצנטיות למשך 10 דקות נוספות. באמצעות פרוטוקול זה, הדור של רדיקלים סופראוקסיד נחקר במהלך הידבקות טסיות לקולגן או פיברינוגן, ומטסיות שהודבקו ל-PLL מגורה עם טרומבין.
