עבודה זו מומנה על ידי תוכנית המסגרת השביעית של הקהילה האירופית (FP7/2007-2013) מענק לפי הסכם n ° 201024 ו n ​​° 202213 (רשת שבץ האירופי). מימון נוסף ניתנה על ידי für Bundesministerium Bildung und Forschung (המרכז לחקר שבץ ברלין), ואת Forschungsgemeinschaft דויטשה (Exzellenzcluster NEUROCURE). המחברים מבקשים להודות Mareike Thielke (Dep. עבור Experimental Neurology, Charité ברלין) על התמיכה במהלך המבצע אלקה לודוויג (Charité שירותי וידאו) להפקת האנימציה.

כדי להבטיח איכות reproducibility גבוהה, אנו ממליצים על שימוש נהלי עבודה סטנדרטיים (SOP). בסרטון הזה, SOPs שפורסם התפתח בשימוש במעבדה שלנו מוחלים 1. 1. התיכון חסימת העורקים מוחין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים הם מורדמים עם המשטר הרדמה המתאים להתייעץ עם צוות וטרינרי. (אינדוקציה למשל עם 1.5 - 2% Isoflurane ותחזוקה עם 1.0-1.5% Isoflurane ב 2 / 3 N 2 O ו - 1 / 3 O2 שימוש במכשיר אידוי). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טמפרטורת הגוף של העכברים נשמר 36.5 ° C ± 0.5 מעלות צלזיוס במהלך הניתוח עם צלחת החימום. חימום מבוקר משוב כרית, אשר מחמם על פי הטמפרטורה בפי הטבעת של העכבר, מומלץ מאוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את העור שמסביב פרווה עם סוכן מתאים (למשל 70% אתיל אלכוהול) ויבש אותו לאחר מכן. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתך בצוואר קו האמצע הוא עשה את הרקמות הרכות נמשכים מזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עורק התרדמה השמאלי משותף (LCCA) הוא גזור בקפידה ללא העצבים הסובבים (מבלי לפגוע עצב מחנק) ו ליגטורה נעשית באמצעות 6.0/7.0 מחרוזת. מחרוזת 5.0 יכול לשמש גם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עורק התרדמה השמאלי חיצוני (LECA) מופרד אז הקשר השני הוא עשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב הבא, עורק התרדמה הפנימי השמאלי (LICA) מופרד קשר מוכנה עם נימה 6.0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר השגת תצפית טובה על עורק התרדמה הפנימי השמאלי (LICA) ואת pterygopalatine העורק השמאלי (אמ&quot;ע), העורקים הן מקוטע, באמצעות קליפ כלי הדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חור קטן הוא חתך LCCA לפני שהוא bifurcates את LECA ואת LICA. Monofilament עשוי ניילון 8.0 מצופה בתערובת hardener סיליקון (ראו להלן) הוא הציג אז אל LICA, עד שייעצר על קליפ. שימו לב יש לשלם לא להיכנס עורק העורפית. (איור 1) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העורקים מקוטע נפתחים בעוד נימה מוכנס לתוך LICA כדי לחסום את המקור של LMCA במעגל של ויליס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקשר השלישי על LICA סגור כדי לתקן את הסיב בעמדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העכברים לקבל 0.5 מ&quot;ל תמיסת מלח תת עורי כמו חידוש נפח. להקלה על הכאב, לידוקאין הוא ג&#39;ל למריחה על העור, בתוך הפצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם reperfusion נועד, עכברים להישאר 30-90 דקות חסימה בכלוב מחומם, הפצע יכול להיות סגור עם קליפ תפר קטן. לאחר מכן, הרדמה השני הוא ביצע, את הקשר השלישי הרשפ&quot;ת היא רגעית נפתחה החוט נסוגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התפרים הנותרים הם קיצרו את העור מותאם עם תפר כירורגי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל בעלי החיים מקבלים חידוש הכרך השני כמתואר לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיות הן לשים בכלוב מחומם למשך שעתיים כדי לשלוט על טמפרטורת הגוף. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי חיים חייבים להיבדק מדי יום לאחר הניתוח סימנים של אי נוחות. העכברים יכול להראות כמה אובדן משקל שלאחר הניתוח. הם מקבלים מזון מחית בצלחת פטרי, שהונח על הרצפה כדי לעודד אכילה. האוכל מוחלף מדי יום במשך שבעה ימים. </li></ol></li></ol> 2. שאם מבצע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור פעולות זיוף החוט מוכנס כדי לחסום LMCA ומסוגר באופן מיידי כדי לאפשר reperfusion מיידיות (1.8). המבצע הבאים זהה לזו של בעלי חיים שעברו ischaemia מוחין (1.9-1.14) כולל הרדמה השני. </li></ol> 3. הכנת החוט <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עקרות של החוט צריך להיחשב. שימוש בציוד עיקור וכן וטיפול הולם נימה לאחר מכן היא תנאי הכרחי ניתוח סטרילי. חיטוי של נימה היא קשה, שכן רבות מהשיטות הנפוצות עיקור עלולה להחמיר את איכות החוט. אולם שיטות כגון קרינה, למשל עם אור UV או קרני γ, או עיקור כימי, למשל עם גזים תגובתי כגון אתילן אוקסיד, תקפים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 8.0 חוט ניילון הוא חתך לתוך באורכים של 11 מ&quot;מ מתחת למיקרוסקופ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קצה החוט חייב להיות מצופה לחלוטין באופן שווה על פני אורך של 8 מ&quot;מ בתערובת של hardener Xantopren M רירית Activator NF Optosil </li></ol> 4. נציג תוצאות בהתאם תקופת ההגבלה זרימת הדם, מנוע שונה והתנהגותיים בעקבות גירעונות. גם אחרי 30 ו - 60 דקות של ischaemia מוחין, חיות ברוב המקרים להראות התנגדות ירד לדחוף לרוחב והקיפו בשל הפרעה לתנועה. פצעים קלים להתבטא במצב מכופף את li מולMBS. סימנים אלו נצפות בקלות יכול לשמש ציון בסיסי להצלחת המבצע. 2 מורפולוגית הנגע ניתן להעריך או באמצעות היסטולוגיה או תהודה מגנטית (MRI). שישים דקות חסימה של עורק המוח האמצעי מייצרת pannecrosis רקמה בשטח כולל בסטריאטום והן הניאוקורטקס, ואילו 30 דקות של ischaemia לגרום מוות של תאים עצביים בעיקר מוגבל בסטריאטום. 3 (איור 2) מבחינת היקף האוטם, אנו מצפים סטיית תקן נמוכה יותר מאשר 30% בערכה של פעולות. התמותה תלויה בזמן עם חסימה סביב 5% לאחר 30 דקות של ischaemia ו 10 - 20% לאחר 60 דקות. אפשרות נוספת פולשני מינימלי הוא השימוש לייזר דופלר flowmetry (LDF) במהלך המבצע, המאפשר שליטה ישירה של ההצלחה שלה. בשנת חיה בודדים, הפחתה עד 10 - 20% של ערכים preocclusion מצביע בבירור על גיוס מוצלח של איסכמיה מוחית מוקד 4 עם זאת, LDF אינו יכול לשמש כאמצעי להשוואות interindividual, מאז LDF יכול רק למדוד שינויים כמותיים (באחוזים) של דם. הזרימה בתוך נפח קטן ומוגבל דגימת רקמות. זה לא נותן מידע על היקף המרחבי של הפחתת זרימת הדם. 5 ישנן מספר בדיקות כדי להעריך את ההיבטים ההתנהגותיים לאחר שבץ, ניתוח כולל הילוך 6,7, Rotarod 8, הקוטב מבחן 9,10 הבדיקה, הסרת דבק 11,12, 13,14 גרם מדרגות מבחן, מבחן שלב בסולם 15,16 ו מבוך מוריס מים 17. בכל המבחנים הללו, עכברים נתון MCAo לבצע בהצלחה פחות מאשר בעלי חיים שליטה. <img src="/files/ftp_upload/2423/2423fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. Scheme של ארכיטקטורת כלי לספק את המוח (מתואר ברקע) ב העכבר. זנים שונים עשויים להציג וריאציות, למשל העורק העורפית לפעמים עלים בעורק התרדמה הפנימי. <img src="/files/ftp_upload/2423/2423fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. איור סכמטי של נגעים גדלים בדרך כלל אחרי נקודות זמן שונות של reperfusion במודל MCAo הפרוקסימלי. באמצע, במהלך אופייני של פעילות פונקציונלית זרימת הדם במוח לאחר MCAo מתוארים. (MCAo: חסימה בעורק המוח התיכון, LDF: לייזר דופלר למדידת זרם)

<ol>
	<li>Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+operating+procedures+(SOP)+in+experimental+stroke+research:+SOP+for+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse.">Standard operating procedures (SOP) in experimental stroke research: SOP for middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Nature Precedings. , (2010).</li><li>Bederson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+middle+cerebral+artery+occlusion:+evaluation+of+the+model+and+development+of+a+neurologic+examination.">Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination.</a> Stroke. 17, 472-476 (1986).</li><li>Katchanov, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+neuronal+vulnerability+following+mild+focal+brain+ischemia+in+the+mouse.">Selective neuronal vulnerability following mild focal brain ischemia in the mouse.</a> Brain Pathol. 13, 452-464 (2003).</li><li>Dirnagl, U., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Complexities, Confounders, and Challenges in Experimental Stroke Research: A checklist for researchers and reviewers in Rodent models of stroke. , 267-267 (2010).</li><li>Dirnagl, U., Kaplan, B., Jacewicz, M., Pulsinelli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+measurement+of+cerebral+cortical+blood+flow+by+laser-Doppler+flowmetry+in+a+rat+stroke+model.">Continuous measurement of cerebral cortical blood flow by laser-Doppler flowmetry in a rat stroke model.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 9, 589-596 (1989).</li><li>Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+analysis+of+gait+impairment+after+experimental+stroke+and+the+therapeutic+effect+of+environmental+enrichment+in+rats.">A comprehensive analysis of gait impairment after experimental stroke and the therapeutic effect of environmental enrichment in rats.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 28, 1936-1950 (2008).</li><li>Lubjuhn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+testing+in+a+mouse+stroke+model+induced+by+occlusion+of+the+distal+middle+cerebral+artery.">Functional testing in a mouse stroke model induced by occlusion of the distal middle cerebral artery.</a> J Neurosci Methods. 184, 95-103 (2009).</li><li>Jones, B. J., Roberts, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+quantiative+measurement+of+motor+inco-ordination+in+naive+mice+using+an+acelerating+rotarod.">The quantiative measurement of motor inco-ordination in naive mice using an acelerating rotarod.</a> J Pharm Pharmacol. 20, 302-304 (1968).</li><li>Matsuura, K., Kabuto, H., Makino, H., Ogawa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pole+test+is+a+useful+method+for+evaluating+the+mouse+movement+disorder+caused+by+striatal+dopamine+depletion.">Pole test is a useful method for evaluating the mouse movement disorder caused by striatal dopamine depletion.</a> J Neurosci Methods. 73, 45-48 (1997).</li><li>Bouet, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensorimotor+and+cognitive+deficits+after+transient+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse.">Sensorimotor and cognitive deficits after transient middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Exp Neurol. 203, 555-567 (2007).</li><li>Freret, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+administration+of+deferoxamine+reduces+brain+damage+and+promotes+functional+recovery+after+transient+focal+cerebral+ischemia+in+the+rat.">Delayed administration of deferoxamine reduces brain damage and promotes functional recovery after transient focal cerebral ischemia in the rat.</a> Eur J Neurosci. 23, 1757-1765 (2006).</li><li>Modo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurological+sequelae+and+long-term+behavioural+assessment+of+rats+with+transient+middle+cerebral+artery+occlusion.">Neurological sequelae and long-term behavioural assessment of rats with transient middle cerebral artery occlusion.</a> J Neurosci Methods. 104, 99-109 (2000).</li><li>Montoya, C. P., Campbell-Hope, L. J., Pemberton, K. D., Dunnett, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+"staircase+test":+a+measure+of+independent+forelimb+reaching+and+grasping+abilities+in+rats.">The "staircase test": a measure of independent forelimb reaching and grasping abilities in rats.</a> J Neurosci Methods. 36, 2-3 (1991).</li><li>Baird, A. L., Meldrum, A., Dunnett, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+staircase+test+of+skilled+reaching+in+mice.">The staircase test of skilled reaching in mice.</a> Brain Res Bull. 54, 243-250 (2001).</li><li>Metz, G. A., Whishaw, I. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+and+subcortical+lesions+impair+skilled+walking+in+the+ladder+rung+walking+test:+a+new+task+to+evaluate+fore-+and+hindlimb+stepping,+placing,+and+co-ordination.">Cortical and subcortical lesions impair skilled walking in the ladder rung walking test: a new task to evaluate fore- and hindlimb stepping, placing, and co-ordination.</a> J Neurosci Methods. 115, 169-179 (2002).</li><li>Farr, T. D., Liu, L., Colwell, K. L., Whishaw, I. Q., Metz, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bilateral+alteration+in+stepping+pattern+after+unilateral+motor+cortex+injury:+a+new+test+strategy+for+analysis+of+skilled+limb+movements+in+neurological+mouse+models.">Bilateral alteration in stepping pattern after unilateral motor cortex injury: a new test strategy for analysis of skilled limb movements in neurological mouse models.</a> J Neurosci Methods. 153, 104-113 (2006).</li><li>Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developments+of+a+water-maze+procedure+for+studying+spatial+learning+in+the+rat.">Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat.</a> J Neurosci Methods. 11, 47-60 (1984).</li><li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.+I:+a+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema. I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Endres, M., Dirnagl, U., Alzheimer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+Strategies+in+Animal+and+in+vitro-Models+of+Neuronal+Damage:+Ischemia+and+Stroke.">Neuroprotective Strategies in Animal and in vitro-Models of Neuronal Damage: Ischemia and Stroke.</a> Molecular and Cellular Biology of Neuroprotection in the CNS. , 455-474 (2003).</li><li>Dirnagl, U., Iadecola, C., Moskowitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathobiology+of+ischaemic+stroke:+an+integrated+view.">Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view.</a> Trends Neurosci. 22, 391-397 (1999).</li><li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+Stroke+Model+Guidelines+for+Preclinical+Stroke+Trials+(1st+Edition).">Rodent Stroke Model Guidelines for Preclinical Stroke Trials (1st Edition).</a> J Exp Stroke Transl Med. 2, 2-27 (2009).</li><li>Chen, Y., Ito, A., Takai, K., Saito, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blocking+pterygopalatine+arterial+blood+flow+decreases+infarct+volume+variability+in+a+mouse+model+of+intraluminal+suture+middle+cerebral+artery+occlusion.">Blocking pterygopalatine arterial blood flow decreases infarct volume variability in a mouse model of intraluminal suture middle cerebral artery occlusion.</a> J Neurosci Methods. 174, 18-24 (2008).</li><li>Tsuchiya, D., Hong, S., Kayama, T., Panter, S. S., Weinstein, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+suture+size+and+carotid+clip+application+upon+blood+flow+and+infarct+volume+after+permanent+and+temporary+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Effect of suture size and carotid clip application upon blood flow and infarct volume after permanent and temporary middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Brain Res. 970, 1-2 (2003).</li><li>Beckmann, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+magnetic+resonance+angiography+non-invasively+reveals+mouse+strain+differences+in+the+cerebrovascular+anatomy+in+vivo.">High resolution magnetic resonance angiography non-invasively reveals mouse strain differences in the cerebrovascular anatomy in vivo.</a> Magn Reson Med. 44, 252-258 (2000).</li><li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy.">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 13, 683-692 (1993).</li><li>Florian, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia.">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neurosci Lett. 438, 180-185 (2008).</li><li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats.">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349, 130-132 (2003).</li><li>Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-regulated+model+of+focal+ischemia+in+the+mouse:+a+study+with+histopathological+and+behavioral+outcomes.">Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes.</a> Stroke. 35, 1720-1725 (2004).</li><li>Shin, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild+induced+hypertension+improves+blood+flow+and+oxygen+metabolism+in+transient+focal+cerebral+ischemia.">Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 39, 1548-1555 (2008).</li><li>Bottiger, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cerebral+ischemia+due+to+cardiocirculatory+arrest+in+mice+causes+neuronal+degeneration+and+early+induction+of+transcription+factor+genes+in+the+hippocampus.">Global cerebral ischemia due to cardiocirculatory arrest in mice causes neuronal degeneration and early induction of transcription factor genes in the hippocampus.</a> Brain Res Mol Brain Res. 65, 135-142 (1999).</li><li>Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+induced+prolonged+protection+against+cerebral+ischemia+in+mice:+a+redox+sensitive+mechanism.">Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism.</a> Neuroreport. 13, 1431-1435 (2002).</li><li>Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+stroke+protection+by+physical+activity.">Mechanisms of stroke protection by physical activity.</a> Ann Neurol. 54, 582-590 (2003).</li><li>Gertz, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+activity+improves+long-term+stroke+outcome+via+endothelial+nitric+oxide+synthase-dependent+augmentation+of+neovascularization+and+cerebral+blood+flow.">Physical activity improves long-term stroke outcome via endothelial nitric oxide synthase-dependent augmentation of neovascularization and cerebral blood flow.</a> Circ Res. 99, 1132-1140 (2006).</li><li>Richter, S. H., Garner, J. P., Wurbel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+standardization:+cure+or+cause+of+poor+reproducibility+in+animal+experiments.">Environmental standardization: cure or cause of poor reproducibility in animal experiments.</a> Nat Methods. 6, 257-261 (2009).</li><li>Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spectrum+of+systemic+immune+alterations+after+murine+focal+ischemia:+immunodepression+versus+immunomodulation.">The spectrum of systemic immune alterations after murine focal ischemia: immunodepression versus immunomodulation.</a> Stroke. 40, 2849-2858 (2009).</li><li>Meisel, C., Schwab, J. M., Prass, K., Meisel, A., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+nervous+system+injury-induced+immune+deficiency+syndrome.">Central nervous system injury-induced immune deficiency syndrome.</a> Nat Rev Neurosci. 6, 775-786 (2005).</li><li>Engel, O., Meisel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+Infection+Before+and+After+Stroke:+Investigating+New+Targets.">Models of Infection Before and After Stroke: Investigating New Targets.</a> Infect Disord Drug Targets. 9, (2010).</li><li>Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bench+to+bedside:+the+quest+for+quality+in+experimental+stroke+research.">Bench to bedside: the quest for quality in experimental stroke research.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 26, 1465-1478 (2006).</li><li>Macleod, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Good+laboratory+practice:+preventing+introduction+of+bias+at+the+bench.">Good laboratory practice: preventing introduction of bias at the bench.</a> Stroke. 40, 50-52 (2009).</li><li>Group, S. T. A. I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+standards+regarding+preclinical+neuroprotective+and+restorative+drug+development.">Recommendations for standards regarding preclinical neuroprotective and restorative drug development.</a> Stroke. 30, 2752-2758 (1999).</li></ol>

ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי Landesamt fuer גזונטהייד und Soziales, ברלין, גרמניה.

המודל של חולף, הפרוקסימלי MCA חסימה 18,19 המוצגים כאן מחקה את אחד הסוגים הנפוצים ביותר של שבץ איסכמי בחולים. סמך 20 פעמים reperfusion משתנה, המודל מציע דרגות שונות של נזק החל התקף איסכמי חולף (TIA) גדולים אוטמים כולל החלקים העיקריים של האונה איסכמי. זו מאפשרת לחוקר לבחון מנגנוני pathophysiological שונה לאחר שבץ. 20,21 הניתוח יכול להתבצע בתוך פרק זמן קצר ומייצרת נגעים לשעתקו מאוד. עם זאת, זה דורש בקרה מעמיקה של לערפלנים. 22 הבדלים קטנים בטכניקת הניתוח עשוי להסביר את השפעות שונות על האוטם. 23,24 יתר על כן, בשל סטיות באנטומיה של כלי הדם המוחיים, עכבר זנים שונים להראות תוצאה אחרת. 25,26 גוף הטמפרטורה משפיעה על נזק נוירולוגי, עם היפותרמיה המוביל נגעים קטנים 27 ו היפרתרמיה כדי גירעונות חמורים יותר. 28 לפיכך, בקרת טמפרטורה ותחזוקה רלוונטי ביותר במודל זה. 29 בנוסף, לחץ הדם ואת גזי הדם לערפלנים חשוב של התוצאה ואת הצורך להיות במעקב. 30,31 שימוש בשיטות פולשניות מהיר מינימלי (לא פולשנית למדידת לחץ דם, מתאים וקל נגיש אוסף אתרים דם) מומלץ. הבחירה של ההרדמה הוא גם חשוב מאוד, כמו כמה יש תופעות neuroprotective, ו / או להיות vasodilators, כמו למשל Isoflurane. 32 כתוצאה מכך, החשיפה הרדמה צריך להיות קצר ככל האפשר סטנדרטית. אנו לא כוללים חיות אשר עברו ניתוח דקות יותר מ 15. גילוח באתר כירורגית מייצרת microabrasions ודלקת ומשחרר שברי שיער. זה עשוי להגביר את הדלקת לטפח זיהום מקומי, אשר עשוי להשפיע על פתופיזיולוגיה שבץ. תנאי הדיור, במיוחד את השימוש העשרה, עשוי להשפיע על התוצאה שבץ צריך להיות סטנדרטי המתואר דוחות מחקר. 6,33,34 השימוש העשרת הסביבה והשפעתה על reproducibility היא עניין של דיון. Confounder 35 נוסף חשוב הוא הסיכון הנגרם משבץ עבור זיהום במיוחד לאחר פעמים יותר של ischaemia 36, אשר מוביל לתחלואה ותמותה מוגברת נוספים. 37,38 כמו זיהומים להיות סימפטומטי בסביבות יום 3-5, זה יש השלכות חשובות לטווח ארוך מעקב מודלים כאלה. כדי לייצר תוצאות רלוונטיות לפיתוח אסטרטגיות טיפול חדשנית סטנדרטיזציה שבץ, בקרת איכות חשוב ביותר במחקר קליני שבץ translational 39 &quot;נהלי מעבדה תקינים&quot; 40,41 מנדטים.: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיאור הולם ומפורט של בעלי החיים המשמשים; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גודל המדגם חישוב ודיווח על גודל ההשפעה הצפויה; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכלה והדרה קריטריונים, הקים לפני המחקר; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אקראיות ההקצאה לקבוצות; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקצאת הסתרה לגבי החוקרים; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דיווח חיות מחוץ ניתוח; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערכה עיוור התוצאה; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דיווח התנגשויות פוטנציאליות של עניין מימון ללימודים. </li></ol>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Surgical scissors (skin cut)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>14028-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2 Dumont forceps (Medical #5 straight tip)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>11253-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Spring scissors (according to Vannas)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>15000-00</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Applying forceps for micro clamps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>00072-14</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micro vascular clamp (e.g. S&amp;G B1-V)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>00396-01</td>
<td>Also Serrefine possible</td>
</tr>
<tr>
<td>2 Hemostats according to Hartmann</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>13002-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle holder (according Olsen-Hegar or other)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>12002-14</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Standard anatomical forceps (for wound closure)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>11000-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5/0 sutures </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Suprama</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>for vascular ligatures</td>
</tr>
<tr>
<td>6/0 sutures </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Suprama</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>for skin suture, 5/0 also possible</td>
</tr>
<tr>
<td>Lidocaine (e.g. Xylocain Gel 2%)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Astra Zeneca</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>or other local pain relief</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting microscope (stereo microscope), magnification 6x to max. 40x</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica Zeiss</td>
<td>MZ6 Stemi2000C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cold light source</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>KL1500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Temperature feedback controlled heating pad system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>21052-00</td>
<td>With mouse pad and small probe</td>
</tr>
<tr>
<td>Anaethesia system for isoflurane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isoflurane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Abott</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Veterinary Recovery Chamber</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Peco Services</td>
<td>V1200</td>
<td>Heated cage</td>
</tr>
<tr>
<td>8.0 nylon filament</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Suprama</td>
<td>TEL181005</td>
<td>for coating</td>
</tr>
<tr>
<td>Scalpel</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>For cutting filament in pieces</td>
</tr>
<tr>
<td>Ruler</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>To cut correct length of filament</td>
</tr>
<tr>
<td>Xantopren M Mucosa</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Heraeus Kulzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Activator Universal Plus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Heraeus Kulzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Optosil - Xantopren</td>
</tr>
<tr>
<td>2 Dumont forceps (Medical #5 straight tip)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FST</td>
<td>11253-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>A soft underlay for storing and grasping the uncoated filaments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>e.g. swabs, foam, &#x2026;</td>
</tr>
<tr>
<td>Receptacle for new build filaments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>e.g. petri dish, flexible foam,&#x2026;</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model

שבץ מוחי הוא בין הגורמים השכיחים ביותר למוות ונכות מבוגר, במיוחד במדינות מפותחות. עם זאת, אפשרויות הטיפול עד כה מוגבלים מאוד. כדי לענות על הצורך גישות טיפוליות הרומן, שבץ מחקר ניסיוני לעתים קרובות מעסיקה מודלים מכרסמים ischaemia מוחי מוקדי. רוב החוקרים להשתמש חסימה קבועה או חולפת של עורק המוח האמצעי (MCA) בעכברים או חולדות. חסימה הפרוקסימלי של עורק המוח האמצעי (MCA) באמצעות טכניקת תפר intraluminal (מה שנקרא חוט להט או מודל תפר) הוא כנראה דגם הנפוצות ביותר בשימוש במחקר ניסיוני שבץ. המודל intraluminal MCAO מציעה את היתרון של גרימת ischaemia חולפת או קבועה לשחזור השטח MCA בצורה יחסית לא פולשנית. גישות Intraluminal לקטוע את זרימת הדם בכל השטח של העורק הזה. נימה חסימה ובכך מעצרים תזרים הפרוקסימלי של lenticulo-מפוספסים העורקים, אשר מספקים את הגרעינים הבזליים. נימה חסימה של תוצאות MCA בנגעים לשחזור בקליפת המוח ואת בסטריאטום והוא יכול להיות קבוע או חולף. לעומת זאת, מודלים גרימת דיסטלי (עם הסתעפות של lenticulo-מפוספסים העורקים) MCA חסימה בדרך כלל לחסוך בסטריאטום ובעיקר לערב את הניאוקורטקס. בנוסף המודלים האלה דורשים craniectomy. במודל הפגינו במאמר זה, חוט סיליקון מצופה מוחדר לעורק התרדמה המשותף ומתקדם לאורך בעורק התרדמה הפנימי לתוך המעגל של ויליס, שם הוא חוסם את מקורו של עורק המוח האמצעי. בחולים, occlusions של עורק המוח האמצעי הם בין הגורמים השכיחים ביותר של שבץ איסכמי. מאז במרווחים משתנים איסכמי ניתן לבחור בחופשיות במודל זה תלוי בנקודת הזמן של reperfusion, נגעים איסכמיים בדרגות שונות של חומרה יכול להיות מיוצר. Reperfusion על ידי הסרת החוט occluding לפחות חלקית מודלים החזרת זרימת הדם לאחר תמוגה (tPA) ספונטני או טיפולית של קריש תרומבואמבוליים בבני אדם. בסרט זה נציג את הטכניקה הבסיסית, כמו גם את החסרונות העיקריים לערפלנים אשר עלולה להגביל את ערך החיזוי של המודל הזה.

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model at JoVE.com

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

פילמנטיות חסימה של עורק המוח התיכון הוא מודל משותף לחקר שבץ איסכמי בעכברים.

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

modeling-stroke-mice-middle-cerebral-artery-occlusion-with-filament

Research

JoVE Journal

Medicine

91.0K Views.  Center for Stroke Research Berlin, Charité Universitätsmedizin. פילמנטיות חסימה של עורק המוח התיכון הוא מודל משותף לחקר שבץ איסכמי בעכברים.

Video: Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Intraluminal העורקים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) מודל שבץ איסכמי עם הדרכה דופלר Flowmetry לייזר עכברים

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

אנדותלין-1 דגם מושרה מזרח מוחות עורקים ספיגים לשבץ איסכמי עם הדרכת Flowmetry ליזר דופלר בעכברוש

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

ניצול חלון גולגולת לדמיין עורק המוח האמצעי במהלך ספיג אנדותלין-1 מושרה מזרח מוחות עורקים

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

מערכת אופטימלית לניטור זלוף מוחות במודל שבץ העכברוש של חסימת עורק מוח האמצעית intraluminal

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

דוגמנות שבץ בעכברים: קרישה קבועה של עורקי דיסטלי התיכון מוחין

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

עורקי תסחיפים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) לשבץ איסכמי עם קרישי דם הומולוגיים בחולדות

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week protocol for repetitive hypoxic preconditioning (RHP) induces long-term protection against central nervous system (CNS) injury in a mouse model of focal ischemic stroke. RHP consists of 9 stochastic exposures to hypoxia that vary in both duration (2 or 4 hr) and intensity (8% and 11% O2). RHP reduces infarct volumes, blood-brain barrier (BBB) disruption, and the post-stroke inflammatory response for weeks following the last exposure to hypoxia, suggesting a long-term induction of an endogenous CNS-protective phenotype. The methodology for the dual quantification of infarct volume and BBB disruption is effective in assessing neurovascular protection in mice with RHP or other putative neuroprotectants. Adult male Swiss Webster mice were preconditioned by RHP or duration-equivalent exposures to 21% O2 (i.e. room air). A 60 min transient middle cerebral artery occlusion (tMCAo) was induced 2 weeks following the last hypoxic exposure. Both the occlusion and reperfusion were confirmed by transcranial laser Doppler flowmetry. Twenty-two hr after reperfusion, Evans Blue (EB) was intravenously administered through a tail vein injection. 2 hr later, animals were sacrificed by isoflurane overdose and brain sections were stained with 2,3,5- triphenyltetrazolium chloride (TTC). Infarcts volumes were then quantified. Next, EB was extracted from the tissue over 48 hr to determine BBB disruption after tMCAo. In summary, RHP is a simple protocol that can be replicated, with minimal cost, to induce long-term endogenous neurovascular protection from stroke injury in mice, with the translational potential for other CNS-based and systemic pro-inflammatory disease states.

This protocol describes repetitive hypoxic preconditioning, or brief exposures to systemic hypoxia that reduce infarct volumes and blood-brain barrier disruption following transient middle cerebral artery occlusion in mice. It also details dual quantification of infarct volume and blood-brain barrier disruption after stroke to assess the efficacy of neurovascular protection.

כימות של הגנת עצבים וכלי דם בעקבות חסימת עורק חוזר חוסר חמצן אכשור קד וחלוף התיכון מוחין של עכברים

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, obesity and diabetes. Accordingly, when evaluating therapies for stroke in animals, it is important to select a model with excellent face validity. Ischemic stroke accounts for 80% of all strokes, and the majority of these occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), often inducing infarcts that affect the sensorimotor cortex, causing persistent plegia or paresis on the contralateral side of the body. We demonstrate in this video a method for producing ischemic stroke in elderly rats, which causes sustained sensorimotor disability and substantial cortical infarcts. Specifically, we induce permanent distal middle cerebral artery occlusion (MCAO) in elderly female rats by using diathermy forceps to occlude a short segment of this artery. The carotid artery on the ipsilateral side to the lesion was then permanently occluded and the contralateral carotid artery was transiently occluded for 60 min. We measure the infarct size using structural T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) at 24 hr and 8 weeks after stroke. In this study, the mean infarct volume was 4.5% &#177; 2.0% (standard deviation) of the ipsilateral hemisphere at 24 hr (corrected for brain swelling using Gerriet&#8217;s equation, n = 5). This model is feasible and clinically relevant as it permits the induction of sustained sensorimotor deficits, which is important for the elucidation of pathophysiological mechanisms and novel treatments.

Here we present a protocol to produce permanent distal middle cerebral artery occlusion in elderly female rats with simultaneous occlusion of the carotid arteries to generate large cortical infarcts and sustained deficits. We show confirmation of the lesion size using structural MRI at 24 hr and 8 weeks after stroke.

Performing מוחות תיכונים דיסטלי קבוע עם ספיגה עורקת Common הראש אצל חולדות בנים לחקר קורטיקלי איסכמיה עם נכות קבועה זה

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ischemic in origin and occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA). Currently the only Food and Drug Administration (FDA) approved drug for the treatment of this devastating disease is tissue plasminogen activator (tPA). However, tPA has a small therapeutic window for administration (3 - 6 hr), and is only effective in 4% of the patients who actually receive it. Current research focuses on understanding the pathophysiology of stroke in order to find potential therapeutic targets. Thus, reliable models are crucial, and the MCA occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) is deemed to be the most clinically relevant surgical model of ischemic stroke, and is fairly non-invasive and easily reproducible. Typically the MCAo model is used with rodents, especially with mice due to all the genetic variations available for this species. Here we describe (and present in the video) how to successfully perform the MCAo model (with reperfusion) in mice to generate reliable and reproducible data.

In order to understand the pathophysiology of stroke, it is important to use reliable models. This paper will describe one of the most frequently used stroke models in mice, termed the middle cerebral artery occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) with reperfusion.