כדי להתחיל, להכין שש מדיה גידול נמטודות או לוחות אגר NGM. למחרת, הוסיפו 200 מיקרוליטר של תרבית Escherichia coli OP50 לצלחות, ודגרו בטמפרטורת החדר למשך יום אחד. לאחר הדגירה, הוסיפו 200 מיקרוליטר של 0.025 D-גלוקוז מולארי לארבע צלחות אגר NGM, ואפשרו להן להתייבש בטמפרטורת החדר.
העבירו שלושה עד ארבעה נתחים מבוימים שונים של Caenorhabditis elegans Bristol N2 מצלחת אגר NGM תחזוקה לצלחת NGM חדשה שיושבת עם E.coli OP50. לדגור על תולעי C.elegans ב 20 מעלות צלזיוס עם לחות של יותר מ 95% במשך שלושה ימים. שלושה ימים לאחר מכן, מוסיפים מים מזוקקים לצלחת, ובעזרת פיפטה פסטר אוספים את התולעים.
מעבירים את התולעים שנאספו לצינור צנטריפוגה של 50 מיליליטר, ומאפשרים להן לשקוע באמצעות כוח הכבידה לפני הוצאת הסופרנאטנט מהצינור. לאחר מכן, להוסיף מים מזוקקים לתוך הצינור. לאחר שנפח הצינור מצטמצם לחמישה מיליליטר, מוסיפים 10 מיליליטר של תמיסת הלבנה ומנערים במרץ את הצינור במשך כשש דקות.
לאחר מכן, מלא את הצינור לקיבולת של 50 מיליליטר עם חיץ M9, וצנטריפוגה ב 1400 גרם למשך שלוש דקות. הסר את supernatant עד חמישה מיליליטר ולהוסיף 45 מיליליטר של חיץ M9 לתוך הצינור. לאחר השטיפה האחרונה, מוציאים את הסופרנאטנט עד ל-15 מיליליטר ומעבירים את יתרת הנוזלים לצלחת.
התבוננו בצלחת מתחת למיקרוסקופ לשחרור ביצים, והניחו את הצלחת על 20 מעלות צלזיוס עם לחות של יותר מ 95% במשך 14 שעות. לאחר הדגירה, לאסוף את התולעים לתוך צינור 15 מיליליטר. באמצעות פיפטה אוטומטית, להוסיף 10 מיקרוליטר של תולעים מסונכרנות לשקופית מיקרוסקופ.
לספור את מספר התולעים ולחשב את הנפח הדרוש כדי להשיג 500 עד 1000 תולעים למיקרוליטר. העבירו 500 עד 1000 זחלים בשלב הראשון, או L1, תולעים מסונכרנות ללוחות אגר NGM. הוכן בעבר וזרע עם E.coli OP50 וגלוקוז.
דוגרים על הצלחת בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס עד שהתולעים מגיעות לשלב הזחל הרביעי, או L4. לאחר 48 שעות, מוסיפים חיץ M9 לצלחת, ובעזרת פיפטה פסטר, אוספים זחלי L4. מעבירים את הזחלים שנאספו לצינור של 1.5 מיליליטר. עצב את לוח הזמנים של הבדיקה עבור שלוש קבוצות ניסוי.
מעבירים כ-100 מיקרוליטר של תרחיף תולעים מכל קבוצה למיקרו-צינור של 1.5 מיליליטר המכיל 400 מיקרוליטר של תמיסת יוד של 5% לוגול. מערבבים בעדינות את הצינור במיקסר למשך חמש דקות. לאחר הוצאת הצינור מהמיקסר, המתינו עד שתולעים ישקעו על ידי כוח הכבידה.
שטפו את התולעים שלוש פעמים עם מיליליטר אחד של חיץ M9. לאחר השעיה מחדש של התולעים ב 100 מיקרוליטר של חיץ M9. מעבירים כ-50 מיקרוליטר למגלשה.
הניחו את החלקת הכיסוי על המגלשה. לאחר מכן, במיקרוסקופ סטריאו, בחר את מצב שדה בהיר והתבונן בתולעים. שמרו את התמונות המכילות לפחות 10 תולעים לכל קבוצה כקובץ jpeg.
לבסוף, לחשב את תוכן הגליקוגן מבוסס על מכתים יוד של תולעים. תצפיות חזותיות של בדיקת תכולת הגליקוגן גילו כי תולעים בצום הציגו כתם חלש יותר בהשוואה לאלו שניזונו עם E.coli OP50 ואלו עם E.coli OP50 ו- D-glucose, אשר הציגו את הכתמים החזקים ביותר.
