כדי להתחיל, לארגן את החומרים הניסיוניים הנדרשים על פלטפורמת העבודה. הוסף 100 מיקרוליטר של תמיסת ג'לטין סטרילית 0.4% לבארות של צלחת תחתונה שקופה היטב 96 בעלת דופן שחורה. דוגרים על הצלחת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ופחמן דו חמצני של 5% למשך 30 דקות.
תחת מיקרוסקופ הפוך, לאשר כי תאי אנדותל בבקבוק T75 הם 80 עד 100% נפגשים. הסר את המדיום המלא DMEM מן הבקבוק באמצעות שאיפה. כדי לשטוף את התאים, להוסיף 10 מיליליטר של PBS ולנער בעדינות את הצלוחית.
החלף את PBS בחמישה מיליליטר של תמיסת דיסוציאציה של תאים. דוגרים על הבקבוק בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני למשך כ-12 דקות. הקישו על הבקבוק לאחר שש דקות.
כדי להקל על דיסוציאציה. מוסיפים חמישה מיליליטר של מדיום DMEM שחומם מראש לצלוחית, ומערבבים את תרחיף התא. באמצעות פיפטה סרולוגית של 10 מיליליטר, מעבירים את תרחיף התא לצינור סטרילי של 50 מיליליטר וצנטריפוגה ב -150 גרם למשך חמש דקות.
בינתיים, באמצעות פיפטה כומר מחובר ואקום, שואפים את תמיסת הג'לטין מתוך צלחת באר 96. לאחר צנטריפוגה של התאים, להסיר את supernatin מן הצינור מבלי להפריע את הכדור. באמצעות פיפטה סרולוגית, להוסיף שמונה מיליליטר של מדיום DMEM מלא טרי לצינור, ו פיפטה עדינה את המתלה כדי לפרק את גלולת התא.
ספור את התאים באמצעות כחול trippen על hemocytometer. הוסף מדיום שלם DMEM כדי ליצור צפיפות של 600, 000 תאים לכל השעיה מיליליטר. ערבבו את תרחיף התא על ידי היפוך עדין של הצינור.
הוסף את תרחיף התא למאגר פיפטה רב ערוצי 50 מיליליטר. כל 30 שניות, נענעו בעדינות את המאגר מצד לצד כדי לערבב את המתלה והשתמשו בפיפטה רב ערוצית כדי להוסיף 100 מיקרוליטר לכל באר של צלחת 96 באר מצופה בג'לטין. החליפו את מכסה הצלחת השקוף ונערו בעדינות את הצלחת על ידי החלקתה על פני מכסה המנוע הסטרילי מצפון לדרום וממזרח למערב.
לדגור על הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני במשך 16 עד 24 שעות.
