כדי להתחיל, הוסף 500 מיקרוליטר של מאגר תמונה ללא חלבון לערוץ 3 של תא הזרימה. ערבבו שני ננו-טוחנים של Saccharomyces cerevisiae NAP1 ושניים עד חמישה ננו-מולרים של אוקטמר היסטון H4 בתווית LD655 עם 500 מיקרוליטר של חיץ HR 1X. הוסיפו תערובת זו לערוץ 4 של תא הזרימה.
הזרימו את כל הערוצים ב-1.0 בר למשך 30 שניות כדי לשטוף אותם בדגימות. כוונו את הזרימה ל-0.2 בר, והזיזו את המלכודות האופטיות לערוץ 1 כדי לתפוס זוג מתאים של חרוזים מצופים סטרפטווידין. לאחר מכן, העבר את המלכודות האופטיות לערוץ 3.
כבו את הזרימה, ובצעו כיול מאולץ עבור זוג החרוזים. הפעל את הלייזר הקונפוקלי האדום וכייל את אזור ההדמיה. לאחר הגדרת הזרימה ל-0.2 בר, העבירו את המלכודות האופטיות לערוץ 2 כדי לתפוס דנ"א ביוטינילי.
לאחר מכן העבירו את המלכודות האופטיות לערוץ 3 ועצרו את הזרימה. הגדל את המרחק בין המלכודות האופטיות כדי למתוח את הדנ"א, ונטר את עקומת המרחק הכפויה המשויכת כדי לאשר את נוכחותו של קשר DNA יחיד. התאימו את המרחק בין המלכודות האופטיות כך שמתח הדנ"א יקרא בערך פיקוניוטון אחד.
הפעל את סריקת הקו כדי להתחיל לאסוף קימוגרף עם הלייזר האדום מופעל. לאחר מכן העבירו את המלכודות האופטיות לערוץ 4 כשהזרימה כבויה כדי ליצור נוקלאוזומים לאורך קשירת הדנ"א. להסרת עטיפת נוקלאוזומים, העבירו את המלכודות האופטיות לערוץ 3.
הגדרת קריאת הכוח ל-0 והמהירות ל-0.1 מיקרומטר לשנייה, הרחיקו את המלכודת האופטית 1 מהמלכודת האופטית 2. ערבבו 10 ננו-מולר של היסטון H1.4 עד 500 מיקרוליטר של חיץ תמונה עם תווית Cy3 והוסיפו לתעלה 5. לאחר יצירת קשירת DNA המכילה נוקלאוזומים, הפעל את הלייזר הירוק, בנוסף ללייזר האדום, והעבר מלכודות אופטיות לערוץ 5 לצורך הדמיה בזמן אמת של H1 נקשר לכרומטין.
היווצרות נוקלאוזומים לאורך קשירת הדנ"א הודגמה כמוקדים פלואורסצנטיים אדומים נייחים בסריקה דו-ממדית וקימוגרף. ניתוח פוטו-הלבנה הראה אירועי הלבנת תמונות בצעד אחד או דו-שלבי, דבר המצביע על נוכחות של מונונוקלאוזומים. בהיעדר NAP1, אוקטמרים של היסטון קשרו DNA, אך נותרו ברובם לא עטופים, כפי שמעיד על המתח המתמיד.
באמצעות שימוש ב-H2A המסומן ב-Cy3, התקבלו תוצאות הרכבה דומות של נוקלאוזומים, כמו עם H4 המסומן ב-LD655. פריקת נוקלאוזומים הגדילה את מרחק הקשירה לאורך זמן, הנראה על הקימוגרף, ויצרה עקומות מרחק מאולצות עם קרעים אופייניים המציינים את הסרת העטיפה של נוקלאוזומים בודדים. קישור היסטון H1 שנקשר לכרומטין סומן על ידי מוקדים פלואורסצנטיים ירוקים עם מסלולים נייחים בצבע כפול המייצגים את קשירת H1 לנוקלאוזומים, ומסלולים משוננים ירוקים המייצגים מסלולי H1 מפוזרים.
