עבודה זו נתמכה על ידי NIH מענק DK080351 למחשב.

ניסיוני פרוטוקול הצעד הראשון פרוטוקול הניסוי הזה היא לאסוף מספר גדול של בלוטות יותרת המוח העכבר. הצעד השני הוא homogenize בלוטות להכין תמצית חלבון. הצעד השלישי הוא emulsify החלבונים האלה בתערובת שמנוני. שלב 1: איסוף ואחסון של העכבר בלוטות יותרת המוח בלוטת יותרת המוח העכבר יושב בבסיס הגולגולת בשקע של העצם יתדי שנקרא יושבת הבלוטה סלע, ​​מוקף רוחבית על ידי העצבים trigeminal ו anteriorly ידי התצלובת הראייה. בלוטה מורכבת של האונה הקדמית גדול האונות האחורי ביניים קטנות יותר, ומשקלו על 1.9 מ&quot;ג בממוצע. בלוטות יותרת המוח נאספים מעכברים של זנים, מינים מעורבים, הגילאים, נועד להיות מורדמים באמצעות מתקן טיפול בבעלי חיים. כדי לבודד את בלוטת יותרת המוח, העכבר הוא מורדמים, העור מעל הגולגולת גזור, ואת עצם הגולגולת לחתוך לפתוח במספריים. המוח הוא הרים לחשוף את בלוטת יותרת המוח, אשר מבודדת אז מן מאטר הדורה שמסביב, הנדלה העצם יתדי ומאוחסנים צינור פלסטיק על קרח יבש. בדרך כלל אנו משתמשים 300 בלוטות יותרת המוח עכבר להכנת חלבון אחד, מספר כי ניתן לאסוף על ידי אדם אחד ב 9 שעות. לאחר איסוף הושלמה, שפופרת המכילה את בלוטות יותרת המוח מאוחסן ב -80 ° C עד מוכן לשלב הבא. שלב 2. הפקת עכבר יותרת המוח חלבונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את החיץ homogenization לצינור פלקון 15 מ&quot;ל (קטלוג לא 352,059) שמר באמבט קרח, באמצעות 250 μL של המאגר על כל 100 בלוטות יותרת המוח שנאספו. השתמש חיץ של חוזק היוני דומה לזו שקיימת פיזיולוגית בתוך הציטופלסמה של התא (0.2 מ &#39;) של ה-pH פיזיולוגי (7.4). אנו משתמשים פוספט שנאגרו מלוחים (0.161 M, pH 7.4), בתוספת קוקטייל מעכב פרוטאז (סיגמא אולדריץ, קטלוג לא P8340-1ML). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את בלוטות יותרת המוח למאגר רק לפני homogenization, ולאחר מכן למקם את מחולל (5 מ&quot;מ קוטר) של homogenizer Polytron בתחתית הצינור פלקון. Homogenize בסל&quot;ד מרבי למשך 30 שניות, בעדינות להזיז את הצינור פלקון למעלה ולמטה תוך שמירה על אותה באמבט קרח. לאחר מכן, שאר homogenate על קרח דק 1. חזור על homogenization וקירור צעדים עוד פעמיים. זה homogenization עדין צריך לשבור את התאים לשחרר חלבונים cytosolic מבלי לשבש את הגרעינים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להסיר, גרעינים שלמים רקמות וחומרים מסיסים (כגון רקמת החיבור ואת קומפלקסים חלבונים מפוגל), בצנטריפוגה homogenate במהירות נמוכה (1000g) במשך 10 דקות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את supernatant (נקרא כעת פוסט גרעיני Supernatant, PNS) לצינור פלקון חדש, מקפיד להשאיר גלולה באין מפריע, ולאחסן את PNS על הקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend גלולה בהיקף המקורי של חיץ homogenization (250 μL של המאגר על כל 100 בלוטות יותרת המוח שנאספו), homogenize לעיל, צנטריפוגה לעיל, ולאחר מכן לשלב את PNS השני עם הראשון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Aliquot שני PNS אספו דגימות לתוך צינורות microcentrifuge ולאחסן ב -80 ° C עד מוכן לשלב הבא. הכנה זה החלבון ניתן לאחסן -80 ° C אבל לאט לאט מאבד את העוצמה שלה, לכן אנו ממליצים להשתמש בו בתוך 6 חודשים מיום ההכנה. השתמש aliquot קטן כדי לקבוע את התשואה חלבון ריכוז ידי assay BCA (קטלוג פירס לא. 23,225), ואת איכות החלבון על ידי ג&#39;ל אלקטרופורזה. באופן כללי, אנו מקבלים על 60 מ&quot;ג של חלבון מן 300 מ&quot;ל יותרת המוח העכבר של 1.5 חיץ homogenization, בריכוז סביב 40 ​​מ&quot;ג / מ&quot;ל. </li></ol> שלב 3. הכנת התחליב עבור חיסון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפשירי במהירות aliquots חלבון קפוא הדרושים לניסוי ולהתאים את ריכוז החלבון עד 20 מ&quot;ג / מ&quot;ל. תמצית חלבון זה יהיה emulsified 01:01 עם adjuvant השלם של פרוינד (CFA, Sigma-F-5881) המכיל 5 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​של חום הרג Mycobacterium tuberculosis (בקטון דיקינסון, 231,141). עכבר יקבל 1 מ&quot;ג של תמצית יותרת μL 100 של אמולסיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדוגמה שניתנה כאן היא מחסנת 10 עכברים, שבו כל העכבר יהיה הזריקו μL 100 של תחליב המכיל 1 מ&quot;ג של חלבונים יותרת המוח. אפשר שני עכברים נוסף עבור אובדן חומר במהלך תקופת ההכנה, כדי להשתמש 12 מ&quot;ג של חלבונים יותרת המוח. Aspire 600 μL של לחלץ את מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​20 חלבון יותרת המוח לתאר לעיל באמצעות מזרק 2.5 מ&quot;ל המילטון gastight. Resuspend CFA ידי רועדות, שואפים 600 μL של CFA לתוך מזרק נוסף המילטון 2.5 מ&quot;ל. צרף ומאובטח 22-מד מיקרו emulsifying מחט המזרק מלא CFA. לאט לאט לדחוף את הבוכנה של המזרק CFA כך את המחט מלא CFA, אז לצרף ו לאבטח את הקצה השני שלהמחט במזרק מלא לחלץ יותרת המוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט לקדם את הבוכנה של המזרק CFA לדחוף את מרכיב שמן לתוך לחלץ את acqueous יותרת המוח, כך רק כמות קטנה מעורבת. ואז להדוף את הבוכנה של המזרק לחלץ יותרת המוח לתוך המזרק CFA. חזור על פעולה זו בהדרגה את כמות החומר מעורבת. המשך עד התוכן של שני מזרקים מעורבבים. תוכלו לקבל פתרון לבנבן ומופץ באופן שווה המייצג את תחליב מים בתוך שמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שנוצר תחליב, לחזור על תנועה אחורה-and-הלאה לפחות 500 פעמים על מנת להבטיח את האמולסיה הוא מעורב באופן יסודי. לאחר מחזור הערבוב הסופי, 01:01 מים ב-תחליב שמן מוכן לשימוש מכיל ריכוז חלבון יותרת המוח של 10 מ&quot;ג / מ&quot;ל. התחליב יהיה להזריק באותו יום תת עורי לעכברים SJL הרדים, כמפורט במאמר יופיטר לוויה. </li></ol>

<ol>
	<li>Caturegli, P., Newschaffer, C., Olivi, A., Pomper, M. G., Burger, P. C., Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Autoimmune Hypophysitis Endocr Rev. 26, 599-614 (2005).</li><li>Blansfield, J. A., Beck, K. E., Tran, K., Yang, J. C., Hughes, M. S., Kammula, U. S., Royal, R. E., Topalian, S. L., Haworth, L. R., Levy, C., Rosenberg, S. A., Sherry, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxic+T-lymphocyte-associated+antigen-4+blockage+can+induce+autoimmune+hypophysitis+in+patients+with+metastatic+melanoma+and+renal+cancer.">Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 blockage can induce autoimmune hypophysitis in patients with metastatic melanoma and renal cancer.</a> J Immunother. 28, 593-598 (2005).</li><li>Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmune+Hypophysitis+of+SJL+mice:+Clinical+Insights+from+a+New+Animal+Model.">Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model.</a> Endocrinology. 149, 3461-3469 (2008).</li><li>Goudie, R. B., Pinkerton, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+hypophysitis+and+Hashimoto's+disease+in+a+woman.">Anterior hypophysitis and Hashimoto's disease in a woman.</a> J Pathol Bacteriol. 83, 584-585 (1962).</li><li>Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmune+hypophysitis:+an+underestimated+disease+in+search+of+its+autoantigen(s).">Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s).</a> J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

למרות העובדה כי החולה הראשון עם hypophysitis אוטואימוניות דווחה בשנת 1962 4, autoantigens פתוגניים יותרת המוח נשארים להיות מזוהה 5. במודלים של בעלי חיים יכול להיות מאוד שימושי כדי לזהות אלה autoantigens, בסיוע גילוי סמנים כי הם לתרגום על הטיפול בחולה. מאמר זה הוכיח הליך פשוט ל?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>15-ml Falcon tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>homogenization buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>phosphate buffered saline</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>protease inhibitor cocktail</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Polytron homogenizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BCA assay</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pierce</td>
<td>23225</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Complete Freund's Adjuvant (CFA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>F-5881</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mycobacterium tuberculosis</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Becton Dickinson</td>
<td>231141</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2.5 mL Hamilton gastight syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>22-gauge micro-emulsifying needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

preparation of mouse pituitary immunogen for the induction of experimental autoimmune hypophysitis

Hypophysitis אוטואימונית היא דלקת כרונית של בלוטת יותרת המוח הנגרמת או מלווה אוטואימוניות 1. זה באופן מסורתי נחשב מחלה נדירה אך דיווח גדל במידה ניכרת בשנים האחרונות. Hypophysitis, למעשה, מפתחת לא יוצאת דופן כמו &quot;תופעת לוואי&quot; אצל חולי סרטן שטופלו עם נוגדנים החוסמים קולטנים מעכבות הביע על לימפוציטים מסוג T, כגון CTLA-4 2 ו PD-1 קולטנים. Hypophysitis אוטואימונית יכול להיגרם על ידי הזרקת בניסוי בעכברים עם חלבונים יותרת המוח מעורב עם 3 adjuvant. במאמר זה וידאו אנחנו מדגימים כיצד לחלץ חלבונים מן העכבר בלוטות יותרת המוח ואיך להכין אותם בצורה מתאימה גרימת hypophysitis אוטואימוניות בעכברים SJL.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis at JoVE.com

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Hypophysitis אוטואימוניות ניתן לשחזר בעכברים באמצעות הזרקת תמצית של חלבונים עכבר יותרת המוח.

הכנת Immunogen עכבר יותרת המוח עבור אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימונית ניסויית

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

preparation-mouse-pituitary-immunogen-for-induction-experimental

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

14.4K Views.  The Johns Hopkins University. Hypophysitis אוטואימוניות ניתן לשחזר בעכברים באמצעות הזרקת תמצית של חלבונים עכבר יותרת המוח.

Video: Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse models allow us to study how diseases unfold, often providing a good replica of the same processes occurring in humans. For some autoimmune diseases, like type 1A diabetes, there are models (the NOD mouse) that spontaneously develop a disease similar to the human counterpart. For many other autoimmune diseases, however, the model needs to be induced experimentally. A common approach in this regard is to inject the mouse with a dominant antigen derived from the organ being studied. For example, investigators interested in autoimmune thyroiditis inject mice with thyroglobulin2, and those interested in myasthenia gravis inject them with the acetylcholine receptor3. If the autoantigen for a particular autoimmune disease is not known, investigators inject a crude protein extract from the organ targeted by the autoimmune reaction. For autoimmune hypophysitis, the pathogenic autoantigen(s) remain to be identified4, and thus a crude pituitary protein preparation is used. In this video article we demonstrate how to induce experimental autoimmune hypophysitis in SJL mice.

This video shows how to induce autoimmune hypophysitis in SJL mice and how to assess its severity by histopathology.

אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune cells in rodent models of skin inflammation. Here, we describe a protocol for the digestion of mouse skin in a nutrient-rich solution with collagenase D, followed by separation of hematopoietic cells using a discontinuous density gradient. Cells thus obtained can be used for in vitro studies, in vivo transfer, and other downstream cellular and molecular analyses including flow cytometry. This protocol is an effective and economical alternative to expensive mechanical dissociators, specialized separation columns, and harsher trypsin- and dispase-based digestion methods, which may compromise cellular viability or density of surface proteins relevant for phenotypic characterization or cellular function. As shown here in our representative data, this protocol produced highly viable cells, contained specific immune cell subsets, and had no effect on integrity of common surface marker proteins used in flow cytometric analysis.

This protocol describes enzymatic digestion of mouse skin in nutrient-rich medium followed by gradient separation to isolate leukocytes. Cells thus derived can be used for diverse downstream applications. This is an effective, economical, and improved alternative to tissue dissociation machines and harsher trypsin and dispase-based tissue digestion protocols.

בידוד של ההסתננות Leukocytes מעור העכבר באמצעות אנזימתי לעכל והפרדת צבע

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) resulting in cognitive and motor impairment. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a useful animal model of MS, because it is also characterized by lesion formation in the CNS, motor impairment and is also driven by autoimmune and inflammatory reactions. One of the EAE models is induced with a peptide derived from the myelin oligodendrocyte protein (MOG)35-55 in mice. The EAE mice develop a progressive disease course. This course is divided into three phases: the preclinical phase (day 0 - 9), the disease onset (day 10 - 11) and the acute phase (day 12 - 14). MS and EAE are induced by autoreactive T cells that infiltrate the CNS. These T cells secrete chemokines and cytokines which lead to the recruitment of further immune cells. Therefore, the immune cell distribution in the spinal cord during the three disease phases was investigated. To highlight the time point of the disease at which the activation/proliferation/accumulation of T cells, B cells and monocytes starts, the immune cell distribution in lymph nodes, spleen and blood was also assessed. Furthermore, the levels of several cytokines (IL-1&#946;, IL-6, IL-23, TNF&#945;, IFN&#947;) in the three disease phases were determined, to gain insight into the inflammatory processes of the disease. In conclusion, the data provide an overview of the functional profile of immune cells during EAE pathology.

This manuscript describes the methods for induction and scoring of the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model, together with the assessment of immune cell distribution and mRNA cytokine levels in lymph nodes, spleen, blood and spinal cord using flow cytometry and quantitative PCR, respectively, at various disease phases.

אינדוקציה של ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis עכברים וההערכה של הפצת מחלות התלויה של תאים חיסוניים ברקמות שונות

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses targeting myelin. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common animal model of CNS autoimmune disease, and is typically induced via immunization with short peptides representing immunodominant CD4+ T cell epitopes of myelin proteins. However, B cells recognize unprocessed protein directly, and immunization with short peptide does not activate B cells that recognize the native protein. As recent clinical trials of B cell-depleting therapies in MS have suggested a role for B cells in driving disease in humans, there is an urgent need for animal models that incorporate B cell-recognition of autoantigen. To this end, we have generated a new fusion protein containing the extracellular domain of the mouse version of myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) as well as N-terminal fusions of a His-tag for purification purposes and the thioredoxin protein to improve solubility (MOGtag). A tobacco etch virus (TEV) protease cleavage site was incorporated to allow the removal of all tag sequences, leaving only the pure MOG1-125 extracellular domain. Here, we describe a simple protocol using only standard laboratory equipment to produce large quantities of pure MOGtag or MOG1-125. This protocol consistently generates over 200 mg of MOGtag protein. Immunization with either MOGtag or MOG1-125 generates an autoimmune response that includes pathogenic B cells that recognize the native mouse MOG.

We describe a simple protocol using only basic lab equipment to generate and purify large quantities of a fusion protein that contains mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein. This protein can be used to induce experimental autoimmune encephalomyelitis driven by both T and B cells.

ייצור טיהור פשוט ויעיל של עכבר המיאלין Oligodendrocyte גליקופרוטאין עבור ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis מחקרים

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients with autoimmune hepatitis. The overwhelming majority of patients with DIH are women. The underlying mechanisms of these sex differences in prevalence are unclear because of the paucity of animal models that mimic human disease. Even so, underlying mechanisms are widely believed to be associated with human leukocyte antigen haplotypes and sex hormones. In contrast, using a DIH mouse model, we have uncovered that IL-4 initiated&#160;CD4+ T cells directed against an epitope of cytochrome P450 2E1 induces influx of neutrophils, macrophages and mast cells into the livers of female BALB/c mice. Using this model, we have also shown that IL-33-induced FoxP3+regulatory T cells confer protection against DIH in female and male mice. This DIH model is induced by immunizing mice with an epitope of CYP2E1 that has been covalently altered with a drug metabolite that has been associated with DIH. This epitope is recognized by patients with DIH. Our method induces robust and reproducible hepatitis and autoantibodies that can be utilized to study the pathogenesis of DIH. While in vivo studies can cause undue pain and distress in mice when done improperly, the advantage of an in vivo model is the ability to evaluate the pathogenesis of disease in a large number of mice. Additionally, biological effects of the altered liver proteins can be studied using invasive procedures. The addition of in vitro studies to the experimental design allows rapid repetition and mechanistic analysis at a cellular level. Thus, we will demonstrate our model protocol and how it can be utilized to study in vivo and in vitro mechanisms of DIH.

We describe an in vivo immunization, translational hepatitis model in BALB/c mice that can be utilized to study the pathogenesis of drug-induced autoimmune hepatitis including sex differences seen in this disease. We will describe how this model demonstrates reproducible analyses using in vivo and in vitro experimental techniques.

אינדוקציה של הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות בעכברי BALB/c לחקר המנגנונים הפתוגניים שלה

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients ...

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular inflammatory disease model recapitulate the clinical phenotype of posterior uveitis affecting humans. EAU has been used reliably to study the efficacy of novel inflammatory therapeutics, their mode of action and to further investigate the mechanisms that underpin disease progression of intraocular disorders. Here, we provide a detailed protocol on EAU induction in the C57BL/6J mouse - the most widely used model organism with susceptibility to this disease. Clinical assessment of disease severity and progression will be demonstrated using fundoscopy, histological examination and fluorescein angiography. The induction procedure involves subcutaneous&#160;injection of an emulsion containing a peptide (IRBP1-20) from the ocular protein interphotoreceptor retinoid binding protein (also known as retinol binding protein 3), Complete Freund&#39;s Adjuvant (CFA) and supplemented with killed Mycobacterium tuberculosis. Injection of this viscous emulsion on the back of the neck is followed by a single intraperitoneal injection of Bordetella pertussis toxin. At the onset of symptoms (day 12-14) and under general anesthesia, fundoscopic images are taken to assess disease progression through clinical examination. These data can be directly compared with those at later timepoints and peak disease (day 20-22) with differences analyzed. At the same time, this protocol allows the investigator to assess potential differences in vessel permeability and damage using fluorescein angiography. EAU can be induced in other mouse strains - both wildtype or genetically modified - and combined with novel therapies offering flexibility for studying drug efficacy and/or disease mechanisms.

In this report we present a protocol that allows the investigator to generate a mouse model of intraocular uveitis. More commonly referred to as experimental autoimmune uveitis (EAU), this established model captures many aspects of human disease. Herein, we will describe how to induce and monitor disease progression using several readouts.

אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית: מודל עכבר דלקתי תוך עיני

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...

A Rapid, Simple, and Standardized Homogenization Method to Prepare Antigen/Adjuvant Emulsions for Inducing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) shares similar immunological and clinical features with multiple sclerosis (MS), and is therefore widely used as a model to identify new drug targets for better patient treatment. MS is characterized by several different disease courses: relapsing-remitting MS (RRMS), primary progressive MS (PPMS), secondary progressive MS (SPMS), and a rare progressive-relapsing form of MS (PRMS). Although animal models do not accurately mimic all of these contrasting human disease phenotypes, there are EAE models that reflect some of the different clinical manifestations of MS. For example, myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG)-induced EAE in C57BL/6J mice mimics human PPMS, while myelin proteolipid protein (PLP)-induced EAE in SJL/J mice resembles RRMS. Other autoantigens, such as myelin basic protein (MBP), and a number of different mouse strains are also used to study EAE. To induce disease in these autoantigen-immunization EAE models, a water-in-oil emulsion is prepared and injected subcutaneously. The majority of EAE models also require an injection of pertussis toxin for the disease to develop. For consistent and reproducible EAE induction, a detailed protocol to prepare the reagents to produce antigen/adjuvant emulsions is necessary. The method described here takes advantage of a standardized method to generate water-in-oil emulsions. It is simple and fast and uses a shaking homogenizer instead of syringes to prepare quality-controlled emulsions.

To induce experimental autoimmune encephalomyelitis, an animal model of multiple sclerosis, mice are immunized with a water-in-oil emulsion containing an autoantigen and complete Freund's adjuvant. While several protocols exist for the preparation of these emulsions, a rapid, simple, and standardized homogenization protocol for emulsion preparation is presented here.

שיטת הומוגניזציה מהירה, פשוטה וסטנדרטית להכנת אמולסיות אנטיגן/אדג'ובנטיות לגרימת אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) shares similar immunological and clinical features with multiple sclerosis (MS), and is therefore widely ...

Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model

In recent years, Hashimoto's thyroiditis (HT) has become the most common autoimmune thyroid disease. It is characterized by lymphocyte infiltration and the detection of specific serum autoantibodies. Although the potential mechanism is still not clear, the risk of Hashimoto's thyroiditis is related to genetic and environmental factors. At present, there are several types of models of autoimmune thyroiditis, including experimental autoimmune thyroiditis (EAT) and spontaneous autoimmune thyroiditis (SAT).
EAT in mice is a common model for HT, which is immunized with lipopolysaccharide (LPS) combined with thyroglobulin (Tg) or supplemented with complete Freund's adjuvant (CFA). The EAT mouse model is widely established in many types of mice. However, the disease progression is more likely associated with the Tg antibody response, which may vary in different experiments.
SAT is also widely used in the study of HT in the NOD.H-2h4 mouse. The NOD.H2h4 mouse is a new strain obtained from the cross of the nonobese diabetic (NOD) mouse with the B10.A(4R), which is significantly induced for HT with or without feeding iodine. During the induction, the NOD.H-2h4 mouse has a high level of TgAb accompanied by lymphocyte infiltration in the thyroid follicular tissue. However, for this type of mouse model, there are few studies to comprehensively evaluate the pathological process during the induction of iodine.
A SAT mouse model for HT research is established in this study, and the pathologic changing process is evaluated after a long period of iodine induction. Through this model, researchers can better understand the pathological development of HT and screen new treatment methods for HT.

Several types of animal models of Hashimoto's thyroiditis have been established, as has spontaneous autoimmune thyroiditis in the NOD mouse. H-2h4 mice are a simple and reliable model for HT induction. This article describes this approach and evaluates the pathological process for a better understanding of the SAT murine model.

יצירת עכבר מודל אוטואימוני ספונטני של בלוטת התריס

In recent years, Hashimoto's thyroiditis (HT) has become the most common autoimmune thyroid disease. It is characterized by lymphocyte infiltration and ...

שיפור אימונוגניות על ידי Mycobacterium paratuberculosis באנצפלומיאליטיס אוטואימונית

Adjuvant Activity of Mycobacterium paratuberculosis in Enhancing the Immunogenicity of Autoantigens During Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) requires immunization by a MOG peptide emulsified in complete Freund&#39;s adjuvant (CFA) containing inactivated Mycobacterium tuberculosis. The antigenic components of the mycobacterium activate dendritic cells to stimulate T-cells to produce cytokines that promote the Th1 response via toll-like receptors. Therefore, the amount and species of mycobacteria present during the antigenic challenge are directly related to the development of EAE. This methods paper presents an alternative protocol to induce EAE in C57BL/6 mice using a modified incomplete Freund&#39;s adjuvant containing the heat-killed Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis strain K-10.
M. paratuberculosis, a member of the Mycobacterium avium complex, is the causative agent of Johne&#39;s disease in ruminants and has been identified as a risk factor for several human T-cell-mediated disorders, including multiple sclerosis. Overall, mice immunized with Mycobacterium paratuberculosis showed earlier onset and greater disease severity than mice immunized with CFA containing the strain of M. tuberculosis H37Ra at the same doses of 4 mg/mL. The antigenic determinants of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP)&#160;strain K-10 were able to induce a strong Th1 cellular response during the effector phase, characterized by significantly higher numbers of T-lymphocytes (CD4+ CD27+), dendritic cells (CD11c+ I-A/I-E+), and monocytes (CD11b+ CD115+) in the spleen compared to mice immunized with CFA. Furthermore, the proliferative T-cell response to the MOG peptide appeared to be highest in M. paratuberculosis-immunized mice. The use of an encephalitogen (e.g., MOG35-55) emulsified in an adjuvant containing M. paratuberculosis in the formulation may be an alternative and validated method to activate dendritic cells for priming myelin epitope-specific CD4+ T-cells during the induction phase of EAE.

מחבר זרקור: פעילות אדג'ובנטית של Mycobacterium paratuberculosis בשיפור האימונוגניות של אוטואנטיגנים במהלך אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית  

Here, we present an alternative protocol to actively induce experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice, using the immunogenic epitope myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG)35-55 suspended in incomplete Freund's adjuvant containing the heat-killed Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis.

פעילות אדג'ובנטית של Mycobacterium paratuberculosis בשיפור האימונוגניות של אוטואנטיגנים במהלך אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) requires immunization by a MOG peptide emulsified in ...