גנוטיפ באותו יום של עוברי מורין מבודדים

לאחר בידוד שק החלמון הקרבי מעובר העכבר, המשיכו לעכל כל שק חלמון בתגובת שרשרת פולימראז בעלת שמונה פסים או צינור PCR. באמצעות פיפטה P20, הוסף 19.3 מיקרוליטר של מאגר DNA ליזיס תבנית PCR, ו 0.7 מיקרוליטר של 0.2 מיקרוגרם למיליליטר פרוטאינאז K לכל דגימת שק חלמון. מערבלים את הדגימה למשך 10 שניות.

ובאמצעות מיני צנטריפוגה עם מתאם רצועה, סובב את הדגימות ב- 1000 G למשך 10 שניות. הניחו את צינור ה-PCR בעל שמונה הפסים בבלוק חום של 85 מעלות צלזיוס למשך 45 דקות תוך ערבול במשך חמש שניות כל חמש דקות. לאחר 45 דקות, סובב את רצועת הצינור שוב כלפי מטה ב- 1000 G למשך 10 שניות לפני שתמשיך עם PCR לזיהוי גנטי רצוי.

כדי לבצע את תגובת ה-PCR עבור Cre genotyping, הכינו תערובת מאסטר PCR המכילה את הרכיבים המוצגים לכל שמונה רצועות PCR tube עבור כל שק חלמון. המשך להפעיל את תוכנית הגברת המחזור התרמי PCR באמצעות המחזור המוצג. לאחר מכן הפעל את מוצרי ה- PCR על ג'ל אגרוז 1% כדי להסיק מסקנות גנוטיפ.

אחסנו את שאריות דגימות שק החלמון המעוכל במקפיא של מינוס 20 מעלות צלזיוס לאחסון לטווח ארוך. כאשר מוצר ה-PCR הופרד על ג'ל אגרוז, נראו גדלי פרגמנטים צפויים עבור אללים מסוג LoxP ובר, כמו גם אלל Cre.