Droplet Generation ו-Digital Droplet PCR לכימות אמין של Titers גנום נגיפי AAV בדגימות וקטוריות

כדי להתחיל, הכינו דגימת AAV מטופלת אחת של DNA ואת תערובת האב dd_PCR. הוסף 2.2 מיקרוליטר של הדגימה המדוללת ל -19.8 מיקרוליטר של תערובת האב dd_PCR בכל צינור של רצועת שמונה צינורות PCR וערבב היטב. מעבירים 20 מיקרוליטר של התערובת לבארות הכלולות בשורת הדגימה האמצעית של מחסנית המייצרת טיפות.

לאחר מכן להעביר 60 מיקרוליטר של שמן הדור טיפות לבארות הכלולות בשורת הנפט התחתונה של מחסנית ייצור טיפות. הניחו אטם גומי מעל המחסנית המייצרת טיפות, ולאחר מכן הניחו אותו במחולל הטיפות. לאחר יצירת הטיפות, השתמש בפיפט בן שמונה ערוצים כדי להעביר באיטיות 42.5 מיקרוליטר של תמיסה ממחסנית ייצור הטיפות לצלחת PCR מרובת בארות.

אטמו את צלחת ה-PCR עם כיסוי רדיד אלומיניום באמצעות מכונת איטום חום למשך חמש שניות ב-180 מעלות צלזיוס. להגברה, הניחו את הצלחת במחזור תרמי עם מודול תגובת באר בעומק 96 וסגרו אותה היטב והפעילו את תוכנית ה-PCR. לאחר שתסיים, טען את הצלחת לקורא טיפות, הזן את המידע הנדרש לתוכנת המערכת והתחל בקריאה.

הפרדה ברורה בין טיפות חיוביות ושליליות נצפתה בתרשים המשרעת 1D, מה שמרמז על מדידה מוצלחת. תרשים המשרעת השני של 1D הראה גשם טיפות עם טיפות המפוזרות בין העננים החיוביים והשליליים, מה שמצביע על בעיה פוטנציאלית בדיוק המדידה. נתוני הפלט מריצת AAV הראו תוצאות עקביות כאשר מדגם אחד נמדד בכפילויות בשני דילולים שונים.