עבודה זו נתמכה על ידי &quot;סוכנות הידיעות הלאומית de la משוכלל ונדיר&quot; מענק ANR-09-JCJC-0117-01 ו &quot;Neuropôle דה משוכלל ונדיר Francilien-נרף&quot; מענק רומן Chery. אנו מודים לפבר פרנסואז לפיתוח תוכנה ב + + C / Qt ו לורן פינו ובטיסט Janvier לעזרה בפיתוח ההתקנה הדמיה אופטית.

1. הכנת בעלי חיים הדמיה (בהתאם להמלצות האירופי לטיפול ושימוש בחיות מעבדה, הוראה 86/609/EEC) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 6 עד 8 שבועות הישן C57BL6 עכברים זכרים מורדמים עם קוקטייל של קטמין (10mg/kg) ו xylazine (100mg/kg) מוזרק intraperitonealy. הניתוח מתחיל כאשר העכבר אינו מגיב hindpaw קמצוץ. במהלך הניסוי כולו החיה מושם על כרית חימום. טמפרטורת הגוף מנוטר באופן רציף ומתוחזק על 37 ° C. עומק ההרדמה נשמר לאורך כל הניתוח על ידי הפעלת הדמיה לבדוק את העדרו של איבר לסגת. הזרקה תת עורית של 20% קוקטייל ההרדמה הראשוני הוא מנוהל אחרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת קוצץ, להסיר את השיער מן הקרקפת. נקו את העור חשוף משיער שיורית באמצעות גזה סטרילית ספוגה מלוחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקמו את העכבר בתוך מסגרת stereotaxic. חוטם צריך להיות במישור זהה האחורי של הראש,על מנת להגדיר את פני השטח של הנורה חוש הריח כדי האופקי. מאובטח היטב את האוזן וברים האף על מנת למנוע תנועות במהלך ההדמיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחה עיניים על העיניים של בעלי חיים כדי למנוע התייבשות וכאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את כל מכשירי ניתוח עם אתנול 70 מעלות ובאזור הקרקפת עם מטאטא רצופים של בבטאדין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להסיר את העור המכסה את הגולגולת, להתחיל על ידי ביצוע חתך בעור במספריים בחלק האחורי של הראש בין האוזניים. ואז לחתוך לכיוון הבסיס של האוזן לכיוון anteroposterior לכיוון המצח לאורך העפעפיים של שני הצדדים. סיום להסיר את הקרקפת על ידי חיתוך העור על גבי חוטם קרוב לבר האף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת תצפית המשקפת, השתמש במקלון צמר גפן ספוג מלוחים בעדינות כדי לנתק את periosteum על החלק העליון של הגולגולת. השתמש זוג מלקחיים כדי להסיר את הרקמות שנותרו לגרד את פני השטח של הגולגולת עם אזמל יש הכנה נקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl">OB הוא מבנה סימטרי מורכב משני hemibulbs אשר ממוקמים בין העפעפיים. הם מוגבלים מקורי ו לכיוון הזנב על ידי סינוס ורידי, ו מופרדים על ידי תפר sagittal. מניחים חתיכת ספוג הג&#39;לטין נספגים ספוגה במים מזוקקים על העצם מעל OB. חשוב לשמור על לחות באזור העצם לאורך כל הניסוי. </li></ol> 2. הכנת חלון גולגולתי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את ספוג הג&#39;לטין ולהתחיל ידי מגרדים בעדינות את העצם עם להב n 10 ° אזמל. שמור על זווית קבועה של 45 מעלות בין להב לבין העצם, ולהעביר את הלהב מן העפעפיים לצד sagittal האזור הנורה. אין להפעיל לחץ אנכי על העצם או לשרוט את העצם מעל הסינוס ורידי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך תהליך דילול, להפסיק כל 5min והמקום ספוג הג&#39;לטין hydrated על העצם להתקרר ההכנה. ספוגית את הגולגולת עם הספוג כדי להסיר אבק העצם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור גורפתקירור לחילופין עד לדמיין את trabeculae, שכבת עצם ספוגית. Vasculature קנס של OB חייב להיות גלוי בשלב זה. עצור מגרד את העצם, ולהתחיל להשתמש בקצה של אזמל בניצב &quot;למשוך&quot; מלבן התוחם את OB. בשלב זה n ° 11 להב אזמל ניתן להשתמש. שמור את הניתוח בתוך גבולות של הסינוסים ורידי שאמור להיות בטוח לשבץ כל אזמל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Dig בהדרגה התעלה מלבני נוצר באמצעות תנועות רצופות של אזמל. נגבו את קצה את האזמל מעת לעת לנקות אותו ולשמור אותו חדה. היה זהיר במיוחד של עומק קצה אל תיגע במשטח הדורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לקבל תחושה של עובי של העצם הנותרים, לדחוף אותו בעדינות עם קצה של זוג מלקחיים. אם קפלי דש העצם תחת לחץ, לעבור לשלב הבא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת טיפת מלח, השתמש קצה של אזמל אוריינטציה אופקית להרים את דש העצם. הסרת דש חייב להיעשות גarefully להימנע לקרוע את העצמות הנותרות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר פני השטח של OB חשוף, לבדוק בהעדר דימום או כלי דם השקה. פציעה של דורה או את פני השטח רקמות תפחית את הסיכוי לקבל אותות אופטיים. נגב את האזור עם ספוג טבול ג&#39;לטין מלח כדי לשמור על לחות הנורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל מלט שיניים polyacrylate להקים גם על העצם סביב החלון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים ירידה של נקודת התכה נמוכה agarose (1.2%) על הדורה, ולשים כוס כיסוי סטרילי בכל הממדים של החלון. במהלך הפגישה הדמיה, כמות קטנה של agarose ניתן להוסיף על מנת לפצות את התייבשות. Agarose תמנע OB לנוע עם הנשימה תספק משטח שטוח עבור הדמיה אופטית. </li></ol> 3. דימות אופטי ההתקנה למיפוי פעילות חוש הריח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גירוי חוש הריח יש להגדיר במדויק על ידי שימוש olfactometer זמן ועוצמת. אנו משתמשים בגרסה מותאמת אישית של מערכת multivial זלוף Valvebank 8II מ אוטומציה מדעיים הקשורים בסיסי מדחס אוויר (אוויר דחוס לנשימה יהיה מתאים גם כן). מערכת זו מאפשרת שליטה מדויקת ומהירה שסתום חיצוני. פתרונות של odorant טהור הם בדילול מלא שמן מינרלי בריכוז שנבחר. כדי להפעיל את אלדהידים OB הגבי כגון hexanal משמשים בדרך כלל. נפח המדויק של odorant מדולל (20 עד 50μl) נטען על נייר מסנן והושמו מאגר מזרק. באמצעות מערכת זלוף, לחץ אוויר מבוקר מועבר למערכת, על מנת להבטיח שיעור קבוע של אספקת אוויר השטף odorized לאף חיה במהלך פתיחת שסתום. Odorant מועבר באמצעות צינורות Tygon R-3603 שואב אבק (Saint-Gobain Corporation) נושאת האוויר בקצב הזרימה של ~ 1000ml/min. הימנע זיהום בין odorants וכמויות שיורית של odorant בצינור. אם זמין, שחזור של הגירוי odorant ניתן controlled באמצעות גלאי יינון להבה (microFID Photovac 2020). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקנה אופטיות מופעלת. זה מורכב מקורר interlaced 12 ביטים מצלמת CCD (ORCA AG Hamamatsu) הקשורים stereomicroscope פלואורסצנטי (לייקה MZ16), olfactometer המחשב נשלט ומנורות עירור התייצב עם מסננים התערבות מתאימה bandpass. תכנית המתאר ההתקנה שלנו ניתנת באיור 2. עבור אותות אופטי פנימי דימות (IOSI), טונגסטן הלוגן 200W מנורה (אוריאל QTH) בשילוב עם אור טבעת סיבים (שוט) פקוק סביב המטרה מיקרוסקופ משמשים כדי לספק תאורה יציבה אפילו. עבור Flavoprotein autofluorescence איתותי דימות (FASI), מנורת מתכת 150W Halide (לייקה) עם מדריך הליבה 5mm אור נוזל לספק אפילו עירור מקומי של הקרינה דרך נמל עלית תאורה של stereomicroscope. רכישת תמונה וסינכרון חומרה ממומשות על ידי תוכנה מותאמת אישית. ים פתוחource תוכנה Micromanager יכול לשמש גם כדי לשלוט על הרכישה התקנה אופטיות. </li></ol> 4. הדמיה אופטית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את מסגרת stereotaxic תחת stereomicroscope, חלון גולגולתי מרוכז בתחום של תצוגה (ראה איור. 2A עבור סכמטית של ההתקנה אופטי). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את המיקרוסקופ להתמקד הנימים. לפני ניסויים גירוי (ראו תיאור 5) תמונה של הנורה הוא נלקח תחת אור (ירוק) 560nm (טבעת סיבים) אשר מספק ניגודיות טובה עבור דימות כלי הדם. תמונה זו משמשת כפקד אנטומיים כדי לבדוק את מצב הכנת והוא רכש מספר פעמים במהלך הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור IOS הדמיה, עוצמת האור משתקף שתועדו על ידי מצלמת CCD תחת 630 + / -10 ננומטר (אדום) תאורה. תמונות נרכשים על מסגרת מלאה (ללא binning) בשעה 5 פריימים לשניה אשר תואמות את זמן החשיפה של כ 150ms. כוח של מקור האור מותאם מחדש<html> אח אפור רמות לפחות ~ 3000 על שטח OB, קרוב הרוויה של פיקסלים CCD בארות. פעולה זו מאפשרת לנצל את הדינמיקה 12bits של ה-CCD כדי ללכוד שינויים בעוצמת להתעלף במהלך ההפעלה. מקסימום IOS אמפליטודות להגיע ~ 1%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור FAS דימות פלואורסצנטי נרכש תחת עירור של 480nm + /-20nm (כחול) אור epiflurorescence. סינון גבוהה לעבור על 515nm מוגדר ללכוד אור. תמונות נרכשות ב 5 פריימים לשניה עם binning של 4 על 4 על מנת למקסם את הרגישות. נורית ההפעלה עירור מותאם באופן דומה IOS עם רמות האפור של 3000 על שטח OB. מקסימום FAS אמפליטודות להגיע ~ 3%. במשך שתי שיטות הדמיה, עומק השדה במישור נושא זהה והיה נמדד 0.5 מ&quot;מ עבור הגדלה של כ 4 פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אור יש לכבות בין ניסויים הדמיה כדי למנוע חימום photobleaching של התכשיר. </li></ol>le &quot;&gt; 5. הניסויים הדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן מושב הדמיה כלל הבסיס של 5 עד 10s שהאוויר רק מועבר, ואחריו גירוי הריח במשך 3 עד 10s תלוי ריכוז הריח הנבחר, 70 עד 82s נרשמות נוסף עם זרימת אוויר מתמדת התאוששות הבסיס (איור 2A). בסוף המשפט, אור כבוי אוויר טהור מועבר על משך הניסוי בין מרווח (1 עד 3 דקות) כדי לשטוף את מולקולות הריח שיורית ולהימנע הרגלה חושית. ניסויים ריח היו משולבים עם משפטים ריקים (אספקת אוויר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ריח עורר אזורי הופעל הם דמיינו כאזורים כדורית בקירוב על המפות ועל מתאימות לגודל של glomeruli בודדים (80 עד 200μm בקוטר 9). עיבוד תמונה הוא הסביר 2B איור. מפות חוש הריח מוצגים באיור 3. בניגוד לכל מערכת חושיות אחרות, יחס אות לרעש ב OB היה מספיק כדי לפתור ריח עורר תגובות בניסויים יחיד (איור. 3B עבור IOS ו איור. 3D עבור FAS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מומתים מיד בתום הפגישה הדמיה בשיטות בהתאם להמלצות האירופי לטיפול ולשימוש בחיות מעבדה. </li></ol> 6. נציג תוצאות (ראה מפות הריח באיור 3): <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/3336/3336fig1.jpg" /> איור 1 ארגון מבנית של הנורה הריח העיקרי מכרסמים. עצב סנסורי חוש הריח, תאים חושית העיקרי נמצא אפיתל ההרחה הראשי, לבטא את קולטן odorant אותו להתכנס על glomeruli באותו OB. Glomeruli חוש הריח, את עגולי neuropils (מעגלים מקווקווים), הממוקמים על פני השטח של OB. שים לב כי רשת כלי דם סמיך מאוד ומורכב נמצא ברמה גלומרולרי. קיצורים (למעלה / למטה): ONL: שכבת עצב ההרחה, GL: שכבת גלומרולרי, EPL: שכבה חיצונית plexiform; MCL:שכבת תאים צניפי; GCL: שכבת גרעין התא. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/3336/3336fig2.jpg" /> איור 2 ההחזרה אותות הקרינה ההקלטה in vivo. א רחב בתחום הדמיה אופטית ההתקנה. המוח של העכבר הרדים חשוף או אדום (IOS) או כחול (FAS) אור דרך טבעת או סיב טבעתי המצורפת העדשה אופטיקה או יציאת עלית תאורה של מיקרוסקופ. ריחות נטענים לתוך צלוחיות אטום odorized האוויר מועבר לאף חיה (אור ירוק: שסתום פתוח). ב הקלטת פרוטוקול ועיבוד נתונים. IOS ו FAS נרשמות סדרה של ניסויים בודדים (שנות ה -90 של משך הזמן). התרשים מראה את ציר הזמן של משפט אחד: הבסיס נע בין 5 ל 10s, גירוי בין 3 ל 10s, ולחזור בסיסית בין 70 ל 82s. עיבוד תמונה מחייב פיקסל אחר פיקסל חיסור של ערכים אינטנסיביות במהלך הבסיס לערכים בעוצמה בתקופות של גירוי (עבור FAS) or גירוי בתוספת לחזור בסיסית (עבור IOS). הפרש זה מחולק מכן על ידי ערכי הבסיס לקבל וריאציה% (ראה תמונות וכתוצאה מכך איור. 3). <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/3336/3336fig3.jpg" /> איור 3 ריח עורר מפות הפעילות OB באמצעות IOS ו FAS הדמיה. א vasculature של OB הגב דמיינו תחת אור ירוק. לפני הספירה. IOS הדמיה (משפט בודד לעומת שלושה ניסויים בממוצע בהתאמה) עבור המצגת 10s של hexanal 20%. חיצים לבנים מצביעים על אזורים כדורי עניין זה מופעל על ידי ריח. מפות אלו הושגו באמצעות הפעלת המסגרות בממוצע במהלך בשנייה הראשונה לאחר סיום גירוי ריח (לכל היותר% וריאציה ההחזרה ב -0.63% ו -0.52 ב &#39;). הערה אזורי השחור של ספיגת שם ההפעלה ריח התרחשה. תקליטור. FAS רכשה ברצף בעכבר זהה odorant זהה (משפט בודד לעומת שלושה ניסויים בממוצע בהתאמהly). מפות אלו הושגו באמצעות הפעלת המסגרות בממוצע במהלך בשנייה הראשונה לאחר תחילת גירוי ריח (מקסימום של 0.72% הקרינה וריאציה ב D ו 0.66% ב-E). שימו לב לבן של אזורי פליטת autofluorescence מסומנים על ידי חצים שחורים תואמים את אזורי שחור IOS. ההיבט מגורען לראות במפה FAS נובע 4 על ידי binning 4 נדרש לשיפור הרגישות. תמונות FAS לא תוקנו מ autofluorescence הלבנה. מידות בפועל של תמונות להיות: 0.7 רחב מ&quot;מ x 1.2 מ&quot;מ אורך.

<ol>
	<li>Grinvald, A., Lieke, E., Frostig, R. D., Gilbert, C. D., Wiesel, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+architecture+of+cortex+revealed+by+optical+imaging+of+intrinsic+signals.">Functional architecture of cortex revealed by optical imaging of intrinsic signals.</a> Nature. 324, 361-364 (1986).</li><li>Rubin, B. D., Katz, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+odorant+representations+in+the+mammalian+olfactory+bulb.">Optical imaging of odorant representations in the mammalian olfactory bulb.</a> Neuron. 23, 499-511 (1999).</li><li>Chance, B., Cohen, P., J&amp;246, b. s. i. s., &amp;amp, F., Schoener, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+oxidation-reduction+states+in+vivo.">Intracellular oxidation-reduction states in vivo.</a> Science. 137, 499-508 (1962).</li><li>Shibuki, K., Hishida, R., Murakami, H., Kudoh, M., Kawaguchi, T., Watanabe, M., Watanabe, S., Kouuchi, T., Tanaka, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+imaging+of+somatosensory+cortical+activity+in+the+rat+visualized+by+flavoprotein+autofluorescence.">Dynamic imaging of somatosensory cortical activity in the rat visualized by flavoprotein autofluorescence.</a> J. Physiol. 549 (Pt. 3, 919-9127 (2003).</li><li>Uchida, N., Takahashi, Y. K., Tanifuji, M., Mori, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor+maps+in+the+mammalian+olfactory+bulb:+domain+organization+and+odorant+structural+features.">Odor maps in the mammalian olfactory bulb: domain organization and odorant structural features.</a> Nat. Neurosci. 3, 1035-1043 (2000).</li><li>Gurden, H., Uchida, N., Mainen, Z. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory-evoked+intrinsic+optical+signals+in+the+olfactory+bulb+are+coupled+to+glutamate+release+and+uptake.">Sensory-evoked intrinsic optical signals in the olfactory bulb are coupled to glutamate release and uptake.</a> Neuron. 52, 335-345 (2006).</li><li>Soucy, E. R., Albeanu, D. F., Fantana, A. L., Murthy, V. N., Meister, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precision+and+diversity+in+an+odor+map+on+the+olfactory+bulb.">Precision and diversity in an odor map on the olfactory bulb.</a> Nat. Neurosci. 12, 210-220 (2009).</li><li>Frostig, R. D., Lieke, E. E., Ts'o, D. Y., Grinvald, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+functional+architecture+and+local+coupling+between+neuronal+activity+and+the+microcirculation+revealed+by+in+vivo+high-resolution+optical+imaging+of+intrinsic+signals.">Cortical functional architecture and local coupling between neuronal activity and the microcirculation revealed by in vivo high-resolution optical imaging of intrinsic signals.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87, 6082-6086 (1990).</li><li>Meister, M., Bonhoeffer, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuning+and+topography+in+an+odor+map+on+the+rat+olfactory+bulb.">Tuning and topography in an odor map on the rat olfactory bulb.</a> J. Neurosci. 21, 1351-1360 (2001).</li><li>Dunn, A. K., Devor, A., Bolay, H., Andermann, M. L., Moskowitz, M. A., Dale, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+imaging+of+total+cerebral+hemoglobin+concentration,+oxygenation,+and+blood+flow+during+functional+activation.">Simultaneous imaging of total cerebral hemoglobin concentration, oxygenation, and blood flow during functional activation.</a> Opt. Lett. 28, 28-30 (2003).</li><li>L'Heureux, B., Gurden, H., Pain, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autofluorescence+imaging+of+NADH+and+flavoproteins+in+the+rat+brain:+insights+from+Monte+Carlo+simulations.">Autofluorescence imaging of NADH and flavoproteins in the rat brain: insights from Monte Carlo simulations.</a> Optics. Express. 17, 9477-9490 (2009).</li><li>Renaud, R., Gurden, H., Chery, R., Bendhamane, M., Martin, C., Pain, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multispectral+imaging+of+the+olfactory+bulb+activation:+influence+of+realistic+differential+pathlength+correction+factors+on+the+derivation+of+oxygenation+and+total+hemoglobin+concentration+maps+(Proceedings+Paper).">Multispectral imaging of the olfactory bulb activation: influence of realistic differential pathlength correction factors on the derivation of oxygenation and total hemoglobin concentration maps (Proceedings Paper).</a> , (2011).</li></ol>

אין לנו שום דבר לגלות.

במאמר זה אנו מציגים IOS ו FAS שיטות הדמיה עבור vivo בהקלטות של ריח עורר פעילות OB העכבר. כדי להשיג מטרה זו פשוטה יחסית וזולה רחב בתחום ההתקנה הדמיה אופטית הכרחי. הרכישה של דימות נתונים דורש אימון כדי לבצע את הניתוחים בסדר להימנע מכל פגיעה הדורה או רקמת המוח. בפרט, דימום גדול יהיה לקלוט פוטונים הדמיה רשמה בסופו של דבר את הניסוי. אחד היתרונות של IOS ו FAS ההדמיה, כדי למנוע את הזריקה של קליעים נותבים ניאון, אשר עלול לגרום לרעילות הסלולר או תופעות לוואי בלתי רצויה. הן מאפשרות להתמודד עם בעיות על מפות הריח ובכך קידוד המרחבי של גירויים חושיים. בניגוד הדמיה 2-DeoxyGlucose, הם מספקים אפשרות ריחות תמונה מספר חיה אחת. עם זאת, מאז חדירת הפוטון מוגבל בתוך הרקמה, IOS ו FAS מוגבלים החלק הגבי של OBולא ניתן להקליט מאזורים הגחון. אות אנדוגני הדמיה אופטית מציעה רזולוציה מרחבית מצוינת בתחום ההדמיה vivo. שיפורים טכניים חישובים דאגה כמותית של מרכיבי הדם של החזר אותות 8,9, כמו גם הדינמיקה של חמצון הדם ונפח במהלך הפעלת חושי 10. הדמיה Multiwavelength גישות IOS הדמיה מפותחים כיום במעבדה שלנו באופן מלא לכמת ריכוז המוגלובין חמצון הכולל ב OB במהלך הפעלת החושים. אלה מדידות אופטיות ספקטרוסקופיות הוסיף FAS הדמיה ייתן את ההזדמנות כדי להשיב את היחסים פתורות בין הדינמיקה של כלי הדם ואת תאיים במהלך ההפעלה החושית 11,12.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם העוצר </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> Imalgene </td><td> Merial </td><td></td></tr><tr><td> Rompun </td><td> באייר </td><td></td></tr><tr><td> Agarose, סוג III-A </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A9793-50 </td></tr><tr><td> Hexanal 98% </td><td> אלדריץ&#39; </td><td> 115,606, 100 מ&quot;ל </td></tr></tbody></table>

imaging odor-evoked activities in the mouse olfactory bulb using optical reflectance and autofluorescence signals

במוח, גירויים חושיים מפעיל מופץ אוכלוסיות של נוירונים בין מודולים תפקודית אשר להשתתף קידוד של הגירוי. פונקציונלית טכניקות הדמיה אופטית הם יתרון לדמיין את הפעלת מודולים אלה בקורטקס הסנסורי עם רזולוציה מרחבית גבוהה. בהקשר זה, אותות אופטיים אנדוגני הנובעות המנגנונים המולקולריים הקשורים neuroenergetics הם מקורות חשובים של ניגוד להקליט מפות מרחבי של הגירוי החושי על פני שדות רחבים במוח מכרסמים. כאן, אנו מציגים שתי טכניקות על בסיס השינויים של תכונות אופטיות אנדוגני של רקמת המוח במהלך ההפעלה. ראשית אותות אופטי פנימי (IOS) המיוצרים על ידי שינוי מקומי החזר אור אדום עקב: (i) קליטה על ידי שינויים ברמת החמצן בדם ואת נפח הדם (ii) פיזור פוטון. השימוש in vivo IOS להקליט מפות המרחבית החל באמצע 1980 של עם observatiעל מפות אופטי חביות זיף בחולדה ואת העמודות התמצאות החתול הראייה בקליפת 1. IOS הדמיה של פני השטח של הנורה מכרסם העיקרי חוש הריח (OB) בתגובה odorants הודגם מאוחר יותר על ידי הקבוצה של לארי כץ 2. הגישה השנייה מתבססת על אותות flavoprotein autofluorescence (FAS) בשל שינויים במצב חמזור אלה ביניים מטבולי המיטוכונדריה. ליתר דיוק, טכניקה מבוססת על הקרינה הירוק בשל מצב מחומצן של flavoproteins כאשר הרקמה הוא נרגש עם אור כחול. למרות אותות כאלה היו כנראה בין מולקולות ניאון המתועד הראשון לחקר פעילות המוח על ידי מחקרים חלוץ הסיכויים בריטון ועמיתיו 3, זה לא היה עד לאחרונה כי הם שימשו במשך מיפוי של הפעלת המוח in vivo. FAS הדמיה יושמה הראשון בקליפת החושית במכרסמים בתגובה לגירוי hindpaw על ידי קבוצה של Katsuei Shibuki 4. מערכת ההרחה היא בעלת חשיבות מרכזית לקיומה של הרוב המכריע של המינים החיים משום שהיא מאפשרת איתור זיהוי יעיל של חומרים כימיים בסביבה (מזון טורפים). OB הוא ממסר הראשון של עיבוד מידע ההרחה במוח. הוא מקבל תחזיות מביא מן הנוירונים חושי הריח העיקרי לזהות מולקולות odorant נדיפים. כל נוירון חושי מבטא רק סוג אחד של קולטן odorant ונוירונים נושאת את אותו סוג של קולטן לשלוח תהליכים העצב שלהם מוגדרים היטב microregions אותו ~ 100μm 3 היוו של neuropil דיסקרטית, glomerulus חוש הריח (איור 1). בעשור האחרון, IOS הדמיה טיפחה את החיפושים התפקודי של OB 5, 6, 7, אשר הפך לאחד המבנים חושית למד ביותר. מיפוי של פעילות OB עם FAS הדמיה לא שבוצעה עד כה. הנה, Wדואר להראות צעדים רצופים של פרוטוקול יעיל עבור IOS ו FAS הדמיה למפות ריח עורר פעילות OB העכבר.

Watch this Scientific Journal Video about Imaging Odor-Evoked Activities in the Mouse Olfactory Bulb using Optical Reflectance and Autofluorescence Signals at JoVE.com

Imaging Odor-Evoked Activities in the Mouse Olfactory Bulb using Optical Reflectance and Autofluorescence Signals

מאמר זה מציג את הפרוטוקולים של אותות אופטיים flavoproteins מהותי autofluorescence הדמיה אותות ריח עורר פעילויות המפה על פני השטח של הנורה חוש הריח אצל עכברים.

פעילויות הדמיה ריח ועוררה הנורה חוש הריח באמצעות עכבר אופטי החזר אותות autofluorescence

In the brain, sensory stimulation activates distributed populations of neurons among functional modules which participate to the coding of the stimulus. ...

imaging-odor-evoked-activities-mouse-olfactory-bulb-using-optical

Google

Research

JoVE Journal

Neuroscience

15.9K Views.  UMR8165 Université Paris Sud 11, Paris Diderot 7 – CNRS. מאמר זה מציג את הפרוטוקולים של אותות אופטיים flavoproteins מהותי autofluorescence הדמיה אותות ריח עורר פעילויות המפה על פני השטח של הנורה חוש הריח אצל עכברים.

Video: Imaging Odor-Evoked Activities in the Mouse Olfactory Bulb using Optical Reflectance and Autofluorescence Signals

Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording

Animals depend on olfaction for many critical behaviors, such as finding food sources, avoiding predators, and identifying conspecifics for mating and other social interactions. The electroolfactogram (EOG) recording is an informative, easy to conduct, and reliable method to assay olfactory function at the level of the olfactory epithelium. Since the 1956 description of the EOG by Ottoson in frogs1, the EOG recording has been applied in many vertebrates including salamanders, rabbits, rats, mice, and humans (reviewed by Scott and Scott-Johnson, 2002, ref. 2). The recent advances in genetic modification in mice have rekindled interest in recording the EOG for physiological characterization of olfactory function in knock-out and knock-in mice. EOG recordings have been successfully applied to demonstrate the central role of olfactory signal transduction components3-8, and more recently to characterize the contribution of certain regulatory mechanisms to OSN responses9-12.
Odorant detection occurs at the surface of the olfactory epithelium on the cilia of OSNs, where a signal transduction cascade leads to opening of ion channels, generating a current that flows into the cilia and depolarizes the membrane13. The EOG is the negative potential recorded extracellularly at the surface of the olfactory epithelium upon odorant stimulation, resulting from a summation of the potential changes caused by individual responsive OSNs in the recording field2. Comparison of the amplitude and kinetics of the EOG thus provide valuable information about how genetic modification and other experimental manipulations influence the molecular signaling underlying the OSN response to odor. 
Here we describe an air-phase EOG recording on a preparation of mouse olfactory turbinates. Briefly, after sacrificing the mouse, the olfactory turbinates are exposed by bisecting the head along the midline and removing the septum. The turbinate preparation is then placed in the recording setup, and a recording electrode is placed at the surface of the olfactory epithelium on one of the medial turbinates. A reference electrode is electrically connected to the tissue through a buffer solution. A continuous stream of humidified air is blown over the surface of the epithelium to keep it moist. The vapor of odorant solutions is puffed into the stream of humidified air to stimulate the epithelium. Responses are recorded and digitized for further analysis.

The electroolfactogram (EOG) recording is an informative, easy-to-conduct, and reliable way of assessing olfactory function at the level of the olfactory epithelium. This protocol describes a recording setup, mouse tissue preparation, data collection, and basic data analysis.

ניתוח התגובות של נוירונים עכבר חוש הריח חושי באמצעות הקלטה אוויר שלב Electroolfactogram

Animals depend on olfaction for many critical behaviors, such as finding food sources, avoiding predators, and identifying conspecifics for mating and ...

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and evaluating mouse models of human disease. MRI is an excellent modality for investigating genetically altered animals. It is capable of whole brain coverage, can be used in vivo, and provides multiple contrast mechanisms for investigating different aspects of neuranatomy and physiology. The advent of high-field scanners along with the ability to scan multiple mice simultaneously allows for rapid phenotyping of novel mutations.
Effective mouse MRI studies require attention to many aspects of experiment design. In this article, we will describe general methods to acquire quality images for mouse phenotyping using a system that images mice concurrently in shielded transmit/receive radio frequency (RF) coils in a common magnet (Bock et al., 2003). We focus particularly on anatomical phenotyping, an important and accessible application that has shown a high potential for impact in many mouse models at our imaging centre. Before we can provide the detailed steps to acquire such images, there are important practical considerations for both in vivo brain imaging (Dazai et al., 2004) and ex vivo brain imaging (Spring et al., 2007) that should be noted. These are discussed below.

Magnetic resonance imaging (MRI) has become an increasingly popular tool for examining the phenotype of genetically altered mice. This article illustrates the methods necessary to achieve high-throughput phenotyping of genetically altered mice using multiple-mouse MRI.

מרובה עכבר Neuroanatomical תהודה מגנטית

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

In vivo electroporation is a powerful method for delivering DNA expression plasmids, RNAi reagents, and morpholino anti-sense oligonucleotides to specific regions of developing embryos, including those of C. elegans, chick, Xenopus, zebrafish, and mouse 1. In zebrafish, in vivo electroporation has been shown to have excellent spatial and temporal resolution for the delivery of these reagents 2-7. The temporal resolution of this method is important because it allows for incorporation of these reagents at specific stages in development. Furthermore, because expression from electroporated vectors occurs within 6 hours 7, this method is more timely than transgenic approaches. While the spatial resolution can be extremely precise when targeting a single cell 2, 6, it is often preferable to incorporate reagents into a specific cell population within a tissue or structure. When targeting multiple cells, in vivo electroporation is efficient for delivery to a specific region of the embryo; however, particularly within the developing nervous system, it is difficult to target specific cell types solely through spatially discrete electroporation. Alternatively, enhancer trap transgenic lines offer excellent cell type-specific expression of transgenes 8. Here we describe an approach that combines transgenic Gal4-based enhancer trap lines 8 with spatially discrete in vivo electroporation 7, 9 to specifically target developing neurons of the zebrafish olfactory bulb. The Et(zic4:Gal4TA4,UAS:mCherry)hzm5 (formerly GA80_9) enhancer trap line previously described 8, displays targeted transgenic expression of mCherry mediated by a zebrafish optimized Gal4 (KalTA4) transcriptional activator in multiple regions of the developing brain including hindbrain, cerebellum, forebrain, and the olfactory bulb. To target GFP expression specifically to the olfactory bulb, a plasmid with the coding sequence of GFP under control of multiple Gal4 binding sites (UAS) was electroporated into the anterior end of the forebrain at 24-28 hours post-fertilization (hpf). Although this method incorporates plasmid DNA into multiple regions of the forebrain, GFP expression is only induced in cells transgenically expressing the KalTA4 transcription factor. Thus, by using the GA080_9 transgenic line, this approach led to GFP expression exclusively in the developing olfactory bulb. GFP expressing cells targeted through this approach showed typical axonal projections, as previously described for mitral cells of the olfactory bulb 10. This method could also be used for targeted delivery of other reagents including short-hairpin RNA interference expression plasmids, which would provide a method for spatially and temporally discrete loss-of-function analysis.

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

The temporal and spatial resolution of genetic manipulations determines the spectrum of biological phenomena that they can perturb. Here we use temporally and spatially discrete in vivo electroporation, combined with transgenic lines of zebrafish, to induce expression of a GFP transgene specifically in neurons of the developing olfactory bulb.

מיקוד Bulb נוירונים חוש הריח שימוש משולב In vivo Electroporation ו Gal4 מבוסס Enhancer מלכודת קווי דג הזברה

In vivo electroporation is a powerful method for delivering DNA expression plasmids, RNAi reagents, and morpholino anti-sense oligonucleotides to specific ...

Calcium Imaging of Odor-evoked Responses in the Drosophila Antennal Lobe

The antennal lobe is the primary olfactory center in the insect brain and represents the anatomical and functional equivalent of the vertebrate olfactory bulb1-5. Olfactory information in the external world is transmitted to the antennal lobe by olfactory sensory neurons (OSNs), which segregate to distinct regions of neuropil called glomeruli according to the specific olfactory receptor they express. Here, OSN axons synapse with both local interneurons (LNs), whose processes can innervate many different glomeruli, and projection neurons (PNs), which convey olfactory information to higher olfactory brain regions.
Optical imaging of the activity of OSNs, LNs and PNs in the antennal lobe - traditionally using synthetic calcium indicators (e.g. calcium green, FURA-2) or voltage-sensitive dyes (e.g. RH414) - has long been an important technique to understand how olfactory stimuli are represented as spatial and temporal patterns of glomerular activity in many species of insects6-10. Development of genetically-encoded neural activity reporters, such as the fluorescent calcium indicators G-CaMP11,12 and Cameleon13, the bioluminescent calcium indicator GFP-aequorin14,15, or a reporter of synaptic transmission, synapto-pHluorin16 has made the olfactory system of the fruitfly, Drosophila melanogaster, particularly accessible to neurophysiological imaging, complementing its comprehensively-described molecular, electrophysiological and neuroanatomical properties2,4,17. These reporters can be selectively expressed via binary transcriptional control systems (e.g. GAL4/UAS18, LexA/LexAop19,20, Q system21) in defined populations of neurons within the olfactory circuitry to dissect with high spatial and temporal resolution how odor-evoked neural activity is represented, modulated and transformed22-24.
Here we describe the preparation and analysis methods to measure odor-evoked responses in the Drosophila antennal lobe using G-CaMP25-27. The animal preparation is minimally invasive and can be adapted to imaging using wide-field fluorescence, confocal and two-photon microscopes.

Calcium Imaging of Odor-evoked Responses in the Drosophila Antennal Lobe

We describe an established technique to measure and analyze odor-evoked calcium responses in the antennal lobe of living Drosophila melanogaster.

סידן הדמיה של ריח עוררו התגובות תסיסנית מחושים האונה

The antennal lobe is the primary olfactory center in the insect brain and represents the anatomical and functional equivalent of the vertebrate olfactory ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first neural circuit in the AOS pathway, called the accessory olfactory bulb (AOB), plays an important role in establishing sex-typical behaviors such as territorial aggression and mating. This small (&#60;1 mm3) circuit possesses the capacity to distinguish unique behavioral states, such as sex, strain, and stress from chemosensory cues in the secretions and excretions of conspecifics. While the compact organization of this system presents unique opportunities for recording from large portions of the circuit simultaneously, investigation of sensory processing in the AOB remains challenging, largely due to its experimentally disadvantageous location in the brain. Here, we demonstrate a multi-stage dissection that removes the intact AOB inside a single hemisphere of the anterior mouse skull, leaving connections to both the peripheral vomeronasal sensory neurons (VSNs) and local neuronal circuitry intact. The procedure exposes the AOB surface to direct visual inspection, facilitating electrophysiological and optical recordings from AOB circuit elements in the absence of anesthetics. Upon inserting a thin cannula into the vomeronasal organ (VNO), which houses the VSNs, one can directly expose the periphery to social odors and pheromones while recording downstream activity in the AOB. This procedure enables controlled inquiries into AOS information processing, which can shed light on mechanisms linking pheromone exposure to changes in behavior.

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

The mouse accessory olfactory bulb (AOB) has been difficult to study in the context of sensory coding. Here, we demonstrate a dissection that produces an ex vivo preparation in which AOB neurons remain functionally connected to their peripheral inputs, facilitating research into information processing of mouse pheromones and kairomones.

Ex Vivo הכנות של הנורה Vomeronasal האיברים ואבזר חוש הריח הפגועה

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

The olfactory system, specialized in the detection, integration and processing of chemical molecules is likely the most thoroughly studied sensory system. However, there is piling evidence that olfaction is not solely limited to chemical sensitivity, but also includes temperature sensitivity. Premetamorphic Xenopus laevis are translucent animals, with protruding nasal cavities deprived of the cribriform plate separating the nose and the olfactory bulb. These characteristics make them well suited for studying olfaction, and particularly thermosensitivity. The present article describes the complete procedure for measuring temperature responses in the olfactory bulb of X. laevis larvae. Firstly, the electroporation of olfactory receptor neurons (ORNs) is performed with spectrally distinct dyes loaded into the nasal cavities in order to stain their axon terminals in the bulbar neuropil. The differential staining between left and right receptor neurons serves to identify the &#947;-glomerulus as the only structure innervated by contralateral presynaptic afferents. Secondly, the electroporation is combined with focal bolus loading in the olfactory bulb in order to stain mitral cells and their dendrites. The 3D brain volume is then scanned under line-illumination microscopy for the acquisition of fast calcium imaging data while small temperature drops are induced at the olfactory epithelium. Lastly, the post-acquisition analysis allows the morphological reconstruction of the thermosensitive network comprising the &#947;-glomerulus and its innervating mitral cells, based on specific temperature-induced Ca2+ traces. Using chemical odorants as stimuli in addition to temperature jumps enables the comparison between thermosensitive and chemosensitive networks in the olfactory bulb.

Recording Temperature-induced Neuronal Activity through Monitoring Calcium Changes in the Olfactory Bulb of Xenopus laevis

Here we describe a protocol for measuring and analyzing temperature responses in the olfactory bulb of Xenopus laevis. Olfactory receptor neurons and mitral cells are differentially stained, after which calcium changes are recorded, reflecting a sensitivity of some neural networks in the bulb to temperature drops induced at the nose.

הקלטת פעילות עצבית הנגרמת טמפרטורה באמצעות ניטור שינויי סידן נורה חוש הריח של<em&gt; Laevis Xenopus</em

The olfactory system, specialized in the detection, integration and processing of chemical molecules is likely the most thoroughly studied sensory system. ...

Simultaneous Evaluation of Cerebral Hemodynamics and Light Scattering Properties of the In Vivo Rat Brain Using Multispectral Diffuse Reflectance Imaging

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional multispectral diffuse reflectance imaging system. This system is constructed from a broadband white light source, a motorized filter wheel with a set of narrowband interference filters, a light guide, a collecting lens, a video zoom lens, and a monochromatic charged-coupled device (CCD) camera. An ellipsoidal cranial window is made in the skull bone of a rat under isoflurane anesthesia to capture in vivo multispectral diffuse reflectance images of the cortical surface. Regulation of the fraction of inspired oxygen using a gas mixture device enables the induction of different respiratory states such as normoxia, hyperoxia, and anoxia. A Monte Carlo simulation-based multiple regression analysis for the measured multispectral diffuse reflectance images at nine wavelengths (500, 520, 540, 560, 570, 580, 600, 730, and 760 nm) is then performed to visualize the two-dimensional maps of hemodynamics and the light scattering properties of the in vivo rat brain.

Simultaneous Evaluation of Cerebral Hemodynamics and Light Scattering Properties of the In Vivo Rat Brain Using Multispectral Diffuse Reflectance Imaging

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional multispectral diffuse reflectance imaging system.

הערכה סימולטנית של המודינמיקה מוחית ופיזור תכונות אור של<em&gt; In vivo</em&gt; מוח עכברוש באמצעות הדמית החזרה המפוזרת Multispectral

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional ...

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

Structural changes in the retina are common manifestations of ophthalmic diseases. Optical coherence tomography (OCT) enables their identification in vivo&#8212;rapidly, repetitively, and at a high resolution. This protocol describes OCT imaging in the mouse retina as a powerful tool to study optic neuropathies (OPN). The OCT system is an interferometry-based, non-invasive alternative to common post mortem histological assays. It provides a fast and accurate assessment of retinal thickness, allowing the possibility to track changes, such as retinal thinning or thickening. We present the imaging process and analysis with the example of the Opa1delTTAG mouse line. Three types of scans are proposed, with two quantification methods: standard and homemade calipers. The latter is best for use on the peripapillary retina during radial scans; being more precise, is preferable for analyzing thinner structures. All approaches described here are designed for retinal ganglion cells (RGC) but are easily adaptable to other cell populations. In conclusion, OCT is efficient in mouse model phenotyping and has the potential to be used for the reliable evaluation of therapeutic interventions.

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

This manuscript describes a protocol for the in vivo imaging of the mouse retina with high-resolution spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT). It focuses on retinal ganglion cells (RGC) in the peripapillary region, with several scanning and quantifying approaches described.

טומוגרפיה אופטית קוהרנטית: הדמיה העכבר גנגליון תאים In Vivo

Structural changes in the retina are common manifestations of ophthalmic diseases. Optical coherence tomography (OCT) enables their identification in ...

Quadruple Immunostaining of the Olfactory Bulb for Visualization of Olfactory Sensory Axon Molecular Identity Codes

The mouse olfactory system is often used to study mechanisms of neural circuit formation&#12288;because of its simple anatomical structure. An Olfactory Sensory Neuron (OSN) is a bipolar cell with a single dendrite and a single unbranched axon. An OSN expresses only one Olfactory Receptor (OR) gene, OSNs expressing a given type of OR converge their axons to a few sets of invariant glomeruli in the Olfactory Bulb (OB). A remarkable feature of OSN projection is that the expressed ORs play instructive roles in axonal projection. ORs regulate the expression of multiple axon-sorting molecules and generate the combinatorial molecular code of axon-sorting molecules at the OSN axon termini. Thus, to understand the molecular mechanisms of OR-specific axon guidance mechanisms, it is vital to characterize their expression profiles at the OSN axon termini within the same glomerulus. The aim of this article was to introduce methods for collecting as many glomeruli as possible on a single OB section and for performing immunostaining using multiple antibodies. This would allow the comparison and analysis of the expression patterns of axon-sorting molecules without staining variation between OB sections.

Olfactory sensory neurons express a wide variety of axon-sorting molecules to establish proper neural circuitry. This protocol describes an immunohistochemical staining method to visualize combinatorial expressions of axon-sorting molecules at the axon termini of olfactory sensory neurons.

Quadunple Immunostaining של הנורה חוש הריח עבור ויזואליזציה של חוש הריח חושפת אקסון מולקולרית קודי זהות

The mouse olfactory system is often used to study mechanisms of neural circuit formation&#12288;because of its simple anatomical structure. An Olfactory ...

Stereological Estimation of Dopaminergic Neuron Number in the Mouse Substantia Nigra Using the Optical Fractionator and Standard Microscopy Equipment

In pre-clinical Parkinson&#39;s disease research, analysis of the nigrostriatal tract, including quantification of dopaminergic neuron loss within the substantia nigra, is essential. To estimate the total dopaminergic neuron number, unbiased stereology using the optical fractionator method is currently considered the gold standard. Because the theory behind the optical fractionator method is complex and because stereology is difficult to achieve without specialized equipment, several commercially available complete stereology systems that include the necessary software do exist, purely for cell counting reasons. Since purchasing a specialized stereology setup is not always feasible, for many reasons, this report describes a method for the stereological estimation of dopaminergic neuronal cell counts using standard microscopy equipment, including a light microscope, a motorized object table (x, y, z plane) with imaging software, and a computer for analysis. A step-by-step explanation is given on how to perform stereological quantification using the optical fractionator method, and pre-programmed files for the calculation of estimated cell counts are provided. To assess the accuracy of this method, a comparison to data obtained from a commercially available stereology apparatus was performed. Comparable cell numbers were found using this protocol and the stereology device, thus demonstrating the precision of this protocol for unbiased stereology.

This work presents a step-by-step protocol for the unbiased stereological estimation of dopaminergic neuronal cell numbers in the mouse substantia nigra using standard microscopy equipment (i.e., a light microscope, a motorized object table (x, y, z plane), and public domain software for digital image analysis.

הערכה stereological של דופאמין נוירון במספר העכבר הסובסטנציה ניגרה באמצעות מיקרוסקופ רגיל ציוד אופטי Fractionator

In pre-clinical Parkinson&#39;s disease research, analysis of the nigrostriatal tract, including quantification of dopaminergic neuron loss within the ...