ציפוי פיברונקטין וזריעת תאי A431 לאלקטרופורציה על בסיס מצע נקבובי

כדי להתחיל ציפוי פיברונקטין בחר 12 תוספות ו -2 צלחות 24 באר. מניחים את התוספות בצלחת באר אחת, ויוצרים שתי שורות של שש. הכן מיקרוגרם אחד לכל מיליליטר תמיסת פיברונקטין על ידי ערבוב 52 מיקרוליטר של תמיסת ציר פיברונקטין ו -1.2 מיליליטר PBS בצינור 1.5 מיליליטר.

להפיץ 100 מיקרוליטר של תמיסת פיברונקטין לתוך כל תוספת. דוגרים על התוספות בצלחת הבאר ב 37 מעלות צלזיוס במשך שלוש שעות. לאחר הדגירה, הסר את תמיסת הפיברונקטין העודפת מכל תוספת.

שטפו את התוספות פעמיים על ידי הוספת 100 מיקרוליטר מים מזוקקים סטריליים לכל תוספת. מוציאים את המים באותו סדר שבו הוסיפו אותם כדי להבטיח זמן שטיפה עקבי בין התוספות. עכשיו לשטוף את מוסיף עם 100 מיקרוליטר של מדיה תרבית התא, ולאחר מכן להסיר את המדיה מן inserts.

לאחר מכן, זרעו 200 מיקרוליטר של תרחיף תאי A431 לתוך התוספות. לבקרה שלילית, פיפטה 200 מיקרוליטר של מדיה תרבית תאים לתוך תוספות. באמצעות סמן קבוע, ציירו קו המחלק את לוח הבאר השני לשני עמודים ברוחב שלוש בארות.

הפרד כל עמודה לשורות. תייג כל אזור ברשת עם פרמטרים רלוונטיים. הוסיפו מיליליטר אחד של מדיה של תרבית תאים לכל באר.

מעבירים את התוספות מצלחת ההכנה למיקומם המתאים בצלחת הניסוי המסומנת ודגרים בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך 12 שעות.