עבודה זו נתמכה על ידי NIH מענק DK080351 למחשב.

ניסיוני פרוטוקול הצעד הראשון פרוטוקול הניסוי הזה היא לאסוף מספר גדול של בלוטות יותרת המוח העכבר. הצעד השני הוא homogenize בלוטות להכין תמצית חלבון. הצעד השלישי הוא emulsify החלבונים האלה בתערובת שמנוני. שלב 1: איסוף ואחסון של העכבר בלוטות יותרת המוח בלוטת יותרת המוח העכבר יושב בבסיס הגולגולת בשקע של העצם יתדי שנקרא יושבת הבלוטה סלע, ​​מוקף רוחבית על ידי העצבים trigeminal ו anteriorly ידי התצלובת הראייה. בלוטה מורכבת של האונה הקדמית גדול האונות האחורי ביניים קטנות יותר, ומשקלו על 1.9 מ&quot;ג בממוצע. בלוטות יותרת המוח נאספים מעכברים של זנים, מינים מעורבים, הגילאים, נועד להיות מורדמים באמצעות מתקן טיפול בבעלי חיים. כדי לבודד את בלוטת יותרת המוח, העכבר הוא מורדמים, העור מעל הגולגולת גזור, ואת עצם הגולגולת לחתוך לפתוח במספריים. המוח הוא הרים לחשוף את בלוטת יותרת המוח, אשר מבודדת אז מן מאטר הדורה שמסביב, הנדלה העצם יתדי ומאוחסנים צינור פלסטיק על קרח יבש. בדרך כלל אנו משתמשים 300 בלוטות יותרת המוח עכבר להכנת חלבון אחד, מספר כי ניתן לאסוף על ידי אדם אחד ב 9 שעות. לאחר איסוף הושלמה, שפופרת המכילה את בלוטות יותרת המוח מאוחסן ב -80 ° C עד מוכן לשלב הבא. שלב 2. הפקת עכבר יותרת המוח חלבונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את החיץ homogenization לצינור פלקון 15 מ&quot;ל (קטלוג לא 352,059) שמר באמבט קרח, באמצעות 250 μL של המאגר על כל 100 בלוטות יותרת המוח שנאספו. השתמש חיץ של חוזק היוני דומה לזו שקיימת פיזיולוגית בתוך הציטופלסמה של התא (0.2 מ &#39;) של ה-pH פיזיולוגי (7.4). אנו משתמשים פוספט שנאגרו מלוחים (0.161 M, pH 7.4), בתוספת קוקטייל מעכב פרוטאז (סיגמא אולדריץ, קטלוג לא P8340-1ML). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את בלוטות יותרת המוח למאגר רק לפני homogenization, ולאחר מכן למקם את מחולל (5 מ&quot;מ קוטר) של homogenizer Polytron בתחתית הצינור פלקון. Homogenize בסל&quot;ד מרבי למשך 30 שניות, בעדינות להזיז את הצינור פלקון למעלה ולמטה תוך שמירה על אותה באמבט קרח. לאחר מכן, שאר homogenate על קרח דק 1. חזור על homogenization וקירור צעדים עוד פעמיים. זה homogenization עדין צריך לשבור את התאים לשחרר חלבונים cytosolic מבלי לשבש את הגרעינים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להסיר, גרעינים שלמים רקמות וחומרים מסיסים (כגון רקמת החיבור ואת קומפלקסים חלבונים מפוגל), בצנטריפוגה homogenate במהירות נמוכה (1000g) במשך 10 דקות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את supernatant (נקרא כעת פוסט גרעיני Supernatant, PNS) לצינור פלקון חדש, מקפיד להשאיר גלולה באין מפריע, ולאחסן את PNS על הקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend גלולה בהיקף המקורי של חיץ homogenization (250 μL של המאגר על כל 100 בלוטות יותרת המוח שנאספו), homogenize לעיל, צנטריפוגה לעיל, ולאחר מכן לשלב את PNS השני עם הראשון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Aliquot שני PNS אספו דגימות לתוך צינורות microcentrifuge ולאחסן ב -80 ° C עד מוכן לשלב הבא. הכנה זה החלבון ניתן לאחסן -80 ° C אבל לאט לאט מאבד את העוצמה שלה, לכן אנו ממליצים להשתמש בו בתוך 6 חודשים מיום ההכנה. השתמש aliquot קטן כדי לקבוע את התשואה חלבון ריכוז ידי assay BCA (קטלוג פירס לא. 23,225), ואת איכות החלבון על ידי ג&#39;ל אלקטרופורזה. באופן כללי, אנו מקבלים על 60 מ&quot;ג של חלבון מן 300 מ&quot;ל יותרת המוח העכבר של 1.5 חיץ homogenization, בריכוז סביב 40 ​​מ&quot;ג / מ&quot;ל. </li></ol> שלב 3. הכנת התחליב עבור חיסון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפשירי במהירות aliquots חלבון קפוא הדרושים לניסוי ולהתאים את ריכוז החלבון עד 20 מ&quot;ג / מ&quot;ל. תמצית חלבון זה יהיה emulsified 01:01 עם adjuvant השלם של פרוינד (CFA, Sigma-F-5881) המכיל 5 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​של חום הרג Mycobacterium tuberculosis (בקטון דיקינסון, 231,141). עכבר יקבל 1 מ&quot;ג של תמצית יותרת μL 100 של אמולסיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדוגמה שניתנה כאן היא מחסנת 10 עכברים, שבו כל העכבר יהיה הזריקו μL 100 של תחליב המכיל 1 מ&quot;ג של חלבונים יותרת המוח. אפשר שני עכברים נוסף עבור אובדן חומר במהלך תקופת ההכנה, כדי להשתמש 12 מ&quot;ג של חלבונים יותרת המוח. Aspire 600 μL של לחלץ את מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​20 חלבון יותרת המוח לתאר לעיל באמצעות מזרק 2.5 מ&quot;ל המילטון gastight. Resuspend CFA ידי רועדות, שואפים 600 μL של CFA לתוך מזרק נוסף המילטון 2.5 מ&quot;ל. צרף ומאובטח 22-מד מיקרו emulsifying מחט המזרק מלא CFA. לאט לאט לדחוף את הבוכנה של המזרק CFA כך את המחט מלא CFA, אז לצרף ו לאבטח את הקצה השני שלהמחט במזרק מלא לחלץ יותרת המוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט לקדם את הבוכנה של המזרק CFA לדחוף את מרכיב שמן לתוך לחלץ את acqueous יותרת המוח, כך רק כמות קטנה מעורבת. ואז להדוף את הבוכנה של המזרק לחלץ יותרת המוח לתוך המזרק CFA. חזור על פעולה זו בהדרגה את כמות החומר מעורבת. המשך עד התוכן של שני מזרקים מעורבבים. תוכלו לקבל פתרון לבנבן ומופץ באופן שווה המייצג את תחליב מים בתוך שמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שנוצר תחליב, לחזור על תנועה אחורה-and-הלאה לפחות 500 פעמים על מנת להבטיח את האמולסיה הוא מעורב באופן יסודי. לאחר מחזור הערבוב הסופי, 01:01 מים ב-תחליב שמן מוכן לשימוש מכיל ריכוז חלבון יותרת המוח של 10 מ&quot;ג / מ&quot;ל. התחליב יהיה להזריק באותו יום תת עורי לעכברים SJL הרדים, כמפורט במאמר יופיטר לוויה. </li></ol>

<ol>
	<li>Caturegli, P., Newschaffer, C., Olivi, A., Pomper, M. G., Burger, P. C., Rose, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Autoimmune Hypophysitis Endocr Rev. 26, 599-614 (2005).</li><li>Blansfield, J. A., Beck, K. E., Tran, K., Yang, J. C., Hughes, M. S., Kammula, U. S., Royal, R. E., Topalian, S. L., Haworth, L. R., Levy, C., Rosenberg, S. A., Sherry, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxic+T-lymphocyte-associated+antigen-4+blockage+can+induce+autoimmune+hypophysitis+in+patients+with+metastatic+melanoma+and+renal+cancer.">Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 blockage can induce autoimmune hypophysitis in patients with metastatic melanoma and renal cancer.</a> J Immunother. 28, 593-598 (2005).</li><li>Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmune+Hypophysitis+of+SJL+mice:+Clinical+Insights+from+a+New+Animal+Model.">Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model.</a> Endocrinology. 149, 3461-3469 (2008).</li><li>Goudie, R. B., Pinkerton, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+hypophysitis+and+Hashimoto's+disease+in+a+woman.">Anterior hypophysitis and Hashimoto's disease in a woman.</a> J Pathol Bacteriol. 83, 584-585 (1962).</li><li>Caturegli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmune+hypophysitis:+an+underestimated+disease+in+search+of+its+autoantigen(s).">Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s).</a> J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

למרות העובדה כי החולה הראשון עם hypophysitis אוטואימוניות דווחה בשנת 1962 4, autoantigens פתוגניים יותרת המוח נשארים להיות מזוהה 5. במודלים של בעלי חיים יכול להיות מאוד שימושי כדי לזהות אלה autoantigens, בסיוע גילוי סמנים כי הם לתרגום על הטיפול בחולה. מאמר זה הוכיח הליך פשוט ל?...

<table><tbody><tr><td>15-ml Falcon tubes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>homogenization buffer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>phosphate buffered saline</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>protease inhibitor cocktail</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polytron homogenizer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BCA assay</td><td>Pierce, Thermo Scientific</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Complete Freund&amp;rsquo;s Adjuvant (CFA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F-5881</td><td></td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis</td><td>BD Biosciences</td><td>231141</td><td></td></tr><tr><td>2.5 mL Hamilton gastight syringe</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>22-gauge micro-emulsifying needle</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

preparation of mouse pituitary immunogen for the induction of experimental autoimmune hypophysitis

Hypophysitis אוטואימונית היא דלקת כרונית של בלוטת יותרת המוח הנגרמת או מלווה אוטואימוניות 1. זה באופן מסורתי נחשב מחלה נדירה אך דיווח גדל במידה ניכרת בשנים האחרונות. Hypophysitis, למעשה, מפתחת לא יוצאת דופן כמו &quot;תופעת לוואי&quot; אצל חולי סרטן שטופלו עם נוגדנים החוסמים קולטנים מעכבות הביע על לימפוציטים מסוג T, כגון CTLA-4 2 ו PD-1 קולטנים. Hypophysitis אוטואימונית יכול להיגרם על ידי הזרקת בניסוי בעכברים עם חלבונים יותרת המוח מעורב עם 3 adjuvant. במאמר זה וידאו אנחנו מדגימים כיצד לחלץ חלבונים מן העכבר בלוטות יותרת המוח ואיך להכין אותם בצורה מתאימה גרימת hypophysitis אוטואימוניות בעכברים SJL.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis at JoVE.com

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Hypophysitis אוטואימוניות ניתן לשחזר בעכברים באמצעות הזרקת תמצית של חלבונים עכבר יותרת המוח.

הכנת Immunogen עכבר יותרת המוח עבור אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימונית ניסויית

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

preparation-mouse-pituitary-immunogen-for-induction-experimental

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

14.5K Views.  The Johns Hopkins University. Hypophysitis אוטואימוניות ניתן לשחזר בעכברים באמצעות הזרקת תמצית של חלבונים עכבר יותרת המוח.

Video: Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse models allow us to study how diseases unfold, often providing a good replica of the same processes occurring in humans. For some autoimmune diseases, like type 1A diabetes, there are models (the NOD mouse) that spontaneously develop a disease similar to the human counterpart. For many other autoimmune diseases, however, the model needs to be induced experimentally. A common approach in this regard is to inject the mouse with a dominant antigen derived from the organ being studied. For example, investigators interested in autoimmune thyroiditis inject mice with thyroglobulin2, and those interested in myasthenia gravis inject them with the acetylcholine receptor3. If the autoantigen for a particular autoimmune disease is not known, investigators inject a crude protein extract from the organ targeted by the autoimmune reaction. For autoimmune hypophysitis, the pathogenic autoantigen(s) remain to be identified4, and thus a crude pituitary protein preparation is used. In this video article we demonstrate how to induce experimental autoimmune hypophysitis in SJL mice.

This video shows how to induce autoimmune hypophysitis in SJL mice and how to assess its severity by histopathology.

אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for study of the human demyelinating disease, multiple sclerosis (MS). EAE is characterized by pathologic infiltration of mononuclear cells into the CNS and by clinical manifestation of paralytic disease. Similar to MS, EAE is also under genetic control in that certain mouse strains are susceptible to disease induction while others are resistant. Typically, C57BL/6 (H-2b) mice immunized with myelin basic protein (MBP) fail to develop paralytic signs. This unresponsiveness is certainly not due to defects in antigen processing or antigen presentation of MBP, as an experimental protocol described here had been used to induce severe EAE in C57BL/6 mice as well as other reputed resistant mouse strains. In addition, encephalitogenic T cell clones from C57BL/6 and Balb/c mice reactive to MBP had been successfully isolated and propagated.
The experimental protocol involves using a cellular adoptive transfer system in which MBP-primed (200 &mu;g/mouse) C57BL/6 donor lymph node cells are isolated and cultured for five days with the antigen to expand the pool of MBP-specific T cells. At the end of the culture period, 50 million viable cells are transferred into naive syngeneic recipients through the tail vein. Recipient mice so treated normally do not develop EAE, thus reaffirming their resistant status, and they can remain normal indefinitely. Ten days post cell transfer, recipient mice are challenged with complete Freund adjuvant (CFA)-emulsified MBP in four sites in the flanks. Severe EAE starts to develop in these mice ten to fourteen days after challenge. Results showed that the induction of disease was antigenic specific as challenge with irrelevant antigens did not induce clinical signs of disease. Significantly, a titration of the antigen dose used to challenge the recipient mice showed that it could be as low as 5 &mu;g/mouse. In addition, a kinetic study of the timing of antigenic challenge showed that challenge to induce disease was effective as early as 5 days post antigenic challenge and as long as over 445 days post antigenic challenge. These data strongly point toward the involvement of a "long-lived" T cell population in maintaining unresponsiveness. The involvement of regulatory T cells (Tregs) in this system is not defined.

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Certain mouse strains are able to resist induction of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) with myelin basic protein. Described here is a simple immunization protocol that reverses the unresponsiveness and induces paralytic disease in several typical EAE resistant mouse stains.

התגברות על חוסר התגובה של ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis (EAE) זנים עמידים עכבר ידי העברת המאמצת אתגר אנטיגני

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Systemic Injection of Neural Stem/Progenitor Cells in Mice with Chronic EAE

Neural stem/precursor cells (NPCs) are a promising stem cell source for transplantation approaches aiming at brain repair or restoration in regenerative neurology. This directive has arisen from the extensive evidence that brain repair is achieved after focal or systemic NPC transplantation in several preclinical models of neurological diseases.
These experimental data have identified the cell delivery route as one of the main hurdles of restorative stem cell therapies for brain diseases that requires urgent assessment. Intraparenchymal stem cell grafting represents a logical approach to those pathologies characterized by isolated and accessible brain lesions such as spinal cord injuries and Parkinson's disease. Unfortunately, this principle is poorly applicable to conditions characterized by a multifocal, inflammatory and disseminated (both in time and space) nature, including multiple sclerosis (MS). As such, brain targeting by systemic NPC delivery has become a low invasive and therapeutically efficacious protocol to deliver cells to the brain and spinal cord of rodents and nonhuman primates affected by experimental chronic inflammatory damage of the central nervous system (CNS).
This alternative method of cell delivery relies on the NPC pathotropism, specifically their innate capacity to (i) sense the environment via functional cell adhesion molecules and inflammatory cytokine and chemokine receptors; (ii) cross the leaking anatomical barriers after intravenous (i.v.) or intracerebroventricular (i.c.v.) injection; (iii) accumulate at the level of multiple perivascular site(s) of inflammatory brain and spinal cord damage; and (i.v.) exert remarkable tissue trophic and immune regulatory effects onto different host target cells in vivo.
Here we describe the methods that we have developed for the i.v. and i.c.v. delivery of syngeneic NPCs in mice with experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), as model of chronic CNS inflammatory demyelination, and envisage the systemic stem cell delivery as a valuable technique for the selective targeting of the inflamed brain in regenerative neurology.

The transplantation of neural stem/progenitor cells (NPCs) holds great promises in regenerative neurology. The systemic delivery of NPCs has turned into effective, low invasive, and therapeutically very efficacious protocol to deliver stem cells in the brain and spinal cord of rodents and nonhuman primates affected by experimental chronic inflammatory damage of the central nervous system.

הזרקה מערכתית של תאי גזע / אב עצביים בעכברים עם EAE כרוני

Neural stem/precursor cells (NPCs) are a promising stem cell source for transplantation approaches aiming at brain repair or restoration in regenerative ...

A Simple Approach to Induce Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice for Functional and Neuropathological Assessments

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by immunizing mice with neurogenic peptides to direct an inflammatory attack toward components of the peripheral nervous system (PNS). Recent advances have enabled the induction of EAN in the relatively resistant C57BL/6 mouse line using myelin protein zero (P0)106-125 or P0180-199 peptides delivered in adjuvant combined with the injection of pertussis toxin. The ability to induce EAN in the C57BL/6 strain allows for the use of the numerous genetic tools that exist on this mouse background, and thus allows the sophisticated study of disease pathogenesis and interrogation of the mechanistic action of novel therapeutics in combination with transgenic approaches. In this study, we demonstrate a simple approach to successfully induce EAN using the P0180-199 peptide in C57BL/6 mice. We also outline a protocol for the assessment of functional deficits that occur in this model, accompanied by an array of neuropathological features. Thus, this model is a powerful experimental model to study the pathogenesis of human peripheral demyelinating neuropathies, and to determine the efficacy of potential therapies that aim to promote myelin repair and protect against nerve damage in autoimmune neuritis.

This report outlines a simple approach to successfully induce experimental autoimmune neuritis (EAN) using the myelin protein zero (P0)180-199 peptide in combination with Freund&#39;s complete adjuvant and pertussis toxin. We present a sophisticated paradigm capable of accurately assessing the extent of functional deficits and neuropathology that occur in this EAN.

גישה פשוטה כדי לגרום לדלקת בעצה חיסון ניסיוני בעכברים C57BL/6 עבור הערכות Neuropathological פונקציונלי

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by ...

Neuroscience

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular inflammatory disease model recapitulate the clinical phenotype of posterior uveitis affecting humans. EAU has been used reliably to study the efficacy of novel inflammatory therapeutics, their mode of action and to further investigate the mechanisms that underpin disease progression of intraocular disorders. Here, we provide a detailed protocol on EAU induction in the C57BL/6J mouse - the most widely used model organism with susceptibility to this disease. Clinical assessment of disease severity and progression will be demonstrated using fundoscopy, histological examination and fluorescein angiography. The induction procedure involves subcutaneous&#160;injection of an emulsion containing a peptide (IRBP1-20) from the ocular protein interphotoreceptor retinoid binding protein (also known as retinol binding protein 3), Complete Freund&#39;s Adjuvant (CFA) and supplemented with killed Mycobacterium tuberculosis. Injection of this viscous emulsion on the back of the neck is followed by a single intraperitoneal injection of Bordetella pertussis toxin. At the onset of symptoms (day 12-14) and under general anesthesia, fundoscopic images are taken to assess disease progression through clinical examination. These data can be directly compared with those at later timepoints and peak disease (day 20-22) with differences analyzed. At the same time, this protocol allows the investigator to assess potential differences in vessel permeability and damage using fluorescein angiography. EAU can be induced in other mouse strains - both wildtype or genetically modified - and combined with novel therapies offering flexibility for studying drug efficacy and/or disease mechanisms.

In this report we present a protocol that allows the investigator to generate a mouse model of intraocular uveitis. More commonly referred to as experimental autoimmune uveitis (EAU), this established model captures many aspects of human disease. Herein, we will describe how to induce and monitor disease progression using several readouts.

אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית: מודל עכבר דלקתי תוך עיני

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...

A Rapid, Simple, and Standardized Homogenization Method to Prepare Antigen/Adjuvant Emulsions for Inducing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) shares similar immunological and clinical features with multiple sclerosis (MS), and is therefore widely used as a model to identify new drug targets for better patient treatment. MS is characterized by several different disease courses: relapsing-remitting MS (RRMS), primary progressive MS (PPMS), secondary progressive MS (SPMS), and a rare progressive-relapsing form of MS (PRMS). Although animal models do not accurately mimic all of these contrasting human disease phenotypes, there are EAE models that reflect some of the different clinical manifestations of MS. For example, myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG)-induced EAE in C57BL/6J mice mimics human PPMS, while myelin proteolipid protein (PLP)-induced EAE in SJL/J mice resembles RRMS. Other autoantigens, such as myelin basic protein (MBP), and a number of different mouse strains are also used to study EAE. To induce disease in these autoantigen-immunization EAE models, a water-in-oil emulsion is prepared and injected subcutaneously. The majority of EAE models also require an injection of pertussis toxin for the disease to develop. For consistent and reproducible EAE induction, a detailed protocol to prepare the reagents to produce antigen/adjuvant emulsions is necessary. The method described here takes advantage of a standardized method to generate water-in-oil emulsions. It is simple and fast and uses a shaking homogenizer instead of syringes to prepare quality-controlled emulsions.

To induce experimental autoimmune encephalomyelitis, an animal model of multiple sclerosis, mice are immunized with a water-in-oil emulsion containing an autoantigen and complete Freund's adjuvant. While several protocols exist for the preparation of these emulsions, a rapid, simple, and standardized homogenization protocol for emulsion preparation is presented here.

שיטת הומוגניזציה מהירה, פשוטה וסטנדרטית להכנת אמולסיות אנטיגן/אדג'ובנטיות לגרימת אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) shares similar immunological and clinical features with multiple sclerosis (MS), and is therefore widely ...

Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model

In recent years, Hashimoto's thyroiditis (HT) has become the most common autoimmune thyroid disease. It is characterized by lymphocyte infiltration and the detection of specific serum autoantibodies. Although the potential mechanism is still not clear, the risk of Hashimoto's thyroiditis is related to genetic and environmental factors. At present, there are several types of models of autoimmune thyroiditis, including experimental autoimmune thyroiditis (EAT) and spontaneous autoimmune thyroiditis (SAT).
EAT in mice is a common model for HT, which is immunized with lipopolysaccharide (LPS) combined with thyroglobulin (Tg) or supplemented with complete Freund's adjuvant (CFA). The EAT mouse model is widely established in many types of mice. However, the disease progression is more likely associated with the Tg antibody response, which may vary in different experiments.
SAT is also widely used in the study of HT in the NOD.H-2h4 mouse. The NOD.H2h4 mouse is a new strain obtained from the cross of the nonobese diabetic (NOD) mouse with the B10.A(4R), which is significantly induced for HT with or without feeding iodine. During the induction, the NOD.H-2h4 mouse has a high level of TgAb accompanied by lymphocyte infiltration in the thyroid follicular tissue. However, for this type of mouse model, there are few studies to comprehensively evaluate the pathological process during the induction of iodine.
A SAT mouse model for HT research is established in this study, and the pathologic changing process is evaluated after a long period of iodine induction. Through this model, researchers can better understand the pathological development of HT and screen new treatment methods for HT.

Several types of animal models of Hashimoto's thyroiditis have been established, as has spontaneous autoimmune thyroiditis in the NOD mouse. H-2h4 mice are a simple and reliable model for HT induction. This article describes this approach and evaluates the pathological process for a better understanding of the SAT murine model.

יצירת עכבר מודל אוטואימוני ספונטני של בלוטת התריס

In recent years, Hashimoto's thyroiditis (HT) has become the most common autoimmune thyroid disease. It is characterized by lymphocyte infiltration and ...

אינדוקציה והערכה של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית בעכבר

Modeling Multiple Sclerosis in the Two Sexes: MOG35-55-Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Multiple Sclerosis (MS) is a chronic autoimmune inflammatory disease affecting the central nervous system (CNS). It is characterized by different prevalence in the sexes, affecting more women than men, and different outcomes, showing more aggressive forms in men than in women. Furthermore, MS is highly heterogeneous in terms of clinical aspects, radiological, and pathological features. Thus, it is necessary to take advantage of experimental animal models that allow the investigation of as many aspects of the pathology as possible. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) represents one of the most used models of MS in mice, modeling different disease features, from the activation of the immune system to CNS damage. Here we describe a protocol for the induction of EAE in both male and female C57BL/6J mice using myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide 35-55 (MOG35-55) immunization, which leads to the development of a chronic form of the disease. We also report the evaluation of the daily clinical score and motor performance of these mice for 28 days post immunization (28 dpi). Lastly, we illustrate some basic histological analysis at the CNS level, focusing on the spinal cord as the primary site of disease-induced damage.

מחבר זרקור: יצירת מודל ניסיוני רב-תכליתי של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית הרלוונטי לעכברים זכרים ונקבות כאחד 

Experimental autoimmune encephalomyelitis is one of the most widely used murine models of multiple sclerosis. In the current protocol, C57BL/6J mice of both sexes are immunized with myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide, resulting mainly in ascending paresis of the tail and limbs. Here we discuss the protocol of EAE induction and evaluation.

הכנת Immunogen עכבר יותרת המוח עבור אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימונית ניסויית

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL

התגברות על חוסר התגובה של ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis (EAE) זנים עמידים עכבר ידי העברת המאמצת אתגר אנטיגני

הזרקה מערכתית של תאי גזע / אב עצביים בעכברים עם EAE כרוני

גישה פשוטה כדי לגרום לדלקת בעצה חיסון ניסיוני בעכברים C57BL/6 עבור הערכות Neuropathological פונקציונלי

אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית: מודל עכבר דלקתי תוך עיני

שיטת הומוגניזציה מהירה, פשוטה וסטנדרטית להכנת אמולסיות אנטיגן/אדג'ובנטיות לגרימת אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

יצירת עכבר מודל אוטואימוני ספונטני של בלוטת התריס

מידול טרשת נפוצה בשני המינים: MOG_35-induced ניסיוני אוטואימוני אנצפלומיאליטיס

מידול טרשת נפוצה בשני המינים: MOG_35-induced ניסיוני אוטואימוני אנצפלומיאליטיס

מידול טרשת נפוצה בשני המינים: MOG_35-induced ניסיוני אוטואימוני אנצפלומיאליטיס

הכנת Immunogen עכבר יותרת המוח עבור אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימונית ניסויית

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL

התגברות על חוסר התגובה של ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis (EAE) זנים עמידים עכבר ידי העברת המאמצת אתגר אנטיגני

הזרקה מערכתית של תאי גזע / אב עצביים בעכברים עם EAE כרוני

גישה פשוטה כדי לגרום לדלקת בעצה חיסון ניסיוני בעכברים C57BL/6 עבור הערכות Neuropathological פונקציונלי

אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית: מודל עכבר דלקתי תוך עיני

שיטת הומוגניזציה מהירה, פשוטה וסטנדרטית להכנת אמולסיות אנטיגן/אדג'ובנטיות לגרימת אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

יצירת עכבר מודל אוטואימוני ספונטני של בלוטת התריס

מידול טרשת נפוצה בשני המינים: MOG35-induced ניסיוני אוטואימוני אנצפלומיאליטיס

מידול טרשת נפוצה בשני המינים: MOG35-induced ניסיוני אוטואימוני אנצפלומיאליטיס

מידול טרשת נפוצה בשני המינים: MOG35-induced ניסיוני אוטואימוני אנצפלומיאליטיס

מידול טרשת נפוצה בשני המינים: MOG_35-induced ניסיוני אוטואימוני אנצפלומיאליטיס

מידול טרשת נפוצה בשני המינים: MOG_35-induced ניסיוני אוטואימוני אנצפלומיאליטיס

מידול טרשת נפוצה בשני המינים: MOG_35-induced ניסיוני אוטואימוני אנצפלומיאליטיס