בידוד אקסוזומים מתאי סרטן אפיתל בשחלות עכבר ליצירת מדבקת מיקרו-מחט

כדי להתחיל, לקחת תאי סרטן אפיתל השחלות עכבר בתרבית. מוציאים את מדיום התרבית מכלי הפטרי ושוטפים פעמיים עם DPBS. הוסף 20 מיליליטר של Dulbecco Modified Eagle Medium ללא FBS ותמיסת פניצילין-סטרפטומיצין.

יש לדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו-חמצני למשך 48 שעות. לאחר מכן לאסוף את supernatant תרבית התא מ 20 צלחות פטרי בקוטר 15 ס"מ. צנטריפוגה ב 300 גרם למשך 10 דקות בארבע מעלות צלזיוס ולאסוף את supernatant.

צנטריפוגה את supernatant ב 2, 000 גרם במשך 10 דקות בארבע מעלות צלזיוס, ולאסוף את supernatant כדי להסיר פסולת תאית. כעת הפעל את משאבת הוואקום וחבר אותה לכניסת האוויר של מערכת סינון הוואקום. סנן את supernatant דרך קרום polyethersulfone 0.22 מיקרון כדי להסיר שלפוחיות או זיהומים גדולים מ 0.22 מיקרון.

הוסף 15 מיליליטר של supernatant מסונן לצינור הפנימי של צינור אולטרה סינון 100 קילודלטון. צנטריפוגה ב 3, 500 גרם במשך 10 דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן הסר את הנוזל מהצינור החיצוני.

לאחר מכן, לאסוף את הנוזל מן הצינור הפנימי. הוסף מיליליטר אחד של DPBS לצינור הפנימי. פיפטה שוב ושוב כדי להשעות אקסוזומים, ולאחר מכן לאסוף אותם.

צנטריפוגה את הנוזל ב 10, 000 גרם במשך 60 דקות בארבע מעלות צלזיוס. מעבירים את הסופרנאטנט לצינור צנטריפוגה מהיר בקוטר שישה מיליליטר ואוטמים אותו באמצעות אוטם חום. יש לפתוח את הצינור לאחר אולטרה-צנטריפוגה של הסופרנאטנט למשך שעתיים.

לאחר הסרת הסופרנאטנט, השהה מחדש את הגלולה ב -100 מיקרוליטר של DPBS כדי לקבל את הפתרון האקזוזום.