עבודה זו נתמכה על ידי מענק מטעם המשרד הפדרלי הגרמני לחינוך ולמחקר (BMBF) בתוך פוקוס ברנשטיין: הבסיס העצבי של למידה (BFNL) כדי DE אנו מודים רנדולף Menzel על הערות מועילות על גרסה מוקדמת של כתב היד.

1. לתפוס דבורים מן הכוורת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יום אחד לפני הניסוי מתחיל, בין 2 ל 4:00, דבורים לעזוב את הכוורת נתפסים. כדי לעשות זאת, פרספקס UV אור חדיר פירמידה (גובה = 30 ס&quot;מ, איפקס 3,5 x 3, 5 ס&quot;מ, בסיס 18 x 18 ס&quot;מ), אשר closable בפסגת ובסיס, הוא החזיק ב 20 - במרחק 30 ס&quot;מ מול הכניסה כוורת עם בסיס פתוח שיא סגור כל כך לעזוב את כוורת הדבורים להזין את בסיס הפירמידה. בסיס סגור אז הדבורים שנתפסו מובאים למעבדה להמשך טיפול. </li></ol> 2. העברת דבורים מן הפירמידה לתוך צלוחיות זכוכית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במעבדה, הפירמידה ממוקמת על בסיסו. הקירות של הפירמידה הם חשוכים (למשל עם מגבת) אבל שיא נשאר חשוף. בגלל phototaxis חיובי שלהם, דבורים יעזוב את הפירמידה דרך הקודקוד כאשר נפתח. אחד אחד, דבורים מועברים הפירמידה לתוך צלוחיות זכוכית ידי החזקת בקבוקונים על הקודקוד הפתוח. בקבוקון אחד משמש לכל דבורה. לכן, איפקס נסגר כאשר הדבורה נכנסת בקבוקון. </li></ol> 3. רתימת דבורים צינורות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דבורים הם משותקים על ידי קירור אותם צלוחיות זכוכית על קרח דק 2.5-3.5. מומלץ לצפות דבורה להסיר אותו מן הקרח ברגע שהוא מפסיק לזוז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דבורה משותקת יחיד הוא רתום בתוך שפופרת פלסטיק קטנה עם סרט דביק, כך הוא מסוגל לנוע בחופשיות חוטם שלה אבל לא, הראש החזה או הרגליים. חשוב הצוואר אינו דחוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דבורה כל קבוע צינור הפלסטיק מוכנס לתוך הקידוח ממוספרים על מדף לטיפול טוב יותר הזדהות. אחרי זה הוסר לאחזור מיזוג או זיכרון הצינור הוא חזר תמיד אל הקידוח בדיוק. </li></ol> 4. האכלת דבורים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בערב הראשון (4-6 בערב), לאחר שנתפס, דבורים ניזונים לשובע עם פתרון סוכרוז (0,88 מ &#39;, הבית הלבן סוכר מזוקק מומס במי ברז). כדי להאכיל דבורה, PER שלה הוא עורר על ידי נגיעה האנטנות שלה עם פתרון סוכרוז החיה מותר לצרוך לטיפה אחת (4 μL) של תמיסת סוכרוז. דבורים ניזונים אחד אחרי השני שוב ושוב עד שהם כבר לא מראים מהיר ואמין PER כאשר האנטנות שלהם נגע עם פתרון סוכרוז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בערב אחד לאחר מכן (4-6 בערב) של הדבורים הניסוי ניזונים בזו אחר זו ארבע פעמים עם 1 טיפה של תמיסת סוכרוז (4 μL, 0,88 מ &#39;, סוכר לבן מזוקק לפתור במי ברז). חשוב כי פתרון סוכרוז אינו מרוח על האנטנות של הדבורה או חוטם במהלך האכלה כי הצינורות אינם מזוהמים פתרון סוכרוז. דבורים לא צריך להיות מוזן ליד או באתר מיזוג לשלול את האפשרות של שיוך ההקשר אימון עם גירוי סוכרוז. </li></ol> 5. שמירה על דבורים רתומים לינה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דבורים נשמרים לילה בטמפרטורת החדר בקערת פלסטיק. מי ברז מלא לתוך הקערה (כ 0,5-1 ס&quot;מ גובה). Racks עם הדבורים רתם מונחות בקערה מעל פני המים באמצעות פלטות ELISA כפלטפורמה. לבסוף, הקערה מכוסה קרטון. </li></ol> 6. חוש הריח מיזוג בבוקר הראשון (10:00) של הניסוי מיזוג ההרחה מתבצעת. גירוי מותנה (CS) הוא ריח, את הגירוי הבלתי מותנה (ארה&quot;ב) הוא פתרון סוכרוז. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 4 μL של ריח (שמן ציפורן למשל) הם pipetted על נייר סינון עגול (1,3 ס&quot;מ קוטר) אשר מוכנס מכן לתוך מזרק 20 מ&quot;ל. הריח הוא pipetted מתחת למכסה המנוע וטיפים לסנן משמשים על מנת למנוע זיהום של פיפטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתלה עם דבורים רתם ממוקם ליד אתר 30 דקות לפני מיזוג הליך מיזוג מתחיל, אבל במרחק למקום מול צינור הפליטה שם דבורים יחיד מותנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיזוג מורכב משלושה זיווגים של ריח (גירוי מותנה, CS) פתרון סוכרוז (הגירוי הבלתי מותנה, ארה&quot;ב, 1,25 M) עם מרווח בין משפט (ITI) של 10 דקות. אות אקוסטי נמסר הניסוי באמצעות נגן האודיו מבטיח את העיתוי המדויק של תחילת הגירוי, הגירוי אופסט, משך הגירוי הצבת. משפט הרכישה מתחיל עם מיקום 10 שניות של החיה מול פליטה. זמן קצר לפני תום 10 שניות מזרק המכיל את ריח ממוקם 3 ס&quot;מ מול הדבורה מכוון האנטנות של הדבורה. לאחר מכן, ריח מוצגת למשך 5 שניות, על ידי דחיפת האוויר 20 מ&quot;ל באמצעות המזרק. אחרי הראשון 3 שניות שוטונים דיסטלי של אנטנות הן נגע עם סוכרוז פתרון, לחלח קיסם וחיות מותר ללקק את קיסם moistend למשך 4 שניות. 13 שניות לאחר סיום גירוי CS, דבורים מהקשרם האימונים והניח בחזרה במעמד. בסך הכל משפט אחד ההכשרה נמשכת 28 שניות. חשוב גם אנטנות של הדבורה ולא חוטם מכוסים סוכרוז לאחר מיזוג. לכן זה חייב להיות להבטיח כי קיסם רק טבולה פתרון סוכרוז וזה לא טיפות הטופס סוכרוז פתרון הקיסם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מיזוג המדפים מוצבים בחזרה בקערה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התנהגותם של בעלי החיים במהלך הניסוי, כלומר, את המופע של PER במהלך השמה CS והצגת בארה&quot;ב, מנוטר וציין על ידי הנסיין. </li></ol> 7. זיכרון שייר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדיקות שייר יכול להתבצע במרווח כלשהו (דקות עד ימים). מתלה עם דבורים ממוקם ליד אתר 30 דקות לפני מיזוג במבחן הזיכרון מתחיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבחן זיכרון מורכב מצגת CS 5 שניות בלי מצגת בארה&quot;ב. המבחן מתחיל עם מיקום 10 שניות של החיה מול הפליטה. לאחר מכן, ריח מוצגת למשך 5 שניות כפי שתואר לעיל. ההתנהגות של בעל החיים, כלומר את המופע של PER במהלך השמה את המצגת CS הוא רשם במהלך הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסוף הניסוי התגובה extention חוטם הוא שוב עורר ידי נגיעה אנטנות עם פתרון סוכרוז על מנת להבטיח כי בעל החיים הוא עדיין מסוגל להאריך חוטם שלה. </li></ol> 8. הזרקת מערכתית נקודת הזמן של הזרקת מערכתית תלוי בתכנון הניסוי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חור קטן הוא עשה cuticula של החלק האחורי של scutum ליד הסדק scutal מעל 17 הטיסה השריר באמצעות מחט המזרק חד פעמיות (21 G). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות צינור זכוכית נימי, 1 פתרון μL מוזרק דרך החור cuticula לתוך השריר הטיסה. הנסיינים מאומנים מסוגלים להזריק דבורה אחת בכל 30 שניות, מה שמאפשר תזמון מדויק של הזרקת אוויר. </li></ol> 9. האכלת דבורים במהלך הניסוי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בערב (4-6 בערב), לאחר מיזוג, דבורים ניזונים בזו אחר זו ארבע פעמים עם 1 טיפה של תמיסת סוכרוז (4 μL, 0,88 מ &#39;, סוכר לבן מזוקק מומס במי ברז). חשוב כי פתרון סוכרוז אינו מרוח על האנטנות של הדבורה או חוטם במהלך האכלה כי הצינורות אינם מזוהמים פתרון סוכרוז. דבורים לא צריך להיות מוזן ליד או באתר מיזוג לשלול את האפשרות של שיוך ההקשר אימון עם גירוי סוכרוז. </li></ol> 10. איסוף נתונים וניתוח נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המופע של התגובה הרחבה חוטם במהלך הניסוי מנוטר. דבורה הוא הבקיע חיובי אם זה מרחיב חוטם שלו בין תחילת CS והצגת בארה&quot;ב (במהלך אימון) או במהלך המצגת CS (בשלב הבדיקה), חציית קו וירטואלי בין הלסתות פתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להיכלל החיות ניתוח למלא שני קריטריונים: הם חייבים לשרוד את הניסוי כולו והם חייבים להראות את התגובה הארכה מותנית חוטם (PER) לפתרון סוכרוז בסוף הניסוי. אחוז דבורים מראה את PER במהלך הרכישה בדיקות השמירה היא להתוות עבור כל מצגת CS. </li></ol> 11. נציג תוצאות: שני הניסויים מוצגים כאן. בניסוי הראשון נבחן את ההשפעה של הזריקה מערכתית של פוספט בופר סליין (PBS; במ&quot;מ: 137 NaCl, KCl 2,7, 10,1 Na 2 HPO 4, 1,8 KH 2 PO 4, pH 7, 2) על למידה לטווח ארוך היווצרות הזיכרון. שלוש קבוצות של הדבורים אומנו עם שלושה CS-US זיווגים עם מרווח בין משפט של 10 דקות: קבוצת שאינם מטופלים, קבוצה הזריקו 1 דקות μL 30 PBS לפני האימון, וקבוצת המזויף, מוזרק התייחסו באותו אופן כמו קבוצה PBS-הזריקו אך ללא הזרקת PBS. 24 שעות לאחר האימון נבדק זיכרון עם מצגת CS אחד כל שלוש הקבוצות. אחוז בעלי מראה את התגובה המותנית במהלך מיזוג מגדילה באופן משמעותי על פני שלושה ניסויים הכשרה (תמונה 1, ANOVA למדידת חזר בפעם גורם F 2378 = 340456, p &lt;0,05). אין הבדל ב PER יכול להיבחן בין שלוש קבוצות במהלך מיזוג (ANOVA למדידת חוזרות ונשנות של הקבוצות גורם F2, 189 = 1299, p&gt; 0,05). זה נכון גם לגבי מבחן 24 שעות שמירה (F2, 187 = 0752, p&gt; 0,05) כאשר משווים שאינם מטופלים חיות עם PBS-מוזרק חיות דמה, מוזרק. בניסוי השני אנו מדגימים את עיכוב של שימור הזיכרון שלושה ארבעה ימים לאחר האימון כאשר סינתזת החלבון מעכב anisomycin (10 mM) שהוזרק מערכתית 30 דקות לאחר שלוש CS-US זיווגים. השוואה בין קבוצה anisomycin-מוזרק עם קבוצת PBS-מוזרק מגלה הבדל משמעותי בין הקבוצות במהלך t השמירהest (Fig.2, ANOVA למדידת חוזרות ונשנות של גורם בקבוצה F1, 94 = 8,86, p &lt;0,05). ההבדל העיקרי ניתן לצפות במבחן הזיכרון ביום 3 יום 4. זה דומה לתוצאות Wüstenberg et al. 18, אשר מותנה גם דבורים עם שלושה CS-US זיווגים, אם כי עם פרוטוקול שונה. <img src="/files/ftp_upload/2282/2282fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. הנגע Cuticula או הזרקה של PBS אינו משנה רכישה ושימור הזיכרון. חיות הוכשרו עם זיווגים three CS-US (רכישה). לאחר 24 שעות, זיכרון נבדק (שימור זיכרון). שלושים דקות לפני האימון, חור נעשה cuticula של שתי הקבוצות (הנגע, PBS) ואחד של קבוצות אלה הזריקו 1 PBS μL (PBS). קבוצה שלישית נותר ללא שינוי (ללא טיפול). המוצג הינו אחוז בעלי חיים עבור כל קבוצה להגיב מצגת עם ריח PER. ANOVA אינם חושפים שום הבדלים משמעותיים בין הקבוצות בשלב הרכישה (F2, 189 = 1.299, p&gt; 0.05) או שימור הזיכרון (F2, 187 = 0.752, p&gt; 0.05). <img src="/files/ftp_upload/2282/2282fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. הזרקה של 40 דקות anisomycin לאחר זיווג CS-US האחרון מפחית שימור הזיכרון שלושה ימים וארבעה ימים לאחר האימון. חיות הוכשרו עם זיווגים three CS-US (רכישה) ו הזריקו 1 μL 10 mM anisomycin (Aniso) או 1 PBS μL 1 שעות לאחר הניסוי האימונים הראשון. זיכרון נבדק (שימור זיכרון) 24 שעות, 48 שעות, 72 שעות ו - 96 שעות מאוחר יותר. מוגש הוא אחוז לכל קבוצה של בעלי חיים מגיבים מצגת עם ריח PER. הזרקה של anisomycin מוביל לצמצום משמעותי של שימור זיכרון 72 שעות ו - 96 שעות לאחר האימון (F1, 94 = 8.86, p &lt;0.05), כפי שהיא מתגלה על ידי ANOVA.

<ol>
	<li>Menzel, R., Giurfa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+architecture+of+a+mini-brain:+the+honeybee.">Cognitive architecture of a mini-brain: the honeybee.</a> Trends Cogn Sci. 5, 62-71 (2001).</li><li>Menzel, R., Leboulle, G., Eisenhardt, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+brains,+bright+minds.">Small brains, bright minds.</a> Cell. 124, 237-239 (2006).</li><li>Menzel, R., Kesner, R. P., Olton, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neurobiology of comparative cognition. , (1990).</li><li>Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Schafer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classical-Conditioning+of+Proboscis+Extension+in+Honeybees+(Apis-Mellifera).">Classical-Conditioning of Proboscis Extension in Honeybees (Apis-Mellifera).</a> J. Comp. Psyc. 97, 107-119 (1983).</li><li>Menzel, R., Muller, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+and+memory+in+honeybees:+from+behavior+to+neural+substrates.">Learning and memory in honeybees: from behavior to neural substrates.</a> Annu. Rev. Neurosci. 19, 379-404 (1996).</li><li>Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+dynamics+in+the+honeybee.">Memory dynamics in the honeybee.</a> Journal of Comparative Physiology A-Neuroethology Sensory Neural and Behavioral Physiology. 185, 323-340 (1999).</li><li>Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Searching+for+the+memory+trace+in+a+mini-brain,+the+honeybee.">Searching for the memory trace in a mini-brain, the honeybee.</a> Learn. Mem. 8, 53-62 (2001).</li><li>Eisenhardt, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+and+memory+formation+in+the+honeybee+(Apis+mellifera)+and+its+dependency+on+the+cAMP-protein+kinase+A+pathway.">Learning and memory formation in the honeybee (Apis mellifera) and its dependency on the cAMP-protein kinase A pathway.</a> Animal Biology. 56, 259-278 (2006).</li><li>Hourcade, B., Muenz, T. S., Sandoz, J. C., Rossler, W., Devaud, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+memory+leads+to+synaptic+reorganization+in+the+mushroom+bodies:+a+memory+trace+in+the+insect+brain.">Long-term memory leads to synaptic reorganization in the mushroom bodies: a memory trace in the insect brain.</a> J. Neurosci. 30, 6461-6465 (2010).</li><li>Denker, M., Finke, R., Schaupp, F., Grun, S., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+correlates+of+odor+learning+in+the+honeybee+antennal+lobe.">Neural correlates of odor learning in the honeybee antennal lobe.</a> Eur. J. Neurosci. 31, 119-133 (2010).</li><li>Szyszka, P., Galkin, A., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+and+non-associative+plasticity+in+kenyon+cells+of+the+honeybee+mushroom+body.">Associative and non-associative plasticity in kenyon cells of the honeybee mushroom body.</a> Front Syst. Neurosci. 2, 3-3 (2008).</li><li>Okada, R., Rybak, J., Manz, G., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning-related+plasticity+in+PE1+and+other+mushroom+body-extrinsic+neurons+in+the+honeybee+brain.">Learning-related plasticity in PE1 and other mushroom body-extrinsic neurons in the honeybee brain.</a> J. Neurosci. 27, 11736-11747 (2007).</li><li>Muller, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+activation+of+cAMP-dependent+protein+kinase+during+conditioning+induces+long-term+memory+in+honeybees.">Prolonged activation of cAMP-dependent protein kinase during conditioning induces long-term memory in honeybees.</a> Neuron. 27, 159-168 (2000).</li><li>Locatelli, F., Bundrock, G., Muller, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+and+temporal+release+of+glutamate+in+the+mushroom+bodies+improves+olfactory+memory+in+Apis+mellifera.">Focal and temporal release of glutamate in the mushroom bodies improves olfactory memory in Apis mellifera.</a> J. Neurosci. 25, 11614-11618 (2005).</li><li>Stollhoff, N., Menzel, R., Eisenhardt, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+recovery+from+extinction+depends+on+the+reconsolidation+of+the+acquisition+memory+in+an+appetitive+learning+paradigm+in+the+honeybee+(Apis+mellifera.">Spontaneous recovery from extinction depends on the reconsolidation of the acquisition memory in an appetitive learning paradigm in the honeybee (Apis mellifera.</a> J. Neurosci. 25, 4485-4492 (2005).</li><li>Stollhoff, N., Eisenhardt, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consolidation+of+an+extinction+memory+depends+on+the+unconditioned+stimulus+magnitude+previously+experienced+during+training.">Consolidation of an extinction memory depends on the unconditioned stimulus magnitude previously experienced during training.</a> J. Neurosci. 29, 9644-9650 (2009).</li><li>Snodgrass, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Anatomy of the honeybee. , (1956).</li><li>Wustenberg, D., Gerber, B., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+communication:+long-+but+not+medium-term+retention+of+olfactory+memories+in+honeybees+is+impaired+by+actinomycin+D+and+anisomycin.">Short communication: long- but not medium-term retention of olfactory memories in honeybees is impaired by actinomycin D and anisomycin.</a> Eur. J. Neurosci. 10, 2742-2745 (1998).</li><li>Vollbehr, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zur+Orientierung+junger+Honigbienen+bei+ihrem+1.">Zur Orientierung junger Honigbienen bei ihrem 1.</a> Orientierungsflug. Zool. Jb. Physiol. 79, 33-69 (1975).</li><li>Scheiner, R., Erber, J., Page, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tactile+learning+and+the+individual+evaluation+of+the+reward+in+honey+bees+(Apis+mellifera+L.).">Tactile learning and the individual evaluation of the reward in honey bees (Apis mellifera L.).</a> J. Comp Physiol [A]. 185, 1-10 (1999).</li><li>Sanchez, B. r. i. t. o., G, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+studies+on+tarsal+gustation+in+honeybees:+sucrose+responsiveness+and+sucrose-mediated+olfactory+conditioning.">Behavioral studies on tarsal gustation in honeybees: sucrose responsiveness and sucrose-mediated olfactory conditioning.</a> J. Comp Physiol A Neuroethol. Sens. Neural Behav. Physiol. 194, 861-869 (2008).</li><li>Menzel, R., Manz, G., Menzel, R., Greggers, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massed+and+spaced+learning+in+honeybees:+the+role+of+CS,+US,+the+intertrial+interval,+and+the+test+interval.">Massed and spaced learning in honeybees: the role of CS, US, the intertrial interval, and the test interval.</a> Learn. Mem. , 198-208 (2001).</li><li>Friedrich, A., Thomas, U., Muller, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+at+different+satiation+levels+reveals+parallel+functions+for+the+cAMP-protein+kinase+A+cascade+in+formation+of+long-term+memory.">Learning at different satiation levels reveals parallel functions for the cAMP-protein kinase A cascade in formation of long-term memory.</a> J. Neurosci. 24, 4460-4468 (2004).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתפוס דבורים: כדי לאסוף דבורים ליקוט מנוסה, דבורים נתפסים או בבוקר או בשעות אחר הצהריים, הימנעות הזמן שבו דבורים צעירות בטיסות אוריינטציה 19. מלקטי מזון או לאסוף אבקה או צוף. הבדלים בין אבקה מלקטי מזון צוף נצפו על פי ההיענות הסוכר שלהם ויכולות הלמידה שלהם 20. על מנת לתפוס מלקטי מזון צוף בלבד, מקור מזון מלאכותי מלא עם פתרון סוכרוז ניתן להתקין ליד הכוורת וחיות ניתן לאסוף שם. מלקטי מזון אבקה לחזור לכוורת ניתן לזהות על ידי בסלי האבקה על הרגליים האחוריות שלהם 20. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיקון וטיפול: קירור מורחבת של דבורים על הקרח יש להימנע כי זה עלול להשפיע על היכולת שלהם ללמוד לשרוד עד סוף הניסוי. טרסי צריך להיות קבוע בזהירות בתוך הצינור, כדי למנוע גירוי מקרי עם פתרון סוכרוז. זה חשוב, כי דבורים הוכחו ללמוד ידי גירוי tarsal עם פתרון succrose 3,21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיזוג חוש הריח: מספר ניסויים מיזוג, רווח בין משפט לבין נקודת זמן הבדיקה יכולים להיות מגוונים בהתאם מוקד המחקר 3,22. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האכלה: רמת השובע של דבורים ידוע להשפיע על הביצועים שלהם למידה ושימור הזיכרון 3,23. זה חייב להילקח בחשבון כאשר מתכננים את הניסויים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרקה: שקי האוויר ממוקמים 17 החזה דבורת דבש. אלו חלקים חיוניים של מערכת הנשימה נחוצות להישרדות. לכן יש להיזהר לא לפגוע נאדיות במהלך ההזרקה. שחרורו של בועות אוויר מציין נזק נאדיות. </li></ol>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Syringe Omnifix 20 ml</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>B.Braun, Melsungen, Germany </td>
<td>4616200 V</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>White refined household sugar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kaisers Supermarket, Berlin, Germany</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Clove oil</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bombastus, Freital, Germany </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Multipette plus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf, Hamburg, Germany</td>
<td>4981 000.019</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rack for 30 bee tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Self-made</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Self-made</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>UV light-permeable plexiglass pyramid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Self-made</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>height = 30cm, 
apex 3.5 x 3.5cm, 
base 18x18cm</td>
</tr>
<tr>
<td>Sticky tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tesa, Hamburg, Germany</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillator sticks 1-5&mu;l</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Selzer, Driedorf-Roth, Germany</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillator tips 1-5&mu;l</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Selzer, Driedorf-Roth, Germany</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Filter paper 0.16-0.2 mm thick</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Macherey-Nagel, D&uuml;ren, Germany</td>
<td>MN 616 or MN615</td>
<td>Adjusted to circular pieces with a 1.3 cm diameter</td>
</tr>
<tr>
<td>Disposable hypodermic needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>B. Braun, Melsungen, Germany</td>
<td>4657683</td>
<td>0.45 mm diameter</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

behavioural pharmacology in classical conditioning of the proboscis extension response in honeybees (apis mellifera)

דבורי דבש (אפיס מליפרה) ידועים התקשורת שלהם ומיומנויות התמצאות מרשימה עבור 1,2 יכולת הלמידה שלהם. כי ההישרדות של מושבת הונאיבי תלוי בניצול של מקורות המזון, דבורים מלקט ללמוד לשנן אתרי פרח משתנה, כמו גם את הרווחיות שלהם. דבורים מלקט ניתן לאמן בקלות בסביבה טבעית שבה הם לנבור באתר האכלה וללמוד את האותות נלווים כגון ריח או צבע. למידה אסוציאטיבית תיאבון יכול להיות גם למד בתנאים מבוקרים במעבדה על ידי מיזוג התגובה הרחבה חוטם (PER) של דבורי דבש רתם בנפרד 3,4. זו פרדיגמה למידה המאפשרת לימוד של מנגנוני עצבית מולקולרית העומדים בבסיס הלמידה היווצרות הזיכרון בצורה פשוטה ואמינה מאוד 5-12. גישה פרמקולוגיה התנהגותית משמש ללמוד המנגנונים המולקולריים. סמים מוזרקים מערכתית להפריע לתפקוד של מולקולות ספציפיות במהלך או לאחר למידה היווצרות הזיכרון 13-16. כאן אנו מדגימים כיצד לאמן דבורים לרתום מיזוג PER וכיצד ניתן ליישם תרופות מערכתית בזריקה לתוך השריר טיסה דבורה.

Watch this Scientific Journal Video about Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning of the Proboscis Extension Response in Honeybees Apis mellifera at JoVE.com

Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning of the Proboscis Extension Response in Honeybees Apis mellifera

אנו מדגימים כיצד ליישם שיטה פרמקולוגיה התנהגותיים לפרדיגמה מיזוג תיאבון הריח של דבורים (אפיס מליפרה) על ידי יישום מערכתי של תרופות. שיטה זו מאפשרת חקירה של מנגנוני הלמידה הבסיסית היווצרות הזיכרון בצורה פשוטה ואמינה.

פרמקולוגיה ההתנהגות של התניה קלאסית תגובת הרחבה חוטם ב דבורי דבש ( אפיס מליפרה)

Honeybees (Apis mellifera) are well known for their communication and orientation skills and for their impressive learning capability1,2. Because the ...

behavioural-pharmacology-classical-conditioning-proboscis-extension

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning of the Proboscis Extension Response in Honeybees (Apis mellifera)

19.2K Views.  Freie Universität Berlin. אנו מדגימים כיצד ליישם שיטה פרמקולוגיה התנהגותיים לפרדיגמה מיזוג תיאבון הריח של דבורים (אפיס מליפרה) על ידי יישום מערכתי של תרופות. שיטה זו מאפשרת חקירה של מנגנוני הלמידה הבסיסית היווצרות הזיכרון בצורה פשוטה ואמינה.

Video: Behavioural Pharmacology in Classical Conditioning of the Proboscis Extension Response in Honeybees Apis mellifera

Recording Large-scale Neuronal Ensembles with Silicon Probes in the Anesthetized Rat

Large scale electrophysiological recordings from neuronal ensembles offer the opportunity to investigate how the brain orchestrates the wide variety of behaviors from the spiking activity of its neurons. One of the most effective methods to monitor spiking activity from a large number of neurons in multiple local neuronal circuits simultaneously is by using silicon electrode arrays1-3.
Action potentials produce large transmembrane voltage changes in the vicinity of cell somata. These output signals can be measured by placing a conductor in close proximity of a neuron. If there are many active (spiking) neurons in the vicinity of the tip, the electrode records combined signal from all of them, where contribution of a single neuron is weighted by its 'electrical distance'. Silicon probes are ideal recording electrodes to monitor multiple neurons because of a large number of recording sites (+64) and a small volume. Furthermore, multiple sites can be arranged over a distance of millimeters, thus allowing for the simultaneous recordings of neuronal activity in the various cortical layers or in multiple cortical columns (Fig. 1). Importantly, the geometrically precise distribution of the recording sites also allows for the determination of the spatial relationship of the isolated single neurons4. Here, we describe an acute, large-scale neuronal recording from the left and right forelimb somatosensory cortex simultaneously in an anesthetized rat with silicon probes (Fig. 2).

Extracellular recordings of neuronal activity using silicon probes in the anesthetized rat will be described. This technique allows information to be obtained across multiple brain areas from more than 100 neurons simultaneously. It provides information with single cell resolution about neuronal ensembles dynamics in multiple local circuits.

הקלטה בקנה מידה גדול הרכבים העצבית עם בדיקות הסיליקון ב עכברוש הרדים

Large scale electrophysiological recordings from neuronal ensembles offer the opportunity to investigate how the brain orchestrates the wide variety of ...

Behavioral Determination of Stimulus Pair Discrimination of Auditory Acoustic and Electrical Stimuli Using a Classical Conditioning and Heart-rate Approach

Acute animal preparations have been used in research prospectively investigating electrode designs and stimulation techniques for integration into neural auditory prostheses, such as auditory brainstem implants1-3 and auditory midbrain implants4,5. While acute experiments can give initial insight to the effectiveness of the implant, testing the chronically implanted and awake animals provides the advantage of examining the psychophysical properties of the sensations induced using implanted devices6,7.
Several techniques such as reward-based operant conditioning6-8, conditioned avoidance9-11, or classical fear conditioning12 have been used to provide behavioral confirmation of detection of a relevant stimulus attribute. Selection of a technique involves balancing aspects including time efficiency (often poor in reward-based approaches), the ability to test a plurality of stimulus attributes simultaneously (limited in conditioned avoidance), and measure reliability of repeated stimuli (a potential constraint when physiological measures are employed).
Here, a classical fear conditioning behavioral method is presented which may be used to simultaneously test both detection of a stimulus, and discrimination between two stimuli. Heart-rate is used as a measure of fear response, which reduces or eliminates the requirement for time-consuming video coding for freeze behaviour or other such measures (although such measures could be included to provide convergent evidence). Animals were conditioned using these techniques in three 2-hour conditioning sessions, each providing 48 stimulus trials. Subsequent 48-trial testing sessions were then used to test for detection of each stimulus in presented pairs, and test discrimination between the member stimuli of each pair. 
This behavioral method is presented in the context of its utilisation in auditory prosthetic research. The implantation of electrocardiogram telemetry devices is shown. Subsequent implantation of brain electrodes into the Cochlear Nucleus, guided by the monitoring of neural responses to acoustic stimuli, and the fixation of the electrode into place for chronic use is likewise shown.

The application of a classical fear conditioning behavioral paradigm for auditory prosthetic research in rats is described. This paradigm provides a mechanism for identifying both detection of, and discrimination between, distinct acoustic and electrical stimuli using heart-rate as an outcome measure.

קביעת ההתנהגות של אפליה Stimulus זוג אקוסטית שמיעתית גירויים חשמליים באמצעות התניה קלאסית ואת קצב הלב גישה

Acute animal preparations have been used in research prospectively investigating electrode designs and stimulation techniques for integration into neural ...

The Mouse Forced Swim Test

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental manipulations that are aimed at rendering or preventing depressive-like states. Mice are placed in an inescapable transparent tank that is filled with water and their escape related mobility behavior is measured. The forced swim test is straightforward to conduct reliably and it requires minimal specialized equipment. Successful implementation of the forced swim test requires adherence to certain procedural details and minimization of unwarranted stress to the mice. In the protocol description and the accompanying video, we explain how to conduct the mouse version of this test with emphasis on potential pitfalls that may be detrimental to interpretation of results and how to avoid them. Additionally, we explain how the behaviors manifested in the test are assessed.

The forced swim test is validated as an experimental approach to assess potential antidepressant efficacy in rodents. Experimental animals are placed in a tank of water and escape-related mobility behavior is quantified. The common procedures for the mouse version of this test are described.

עכבר בכפייה לשחות מבחן

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental ...

The Tail Suspension Test

The tail-suspension test is a mouse behavioral test useful in the screening of potential antidepressant drugs, and assessing of other manipulations that are expected to affect depression related behaviors. Mice are suspended by their tails with tape, in such a position that it cannot escape or hold on to nearby surfaces. During this test, typically six minutes in duration, the resulting escape oriented behaviors are quantified. The tail-suspension test is a valuable tool in drug discovery for high-throughput screening of prospective antidepressant compounds. Here, we describe the details required for implementation of this test with additional emphasis on potential problems that may occur and how to avoid them. We also offer a solution to the tail climbing behavior, a common problem that renders this test useless in some mouse strains, such as the widely used C57BL/6. Specifically, we prevent tail climbing behaviors by passing mouse tails through a small plastic cylinder prior to suspension. Finally, we detail how to manually score the behaviors that are manifested in this test.

The tail-suspension test is validated as an experimental procedure to assess antidepressant efficacy of drug treatments in mice. Mice are suspended by their tails for six minutes and escape-related behaviors are assessed. We describe procedures used in conducting the tail suspension test.

השעיה זנב מבחן

The tail-suspension test is a mouse behavioral test useful in the screening of potential antidepressant drugs, and assessing of other manipulations that ...

Tactile Conditioning And Movement Analysis Of Antennal Sampling Strategies In Honey Bees (Apis mellifera L.)

Honey bees (Apis mellifera L.) are eusocial insects and well known for their complex division of labor and associative learning capability1, 2. The worker bees spend the first half of their life inside the dark hive, where they are nursing the larvae or building the regular hexagonal combs for food (e.g. pollen or nectar) and brood3. The antennae are extraordinary multisensory feelers and play a pivotal role in various tactile mediated tasks4, including hive building5 and pattern recognition6. Later in life, each single bee leaves the hive to forage for food. Then a bee has to learn to discriminate profitable food sources, memorize their location, and communicate it to its nest mates7. Bees use different floral signals like colors or odors7, 8, but also tactile cues from the petal surface9 to form multisensory memories of the food source. Under laboratory conditions, bees can be trained in an appetitive learning paradigm to discriminate tactile object features, such as edges or grooves with their antennae10, 11, 12, 13. This learning paradigm is closely related to the classical olfactory conditioning of the proboscis extension response (PER) in harnessed bees14. The advantage of the tactile learning paradigm in the laboratory is the possibility of combining behavioral experiments on learning with various physiological measurements, including the analysis of the antennal movement pattern.

Tactile Conditioning And Movement Analysis Of Antennal Sampling Strategies In Honey Bees Apis mellifera L.

In this protocol we show how to condition harnessed honey bees to tactile stimuli and introduce a 2D motion capture technique for analyzing the kinematics of fine-scale antennal sampling pattern.

מיזוג מישוש וניתוח תנועה של אסטרטגיות דגימת מחושים בדבורי דבש (<em&gt; תפיס mellifera</em&gt; ל &#39;)

Honey bees (Apis mellifera L.) are eusocial insects and well known for their complex division of labor and associative learning capability1, 2. The worker ...

RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees (Apis mellifera)

This video demonstrates novel techniques of RNA interference (RNAi) which downregulate two genes simultaneously in honey bees using double-stranded RNA (dsRNA) injections. It also presents a protocol of proboscis extension response (PER) assay for measuring gustatory perception.	
	RNAi-mediated gene knockdown is an effective technique downregulating target gene expression. This technique is usually used for single gene manipulation, but it has limitations to detect interactions and joint effects between genes. In the first part of this video, we present two strategies to simultaneously knock down two genes (called double gene knockdown). We show both strategies are able to effectively suppress two genes, vitellogenin (vg) and ultraspiracle (usp), which are in a regulatory feedback loop. This double gene knockdown approach can be used to dissect interrelationships between genes and can be readily applied in different insect species.	
	The second part of this video is a demonstration of proboscis extension response (PER) assay in honey bees after the treatment of double gene knockdown. The PER assay is a standard test for measuring gustatory perception in honey bees, which is a key predictor for how fast a honey bee's behavioral maturation is. Greater gustatory perception of nest bees indicates increased behavioral development which is often associated with an earlier age at onset of foraging and foraging specialization in pollen. In addition, PER assay can be applied to identify metabolic states of satiation or hunger in honey bees. Finally, PER assay combined with pairing different odor stimuli for conditioning the bees is also widely used for learning and memory studies in honey bees.

RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees Apis mellifera

In this protocol, we describe two strategies that simultaneously suppress two genes (double gene knockdown) in honey bees. Then we present how to use the proboscis extension response (PER) assay to study the effect of double gene knockdown on honey bee gustatory perception.

מציאה RNAi בתיווך זוגית ג&#39;ין ומדידה בחוש טעם בדבורי דבש (<em&gt; אפיס mellifera</em&gt;)

This video demonstrates novel techniques of RNA  interference (RNAi) which downregulate two genes simultaneously in honey bees  using double-stranded RNA ...

A Proboscis Extension Response Protocol for Investigating Behavioral Plasticity in Insects: Application to Basic, Biomedical, and Agricultural Research

Insects modify their responses to stimuli through experience of associating those stimuli with events important for survival (e.g., food, mates, threats). There are several behavioral mechanisms through which an insect learns salient associations and relates them to these events. It is important to understand this behavioral plasticity for programs aimed toward assisting insects that are beneficial for agriculture. This understanding can also be used for discovering solutions to biomedical and agricultural problems created by insects that act as disease vectors and pests. The Proboscis Extension Response (PER) conditioning protocol was developed for honey bees (Apis mellifera) over 50 years ago to study how they perceive and learn about floral odors, which signal the nectar and pollen resources a colony needs for survival. The PER procedure provides a robust and easy-to-employ framework for studying several different ecologically relevant mechanisms of behavioral plasticity. It is easily adaptable for use with several other insect species and other behavioral reflexes. These protocols can be readily employed in conjunction with various means for monitoring neural activity in the CNS via electrophysiology or bioimaging, or for manipulating targeted neuromodulatory pathways. It is a robust assay for rapidly detecting sub-lethal effects on behavior caused by environmental stressors, toxins or pesticides.
We show how the PER protocol is straightforward to implement using two procedures. One is suitable as a laboratory exercise for students or for quick assays of the effect of an experimental treatment. The other provides more thorough control of variables, which is important for studies of behavioral conditioning. We show how several measures for the behavioral response ranging from binary yes/no to more continuous variable like latency and duration of proboscis extension can be used to test hypotheses. And, we discuss some pitfalls that researchers commonly encounter when they use the procedure for the first time.

The Proboscis Extension Response (PER) conditioning protocol, developed for the honey bee (Apis mellifera), provides an ecologically-relevant and easily quantifiable means for studying several different mechanisms of learning in many insect species.

תגובת פרוטוקול חוטם הרחבה לחקירת פלסטיות התנהגות בחרקים: בקשה ליסוד, ביו רפואית, ומחקר חקלאי

Insects modify their responses to stimuli through experience of associating those stimuli with events important for survival (e.g., food, mates, threats). ...

Simultaneous Long-term Recordings at Two Neuronal Processing Stages in Behaving Honeybees

In both mammals and insects neuronal information is processed in different higher and lower order brain centers. These centers are coupled via convergent and divergent anatomical connections including feed forward and feedback wiring. Furthermore, information of the same origin is partially sent via parallel pathways to different and sometimes into the same brain areas. To understand the evolutionary benefits as well as the computational advantages of these wiring strategies and especially their temporal dependencies on each other, it is necessary to have simultaneous access to single neurons of different tracts or neuropiles in the same preparation at high temporal resolution. Here we concentrate on honeybees by demonstrating a unique extracellular long term access to record multi unit activity at two subsequent neuropiles1, the antennal lobe (AL), the first olfactory processing stage and the mushroom body (MB), a higher order integration center involved in learning and memory formation, or two parallel neuronal tracts2 connecting the AL with the MB.&#160;The latter was chosen as an example and will be described in full. In the supporting video the construction and permanent insertion of flexible multi&#160;channel wire electrodes is demonstrated. Pairwise differential amplification of the micro&#160;wire electrode channels drastically reduces the noise and verifies that the source of the signal is closely related to the position of the electrode tip. The mechanical flexibility of the used wire electrodes allows stable invasive long&#160;term recordings over many hours up to days, which is a clear advantage compared to conventional extra&#160;and intracellular in vivo recording techniques.

Simultaneous extracellular long term recordings from two different brain neuropiles or two different anatomical tracts were established in honeybees. These recordings allow the investigation of temporal aspects of neuronal processing across different brain areas at the single neuron as well as at the ensemble level in a behaving animal.

הקלטות ארוכות טווח בו זמנית בשני שלבים עצביים עיבוד במתנהגים דבורי דבש

In both mammals and insects neuronal information is processed in different higher and lower order brain centers. These centers are coupled via convergent ...

Electroretinogram Analysis of the Visual Response in Zebrafish Larvae

The electroretinogram (ERG) is a noninvasive electrophysiological method for determining retinal function. Through the placement of an electrode on the surface of the cornea, electrical activity generated in response to light can be measured and used to assess the activity of retinal cells in vivo. This manuscript describes the use of the ERG to measure visual function in zebrafish. Zebrafish have long been utilized as a model for vertebrate development due to the ease of gene suppression by morpholino oligonucleotides and pharmacological manipulation. At 5-10 dpf, only cones are functional in the larval retina. Therefore, the zebrafish, unlike other animals, is a powerful model system for the study of cone visual function in vivo. This protocol uses standard anesthesia, micromanipulation and stereomicroscopy protocols that are common in laboratories that perform zebrafish research. The outlined methods make use of standard electrophysiology equipment and a low light camera to guide the placement of the recording microelectrode onto the larval cornea. Finally, we demonstrate how a commercially available ERG stimulator/recorder originally designed for use with mice can easily be adapted for use with zebrafish. ERG of larval zebrafish provides an excellent method of assaying cone visual function in animals that have been modified by morpholino oligonucleotide injection as well as newer genome engineering techniques such as Zinc Finger Nucleases (ZFNs), Transcription Activator-Like Effector Nucleases (TALENs), and Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR)/Cas9, all of which have greatly increased the efficiency and efficacy of gene targeting in zebrafish. In addition, we take advantage of the ability of pharmacological agents to penetrate zebrafish larvae to evaluate the molecular components that contribute to the photoresponse. This protocol outlines a setup that can be modified and used by researchers with various experimental goals.

We present a method for the electroretinographic (ERG) analysis of zebrafish larvae utilizing micromanipulation and electroretinography techniques. This is a simple and straightforward method for assaying visual function of zebrafish larvae in vivo.

ניתוח electroretinogram של התגובה החזותית בדג הזברה זחלים

The electroretinogram (ERG) is a noninvasive electrophysiological method for determining retinal function. Through the placement of an electrode on the ...

Neuropharmacological Manipulation of Restrained and Free-flying Honey Bees, Apis mellifera

Honey bees demonstrate astonishing learning abilities and advanced social behavior and communication. In addition, their brain is small, easy to visualize and to study. Therefore, bees have long been a favored model amongst neurobiologists and neuroethologists for studying the neural basis of social and natural behavior. It is important, however, that the experimental techniques used to study bees do not interfere with the behaviors being studied. Because of this, it has been necessary to develop a range of techniques for pharmacological manipulation of honey bees. In this paper we demonstrate methods for treating restrained or free-flying honey bees with a wide range of pharmacological agents. These include both noninvasive methods such as oral and topical treatments, as well as more invasive methods that allow for precise drug delivery in either systemic or localized fashion. Finally, we discuss the advantages and disadvantages of each method and&#160;describe common hurdles and how to best overcome them. We conclude with a discussion on the importance of adapting the experimental method to the biological questions rather than the other way around.

Neuropharmacological Manipulation of Restrained and Free-flying Honey Bees, Apis mellifera

This manuscript describes several protocols for administering pharmacological agents to honey bees, including simple noninvasive methods for free-flying bees, as well as more invasive variants that allow precise localized treatment of restrained bees.

מניפולציה Neuropharmacological של מאופקים חינם-עף דבש דבורים,<em&gt; Apis mellifera</em

Honey bees demonstrate astonishing learning abilities and advanced social behavior and communication. In addition, their brain is small, easy to visualize ...