גירוי ודגירה של דגימות דם שלמות לניתוח ספציפי לאנטיגן של חסינות המארח לפתוגנים פטרייתיים ונגיפיים

כדי להתחיל, להכין צינורות איסוף דם 2.7 מיליליטר ללא נוגדי קרישה, עם אנטיגנים ונוגדנים co-stimulatory בתנאים סטריליים. הוסף anti-CD28 ו- anti-CD49d לכל צינור, כולל הבקרה השלילית. אם הם קפואים, הפשירו את צינורות הגירוי המוכנים לשימוש בטמפרטורת החדר כ-30 עד 60 דקות לפני גירוי הדם השלם.

לאסוף דם ורידי מהתורם או המטופל באמצעות צינורות איסוף דם עם נוגד קרישה ליתיום הפרין. פיפטה הכמות הנדרשת של דם שלם heparinized לתוך צינורות גירוי מתחת שולחן עבודה סטרילי. בזהירות להפוך את הצינורות על 5 עד 10 פעמים.

לאחר מכן, מניחים את הצינורות באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר ארבע שעות הדגירה, מכינים תמיסה אחת של מיליגרם למיליליטר ברפלדין A בתווך סל"ד. בשולחן עבודה סטרילי, פתח את המכסה של הצינורות המשמשים לניתוח ציטומטרי זרימה.

לאחר מכן העבירו 1% מנפח הדגימה של תמיסת ברפלדין A לצינור הגירוי. דוגרים על הצינורות הסגורים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 16 עד 18 שעות נוספות.