כדי להתחיל, להכין קוביות שעווה מעכברים מומתים שהוזרקו עם גלולות Xiaoyao. חותכים את קוביות השעווה לשישה מקטעים רציפים בעובי מיקרומטר, ואופים את הפרוסות בחום של 70 עד 72 מעלות במשך 30 עד 60 דקות. מעבירים את הפרוסות לתמיסת הסרת השעווה למשך שמונה דקות, ואז מייבשים פעמיים באתנול נטול מים 75% למשך חמש דקות כל אחת לפני שטיפה ב-PBS במשך חמש דקות.
עכשיו לבצע תיקון בלחץ גבוה EDTA במשך 15 דקות. לאחר שטיפה עם PBS, יש להוסיף 3% מי חמצן לרקמה ולדגור במשך 10 דקות. שטפו את הרקמה שלוש פעמים עם PBS במשך חמש דקות כל אחת.
בעזרת עט אימונוהיסטוכימי, ציירו עיגול סביב הרקמה. לאחר שטיפת הרקמה עם PBS, יש להכתים למשך הלילה בתמיסת נוגדנים ראשונית. למחרת, שטפו את הרקמה שלוש פעמים במשך חמש דקות כל אחת ב-PBS.
Dropwise להוסיף את הנוגדן המשני לדגור במשך 60 דקות. לאחר שטיפה עם PBS, לדגור על הרקמה בתמיסה מוכנה לשימוש DAB במשך שלוש עד חמש דקות. עכשיו מכתים את הרקמה hematoxylin במשך שלוש דקות.
שוב, שטפו את הרקמה עם PBS לפני שתניחו אותה בתמיסת התמיינות למשך 10 שניות. לאחר שטיפת PBS, הוסף את תמיסת ההחזרה למשך 10 שניות. לבסוף, בצע טיפול אתנול 75% נטול מים במשך חמש דקות ואטם את המגלשה עם שרף ניטרלי.
צביעת Hematoxylin-eosin הראתה טרבקולה מסודרת היטב בעכברי דמה, בעוד שעכברי OVX הראו שינויים אוסטיאופורוטיים טיפוסיים עם טרבקולה דלילה וחללי מח מוגדלים. השוואת מיקרו CT הראתה רשת טרבקולרית חלקית ודילול קליפת העצם בעכברי OVX בהשוואה לעכברי דמה. לאחר התערבות תרופתית, צביעת המטוקסילין-אאוזין הראתה מבנה טרבקולאי משוחזר וחלל מח מופחת בהשוואה לקבוצת OVX.
מדדי הדמיה הראו פחות שברים בטרבקולה ושחזור רטיקולציה בקבוצת גלולות Xiaoyao במינון גבוה בהשוואה לקבוצת OVX. תוצאות אימונוהיסטוכימיה הראו עלייה בפוספטאז אלקליין וקולגן מסוג 1 וירידה באינטרלוקין 17, ACT1 ואינטרלוקין 6 בקבוצת התרופות.
