דיסוציאציה תאית של עוברי מורין מבודדים לגסטרולציה לצורך ריצוף חד-תאי

המשך לבצע את דיסוציאציה התאית של עוברי מורין מבודדים לאחר אישור הגנוטיפים. באמצעות פיפטה P200, הוסף 50 מיקרוליטר DMEM עם 10% FBS לצינור חדש של 1.5 מיליליטר. לאחר איגום עוברים עם אותו גנוטיפ לתוך הצינור החדש, הניחו אותו על קרח.

אפשרו לעוברים המצטברים להתיישב לתחתית הצינור, ולאחר מכן שטפו את העוברים באמצעות 50 מיקרוליטר של DPBS והמתינו עד שהם ישקעו לפני שתוציאו כמה שיותר DPBS מבלי להסיר את העוברים. לאחר מכן, להוסיף 100 מיקרוליטר של טריפסין לעוברים המאוגמים לדגור ב 37 מעלות צלזיוס בבלוק חום במשך חמש דקות. העבירו בעדינות את צינור ה-1.5 מיליליטר כל 30 שניות כדי לעזור לתאים להתנתק.

לאחר חמש דקות, נטרלו את הטריפסין עם 300 מיקרוליטר DMEM המכיל 10% FBS. צנטריפוגה את העוברים ב 100 גרם במשך ארבע דקות בטמפרטורת החדר. להשעות מחדש את הגלולה הקטנה המתקבלת ב 40 מיקרוליטר של DMEM עם 10% FBS ומניחים את הצינור על קרח.

מערבבים חמישה מיקרוליטרים של תרחיף התא עם חמישה מיקרוליטרים של טריפאן כחול בצינור חדש של 1.5 מיליליטר, ומפיפטים את התערובת למעלה ולמטה ביסודיות. העבר את התערובת לשקופית כדי לקבוע את מספר התא ואת הכדאיות באמצעות מונה תאים אוטומטי. לבסוף, המשך לחלוקה של תא בודד באמצעות שבב מיקרופלואידי, בהתאם לפרוטוקול היצרן.