עבודה זו נתמכה על ידי קרולינסקה KID-מימון הרשות, השבדית להגנה מפני קרינה, קרולינסקה עין קרן מחקר, אקדח och רטיל Stohnes Stiftelse, סנט אריק עין חולי קרן המחקר, Ögonfonden, Konung גוסטב החמישי: של och Drottning Viktorias Frimurarstiftelse.

1. חשיפה לקרינת אולטרה סגולה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 15 דקות לפני החשיפה, להרדים חולדת נקבת ספראג-Dawley בתערובת של 90 מ&quot;ג / קילו Ketalar (קטמין) ומ&quot;ג / הק&quot;ג Rompun 10 (xylazine) על ידי הזרקת intraperitoneal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את החיה בעוצרת חולדה ולהדק את החגורות עד קיבוע של העכברוש מבלי לגרום לסחוט גזע 13. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להנחיל Mydriacyl (tropicamide), 10 מ&quot;ג / מ&quot;ל, בשתי עיניה של חיה כדי לגרום mydriasis. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את החיה, כך שעין אחת ממוקמת על קורה צר של UVR ב 300 ננומטר 14 עם רוחב 10 ננומטר בחצים המרביים ולגונן על העין הנגדית בסרטים שחורים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את החולדה באופן חד צדדי לסף תת מינון 1 kJ / מ 2 UVR-B ב 300 ננומטר ל15 15 דקות. </li></ol> 2. בתור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הפסקת חשיפת הודעה שנקבעה מראש (1, 5, 24 ו 120 שעות), להקריב את העכברוש הזקן של שישה שבועות (משקל &lt;200 ג&#39;) על ידי carboחנק n דו ופריקה של חוליות הצוואר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עיני Enucleate. לאחר מכן, הכניס את קרנית העין למטה, בצד אחורי למעלה. ואז, אגרוף חור מינימאלי על ידי יישום צינורית מד 27 ולדחוף את נקודת השקה אחת ללובן העין כדי למנוע ניזק לעדשה שהיא מאוד קרוב ללובן העין. לאחר מכן, השתמש במספרי ניתוחים לרפואת עיניים לחתוך circumferentially ממש מאחורי גובל עד החלק האחורי של לובן העין יכול להיות המריא. לאחר מכן, הרם את העדשה עם מלקחיים מעוקלים בוטים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר שאריות של גוף ריסי מקו משווית העדשה תחת מיקרוסקופ, שמירה על העדשה בתמיסת מלח מאוזנת לא יותר מדקות 5-10. </li></ol> 3. כמותית RT-PCR <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח עדשות בתערובת של חיץ 350 μl RA1 תמוגה (NucleoSpin רנ&quot;א השני סך רנ&quot;א בידוד ערכה) וβ-mercaptoethanol μl 3.5 בצינור 2 מ&quot;ל אפנדורף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור את העדשה בתמהיל זה במהלך 30 דקות בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הומוגני העדשה עםמחט עד גרעין קשה בלבד של העדשה לא מהעדשה (קורטקס והקפסולה של העדשה lysed במאגר תמוגה). הסר את הגרעין מהתערובת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות חנות באופן מיידי ב -70 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפשר את הדגימות ובצעו את הפרוטוקול &quot;טיהור סה&quot;כ RNA מן התאים ורקמות בתרבית&quot; (NucleoSpin רנ&quot;א השני סך רנ&quot;א בידוד ערכה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות RNA חנות ב -70 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לוודא הסרה מספקת של דנ&quot;א מכל מדגם, לרוץ PCR בתנאים הבאים (שלב 1: 95 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות; שלב 2 במשך 40 מחזורים: 95 מעלות צלזיוס למשך 20 שניות, 55 מעלות צלזיוס למשך 20 שניות, 72 ° צלזיוס במשך 20 שניות; שלב 3: 72 מעלות צלזיוס במשך 7 דקות) עם פריימרים ספציפיים DNA p53, קדימה 5&#39;-ACCCTCTGACCTTTTTCCCA-3 &#39;ו5&#39;-TGCTGGGATCTTAGGCACTC-3 הפוכים &quot;וDNA פולימראז תקי (dNTPack), בהתאם לייצור פרוטוקול. מוצר ה-PCR הצפוי הוא 243 זוגות בסיסים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל 1.5% ג&#39;ל אלקטרופורזה agarose לזהות מוצר ספציפי PCR DNA של 243 זוגות בסיסים. כדי להכין1.5% agarose ג&#39;ל בTBE חיץ לקחת 3.75 גרם של agarose ולפתור אותה ב250 מ&quot;ל של חיץ TBE. הוסף ethidium ברומיד (0.5 מ&quot;ג / מ&quot;ל) 500 μl ב500 מ&quot;ל של 1.5% פתרון ג&#39;ל agarose. מחמם את התערובת במיקרוגל ומערבב אוון לפתור agarose. </li></ol> אף אחת מהדגימות יש לחשוף את כל מוצרי ה-PCR DNA ספציפיים על 1.5% ג&#39;ל אלקטרופורזה agarose. <ol start="9" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את הריכוז של דגימות RNA (μl 1) והיחס של ספיגת מדגם ב 260 ננומטר (RNA) ו 280 ננומטר (חלבון) בספקטרופוטומטר NanoDrop ND-1000. אם היחס רנ&quot;א לחלבון של ספיגת מדגם RNA הוא 2.0 או יותר ואז מדגם RNA הוא טהור. אם היחס של ספיגת מדגם RNA הוא נמוך יותר מאשר 2.0, לעשות שוב RNA צעד טיהור 3.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח נפח של מדגם RNA מקביל למיקרוגרם 1 ולסנתז cDNA בעקבות ערכת פרוטוקול 1 st סטרנד cDNA הסינתזה (ערכת 1 st סטרנד cDNA סינתזה לRT-PCR). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחסן דגימות cDNA ב -20 ° C(לתקופה של 1 שנה ויותר, בחנות ב -70 ° C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל PCR כמותית בזמן אמת במערכת iCycler MyiQ יחידה צבע בזמן אמת PCR לזיהוי. עומס triplicates על צלחת 96 היטב עם מדגם 1 μl cDNA, TaqMan ביטוי גני מאסטר מיקס, Assay ביטוי גני TaqMan ל3 caspase, על פי הוראות לייצור. עומס triplicates על צלחת 96 היטב אחרת עם מדגם 1 μl cDNA, TaqMan ביטוי גני מאסטר מיקס, Assay ביטוי גני TaqMan ל18s, על פי הוראות לייצור (פרוטוקול Assay ביטוי גני TaqMan). לדלל בסדרת שבריר של cDNA משלוש עדשות שאינן חשופות נבחרו באקראי. הפעל דילולים סידוריים יחד עם cDNA מדגימות בצלחת 96 היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בשיטת עקומת הסטנדרט לכימות של התוצאות. מספר המחזורים בפלואורסצנטי הסף משמש כמדידה בתוכנת MyiQ. עקומת סטנדרט מבטא מספר המחזורים בסף כפונקציה של ריכוז יחסי של כיל היא established לדילולים הסידוריים בכל צלחת. cDNA משלוש דגימות עדשה טופלו אינן שמש לכיול. מתייחס למספר הסף של מחזורים לכל דגימה לעקומה הסטנדרטית כדי להשיג את הריכוז היחסי של מדגם cDNA נמדד. לבסוף, לקבל את רמת ביטוי של גני המטרה בהבאת הריכוז היחסי של יעד cDNA ל18s הבקרה הפנימי cDNA. </li></ol> 4. Immunohistochemical המכתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבעון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את העין ב PBS (Buffered Saline פוספט; pH 7.4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים עין בצינור מלא paraformaldehyde 4% (PFA) בקור קרח במשך 20 דקות. הכן 4% PFA היום קודם לכן. חנות ב 4 מעלות צלזיוס עד לשימוש. PFA הוא טרי במשך כשבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר PFA עם micropipette. לאחר מכן, לשטוף עם הקרח הקר PBS במשך 20 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים עין ב30% סוכרוז ב4 ° C במשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים עין בכוס מלאה בטמפרטורה אופטימלית חיתוך (אוקטובר)-בינונית (רקמות-Tek). שים עין בעמדה מתאימה לחתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקפא באוקטובר בינוני על קרח יבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות ב -70 ° C עד שימוש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קטגוריות קיימות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את עין cryo-החתך במטוס מתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אותו שלושה סעיפים 5 אמצע sagittal עבים מיקרומטר מחלק מרכזי של כל עדשה. השלך לפחות 6 חלקים בין חלקים רציפים, כדי למנוע הכתמה אותו הגרעינים בסעיפים שונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שסעיף נחתך, מניחים בעדינות שקופיות על גבי זה. הסעיף צריך אז לתקוע לשקופית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאר את השקופיות לייבוש באוויר לפני השימוש. שקופיות ניתן לאחסן ב -20 ° C עד הצורך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלואורסצנטי אימונוהיסטוכימיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו דגימות להשיג טמפרטורת חדר (5-10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צייר קצוות סביב דגימות עם PAP-עט (Invitrogen). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו הגבול יבש לזמן (10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תייג את שקופיות מיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Rehydrate ב1 × PBS במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Permeabilize בפתרון בלוק סטנדרטי למשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף נוגדן ראשוני (הארנב caspase-3 polyclonal, בקע נוגדן Asp175 9661; טכנולוגית איתות תא, Inc) דילול 1:3,000 בפתרון בלוק סטנדרטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות בתא humidified ב4 ° C במשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף ב PBS על ידי pipetting (3 × 5 דקות) או על ידי טבילה באמבטיה גדולה (&gt; 15 דקות, 1-2 שינויים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף נוגדן שניוני (נוגדן אנטי משני ארנב עם ספקטרום ספציפי קליטה / פליטה) דילול 1:300 בפתרון הבלוק הסטנדרטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף ב PBS על ידי pipetting (3 × 5 דקות) או על ידי טבילה באמבטיה גדולה (&gt; 15 דקות, 1-2 שינויים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את משטח פאפ-עט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן בתא humidified בטמפרטורת חדר למשך 3 שעות. הימנע מחשיפה לאור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף טיפת Vectashield ולמקם את תלוש כיסוי בשקופית. הימנע עושה בועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו Vectashield להקשיח (~ 20 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור לי קטעיםn החושך עד ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל סעיפי הבקרה מעובדים בהעדר הנוגדן ראשוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חפש את התוצאות בתוך כמה שעות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת גרעיני תאי אפיתל &#39;מקידה גרעינית צד אחד לקשת גרעינית הצד השנייה של כל עדשה. להחיל את המסנן הכחול הסטנדרטי כדי לראות את כל גרעיני עדשת אפיתל בכחול ומסנן סטנדרטי שמתאים לפליטה של ​​הנוגדן המשני כדי לראות גרעינים החיוביים caspase-3 בירוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את המספר של כל גרעיני אפיתל העדשה ומספר הגרעינים חיוביים. ספירת התאים שלוש פעמים לכל מקטע. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Brian, G., Taylor, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cataract+blindness:+challenge+for+the+21+st+century.">Cataract blindness: challenge for the 21 st century.</a> Bulletin of the World Health Organization. 79, 249-256 (2001).</li><li>Jose, J. G., Pitts, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wavelength+dependency+of+cataracts+in+albino+mice+following+chronic+exposure.">Wavelength dependency of cataracts in albino mice following chronic exposure.</a> Experimental Eye Research. 41, 545-563 (1985).</li><li>S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+cataract+in+the+rat+after+exposure+to+radiation+in+the+300+nm+wavelength+region.+A+study+of+the+macro-,+micro-+and+ultrastructure.">Acute cataract in the rat after exposure to radiation in the 300 nm wavelength region. A study of the macro-, micro- and ultrastructure.</a> Acta Ophthalmol. (Copenh). 66, 141-152 (1988).</li><li>Meyer, L., Dong, X., Wegener, A., S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose+dependent+cataractogenesis+and+Maximum+Tolerable+Dose+(MTD+2.3:16)+for+UVR+-+B+induced+cataract+in+C57BL/6J+mice.">Dose dependent cataractogenesis and Maximum Tolerable Dose (MTD 2.3:16) for UVR - B induced cataract in C57BL/6J mice.</a> Experimental Eye Research. 86, 282-289 (2008).</li><li>McCarty, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+lifetime+ocular+exposure+to+UV-B:+the+Melbourne+visual+impairment+project.">Assessment of lifetime ocular exposure to UV-B: the Melbourne visual impairment project.</a> Developments in Ophthalmology. 27, 9-13 (1997).</li><li>Sasaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+cortical+cataract+in+subjects+of+diverse+races+and+latitude.">Localization of cortical cataract in subjects of diverse races and latitude.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 4210-4214 (2003).</li><li>S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+cataract+induced+by+ultraviolet+radiation.">Experimental cataract induced by ultraviolet radiation.</a> Acta Ophthalmol. (Copenh. 68, 1-77 (1990).</li><li>Galichanin, K., L&#246;fgren, S., Bergmanson, J., S&#246;derberg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+damage+in+the+lens+after+in+vivo+close+to+threshold+exposure+to+UV-B+radiation:+cytomorphological+study+of+apoptosis.">Evolution of damage in the lens after in vivo close to threshold exposure to UV-B radiation: cytomorphological study of apoptosis.</a> Exp. Eye Res. 91, 369-377 (2010).</li><li>McCarty, C. A., Taylor, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+epidemiologic+evidence+linking+ultraviolet+radiation+and+cataracts.">A review of the epidemiologic evidence linking ultraviolet radiation and cataracts.</a> Dev. Ophthalmol. 35, 21-31 (2002).</li><li>Li, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lens+epithelial+cell+apoptosis+appears+to+be+a+common+cellular+basis+for+non-congenital+cataract+development+in+humans+and+animals.">Lens epithelial cell apoptosis appears to be a common cellular basis for non-congenital cataract development in humans and animals.</a> Journal of Cell Biology. 130, 169-181 (1995).</li><li>Michael, R., Vrensen, G., van Marle, J., Gan, L., S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+in+the+rat+lens+after+in+vivo+threshold+dose+ultraviolet+irradiation.">Apoptosis in the rat lens after in vivo threshold dose ultraviolet irradiation.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 13, 2681-2687 (1998).</li><li>Ayala, M. N., Strid, H., Jacobsson, U., S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53+Expression+and+Apoptosis+In+The+Lens+After+Ultraviolet+Radiation+Exposure.">p53 Expression and Apoptosis In The Lens After Ultraviolet Radiation Exposure.</a> Investigative ophthalmology of visual science. 48, 4187-4191 (2007).</li><li>Galichanin, K., Wang, J., Lofgren, S., Soderberg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+universal+rat+restrainer+for+ophthalmic+research.">A new universal rat restrainer for ophthalmic research.</a> Acta Ophthalmol. 89 (1), (2011).</li><li>Ayala, M. N., Michael, R., S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+cataract+after+repeated+exposure+to+ultraviolet+radiation.">In vivo cataract after repeated exposure to ultraviolet radiation.</a> Experimental Eye Research. 70, 451-456 (2000).</li><li>S&#246;derberg, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+of+ultraviolet+radiation+exposure+to+the+lens+expressed+by+maximum+tolerable+dose+(MTD).">Toxicity of ultraviolet radiation exposure to the lens expressed by maximum tolerable dose (MTD).</a> Developments in Ophthalmology. 35, 70-75 (2002).</li><li>Michael, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+repair+of+cataract+induced+by+ultraviolet+radiation.">Development and repair of cataract induced by ultraviolet radiation.</a> Ophthalmic Research. 32, 1-45 (2000).</li><li>L&#246;fgren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cataract from ultraviolet radiation. , (2001).</li><li>Ayala, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Influence of exposure patterns and oxidation in UVR induced Cataract. , (2005).</li><li>Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Safety limit estimation for cataract induced by ultraviolet radiation. , (2005).</li><li>L&#246;fgren, S., Michael, R., S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+age+and+sex+in+ultraviolet+radiation+cataract+in+the+rat.">Impact of age and sex in ultraviolet radiation cataract in the rat.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 44, 1629-1633 (2003).</li><li>Ayala, M. N., Michael, R., S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+exposure+time+for+UV+radiation-induced+cataract.">Influence of exposure time for UV radiation-induced cataract.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 41, 3539-3543 (2000).</li></ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

<html> מאמר זה מתאר שיטות המאפשרות לימוד אירועים מולקולריים המתרחשים במהלך UVR-B המושרה קטרקט. בהתחשב, כי רוב המידע זמין לin vivo UVR המושרה קטרקט נגזר מניסויים בבקן ספראג-Dawley 7 חולדות, 16, 17, 18, ​​19, החליט להשתמש בעכבר לבקן ספראג-Daw...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> Ketalar </td><td> פייזר </td><td> 150086 </td><td> 50 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> Rompun </td><td> אייר </td><td> 022545 </td><td> 20 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> סימפלקס Oculentum </td><td> Apoteket, שוודיה </td><td> 336164 </td><td> 5 גרם </td></tr><tr><td> Mydriacyl </td><td> אלקון </td><td> 00352 </td><td> 10 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> תמיסת מלח מאוזנת </td><td> אלקון </td><td> 0007950055 </td><td></td></tr><tr><td> 3.5 ul β-mercaptoethanol </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> NucleoSpin רנ&quot;א השני סך רנ&quot;א בידוד הערכה </td><td> Macherey-נגל GmbH &amp; Co, דארן, גרמניה </td><td> 740955.50 </td><td></td></tr><tr><td> פריימרים ספציפיים DNA p53 </td><td> biomers.net GmbH </td><td> Custom made </td><td></td></tr><tr><td> פולימראז תקי-DNA, dNTPack </td><td> רוש </td><td> 04 728 866 001 </td><td></td></tr><tr><td> Agarose </td><td> סיגמא </td><td> A5093 </td><td></td></tr><tr><td> פתרון רומיד ethidium 0.5 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td><td> סיגמא </td><td> E1385 </td><td></td></tr><tr><td> Nano-Drop ND-1000 ספקטרופוטומטר </td><td> מוצרי NanoDrop </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ערכת 1 st סטרנד cDNA סינתזה לRT-PCR (AMV) </td><td> רוש האבחון GmbH </td><td> 11 483 188 001 </td><td></td></tr><tr><td> מערכת iCycler MyiQ יחידה צבע בזמן אמת PCR זיהוי </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td></td><td></td></tr> &lt;p&gt; <td> צלחת 96-היטב </td><td> Sarstedt </td><td> 72.1979.202 </td><td></td></tr><tr><td> מיקס מאסטר ביטוי גני TaqMan </td><td> אפלייד Biosystems </td><td> 4369016 </td><td></td></tr><tr><td> Assay ביטוי הגנים TaqMan ל3 caspase </td><td> אפלייד Biosystems </td><td> Rn00563902_m1 </td><td></td></tr><tr><td> Assay ביטוי גני TaqMan ל18s </td><td> אפלייד Biosystems </td><td> Hs99999901_s1 </td><td></td></tr><tr><td> MyiQ תוכנה </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td></td><td></td></tr><tr><td> caspase-3 בקע (Asp175) </td><td> טכנולוגיית תא איתות </td><td> 9661 </td><td></td></tr><tr><td> נגד הארנב IgG </td><td> Abcam </td><td> Ab6798 </td><td></td></tr><tr><td> סוכרוז </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> 84097 </td><td></td></tr&gt; <tr><td> Vectashield </td><td> מעבדות וקטור </td><td></td><td></td></tr><tr><td> יוניברסל מיקרוסקופ Axioplan 2 דימות </td><td> Carl Zeiss </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> 441244 </td><td></td></tr><tr><td> חיץ 10x TBE </td><td> Promega </td><td> V4251 </td><td></td></tr></tbody></table>

characterization of molecular mechanisms of in vivo uvr induced cataract

קטרקט הוא הסיבה המובילה לעיוורון בעולם 1. ארגון הבריאות העולמית מגדיר את הקטרקט כערפול של עדשת העין שמעכבת את ההעברה של אור. קטרקט הוא מחלה רבה עצרת קשורה עם סוכרת עישון קרינה, אולטרה סגול (UVR), אלכוהול, קרינה מייננת, סטרואידים ויתר לחץ דם. יש ראיות 2-4 ניסיוניות ואפידמיולוגי חזקות 5,6 שUVR גורם קטרקט. פתחנו מודל חיה לUVR B מושרה קטרקט בשני 7 מורדמים וחיות שאינן מורדמות 8. התרופה היחידה לקטרקט היא ניתוח, אבל הטיפול הזה אינו נגיש לכל. ההערכה הוא, כי עיכוב של הופעת הקטרקט במשך 10 שנים יכול להפחית את הצורך בניתוח קטרקט על ידי 50% 9. כדי לעכב את השכיחות של קטרקט, הוא נחוץ כדי להבין את המנגנונים של היווצרות קטרקט ולמצוא strat מניעה היעילהegies. בין המנגנונים להתפתחות קטרקט, אפופטוזיס ממלא תפקיד מכריע בייזום של קטרקט בבני אדם ובעלי החיים 10. ההתמקדות שלנו הייתה לאחרונה אפופטוזיס בעדשה כמנגנון לקטרקט פיתוח 8,11,12. זה צפוי כי הבנה טובה יותר של ההשפעה של UVR על מסלול אפופטוזיס תספק אפשרויות לגילוי של תרופות חדשות למניעת קטרקט. במאמר זה, אנו מתארים כיצד קטרקט יכול להיגרם על ידי ניסוי בחשיפת vivo לUVR-B. בהמשך RT-PCR ואימונוהיסטוכימיה מוצגים ככלים ללמוד מנגנונים מולקולריים של UVR-B המושרה קטרקט.

המקורות השונים של שונות במדידות נאמדו בניתוח שונה ונמצא כי שוקל שלוש מדידות לבעלי חיים שונים למדידות הייתה על הסדר של 15% כי לבעלי חיים. לפיכך, בהתחשב בניתוח עדשה כולה, לא ניתן להגדיל את הדיוק. בדיקות אורתוגונלית הובהרו ניגוד מובהק ל- 3 caspase מסר בין מרווח 120 שעתי השהיה לע?...

Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract at JoVE.com

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

קטרקט הוא הסיבה המובילה לעיוורון בעולם. קרינת אולטרה סגולה שמש (UVR) הוא גורם הסיכון העיקרי להתפתחות קטרקט. מודל חיה של הרבה UVR-B המושרה קטרקט פותח. במאמר זה אנו מתארים שיטות לחקירה של היווצרות קטרקט: חשיפה לUVR, כמותית RT-PCR ואימונוהיסטוכימיה.

אפיון מנגנונים מולקולריים של<em&gt; בחי</em&gt; UVR מושרה קטרקט

Cataract is the leading cause of blindness in the world 1. The World Health Organization defines cataract as a clouding of the lens of the eye which ...

characterization-molecular-mechanisms-vivo-uvr-induced

Research

JoVE Journal

Medicine

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

9.8K Views.  Karolinska Institutet. קטרקט הוא הסיבה המובילה לעיוורון בעולם. קרינת אולטרה סגולה שמש (UVR) הוא גורם הסיכון העיקרי להתפתחות קטרקט. מודל חיה של הרבה UVR-B המושרה קטרקט פותח. במאמר זה אנו מתארים שיטות לחקירה של היווצרות קטרקט: חשיפה לUVR, כמותית RT-PCR ואימונוהיסטוכימיה.

Video: Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

In vivo Near Infrared Fluorescence (NIRF) Intravascular Molecular Imaging of Inflammatory Plaque, a Multimodal Approach to Imaging of Atherosclerosis

The vascular response to injury is a well-orchestrated inflammatory response triggered by the accumulation of macrophages within the vessel wall leading to an accumulation of lipid-laden intra-luminal plaque, smooth muscle cell proliferation and progressive narrowing of the vessel lumen. The formation of such vulnerable plaques prone to rupture underlies the majority of cases of acute myocardial infarction. The complex molecular and cellular inflammatory cascade is orchestrated by the recruitment of T lymphocytes and macrophages and their paracrine effects on endothelial and smooth muscle cells.1
Molecular imaging in atherosclerosis has evolved into an important clinical and research tool that allows in vivo visualization of inflammation and other biological processes. Several recent examples demonstrate the ability to detect high-risk plaques in patients, and assess the effects of pharmacotherapeutics in atherosclerosis.4 While a number of molecular imaging approaches (in particular MRI and PET) can image biological aspects of large vessels such as the carotid arteries, scant options exist for imaging of coronary arteries.2 The advent of high-resolution optical imaging strategies, in particular near-infrared fluorescence (NIRF), coupled with activatable fluorescent probes, have enhanced sensitivity and led to the development of new intravascular strategies to improve biological imaging of human coronary atherosclerosis.
Near infrared fluorescence (NIRF) molecular imaging utilizes excitation light with a defined band width (650-900 nm) as a source of photons that, when delivered to an optical contrast agent or fluorescent probe, emits fluorescence in the NIR window that can be detected using an appropriate emission filter and a high sensitivity charge-coupled camera. As opposed to visible light, NIR light penetrates deeply into tissue, is markedly less attenuated by endogenous photon absorbers such as hemoglobin, lipid and water, and enables high target-to-background ratios due to reduced autofluorescence in the NIR window. Imaging within the NIR 'window' can substantially improve the potential for in vivo imaging.2,5
Inflammatory cysteine proteases have been well studied using activatable NIRF probes10, and play important roles in atherogenesis. Via degradation of the extracellular matrix, cysteine proteases contribute importantly to the progression and complications of atherosclerosis8. In particular, the cysteine protease, cathepsin B, is highly expressed and colocalizes with macrophages in experimental murine, rabbit, and human atheromata.3,6,7 In addition, cathepsin B activity in plaques can be sensed in vivo utilizing a previously described 1-D intravascular near-infrared fluorescence technology6, in conjunction with an injectable nanosensor agent that consists of a poly-lysine polymer backbone derivatized with multiple NIR fluorochromes (VM110/Prosense750, ex/em 750/780nm, VisEn Medical, Woburn, MA) that results in strong intramolecular quenching at baseline.10 Following targeted enzymatic cleavage by cysteine proteases such as cathepsin B (known to colocalize with plaque macrophages), the fluorochromes separate, resulting in substantial amplification of the NIRF signal. Intravascular detection of NIR fluorescence signal by the utilized novel 2D intravascular NIRF catheter now enables high-resolution, geometrically accurate in vivo detection of cathepsin B activity in inflamed plaque.
In vivo molecular imaging of atherosclerosis using catheter-based 2D NIRF imaging, as opposed to a prior 1-D spectroscopic approach,6 is a novel and promising tool that utilizes augmented protease activity in macrophage-rich plaque to detect vascular inflammation.11,12 The following research protocol describes the use of an intravascular 2-dimensional NIRF catheter to image and characterize plaque structure utilizing key aspects of plaque biology. It is a translatable platform that when integrated with existing clinical imaging technologies including angiography and intravascular ultrasound (IVUS), offers a unique and novel integrated multimodal molecular imaging technique that distinguishes inflammatory atheromata, and allows detection of intravascular NIRF signals in human-sized coronary arteries.

In vivo Near Infrared Fluorescence NIRF Intravascular Molecular Imaging of Inflammatory Plaque, a Multimodal Approach to Imaging of Atherosclerosis

We detail a new near-infrared fluorescence (NIRF) catheter for 2-dimensional intravascular molecular imaging of plaque biology in vivo. The NIRF catheter can visualize key biological processes such as inflammation by reporting on the presence of plaque-avid activatable and targeted NIR fluorochromes. The catheter utilizes clinical engineering and power requirements and is targeted for application in human coronary arteries. The following research study describes a multimodal imaging strategy that utilizes a novel in vivo intravascular NIRF catheter to image and quantify inflammatory plaque in proteolytically active inflamed rabbit atheromata.

בשנת vivo קרוב אינפרא אדום דימות פלואורסצנטי intravascular (NIRF) מולקולרית של רובד דלקתיות, גישה multimodal כדי הדמיה של טרשת עורקים

The vascular response to injury is a well-orchestrated inflammatory response triggered by the accumulation of macrophages within the vessel wall leading ...

An in vivo Rodent Model of Contraction-induced Injury and Non-invasive Monitoring of Recovery

Muscle strains are one of the most common complaints treated by physicians. A muscle injury is typically diagnosed from the patient history and physical exam alone, however the clinical presentation can vary greatly depending on the extent of injury, the patient's pain tolerance, etc. In patients with muscle injury or muscle disease, assessment of muscle damage is typically limited to clinical signs, such as tenderness, strength, range of motion, and more recently, imaging studies. Biological markers, such as serum creatine kinase levels, are typically elevated with muscle injury, but their levels do not always correlate with the loss of force production. This is even true of histological findings from animals, which provide a "direct measure" of damage, but do not account for all the loss of function. Some have argued that the most comprehensive measure of the overall health of the muscle in contractile force. Because muscle injury is a random event that occurs under a variety of biomechanical conditions, it is difficult to study. Here, we describe an in vivo animal model to measure torque and to produce a reliable muscle injury. We also describe our model for measurement of force from an isolated muscle in situ. Furthermore, we describe our small animal MRI procedure.

An in vivo Rodent Model of Contraction-induced Injury and Non-invasive Monitoring of Recovery

An in vivo animal model of injury is described. The method takes advantage of the subcutaneous position of the fibular nerve. Velocity, timing of muscle activation, and arc of motion are all pre-determined and synchronized using commercial software. Post injury changes are monitored in vivo using MR imaging/spectroscopy.

In vivo מכרסמים דגם של פגיעה הנגרמת על התכווצות ולא פולשנית לניטור של התאוששות

Muscle strains are one of the most  common complaints treated by physicians. A muscle injury is typically diagnosed from the patient history and  physical ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. Here, we describe a general protocol for cell labeling, imaging, and image processing. The technique is applicable to various cell types and animal models, although here we focus on a typical mouse model for tracking murine immune cells. The most important issues for cell labeling are described, as these are relevant to all models. Similarly, key imaging parameters are listed, although the details will vary depending on the MRI system and the individual setup. Finally, we include an image processing protocol for quantification. Variations for this, and other parts of the protocol, are assessed in the Discussion section. Based on the detailed procedure described here, the user will need to adapt the protocol for each specific cell type, cell label, animal model, and imaging setup. Note that the protocol can also be adapted for human use, as long as clinical restrictions are met.

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

We describe a general protocol for in vivo cell tracking using MRI in a mouse model with ex vivo labeled cells. A typical protocol for cell labeling, image acquisition processing and quantification is included.

בF-MRI 19 vivo למעקב סלולרי

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the extracellular matrix (ECM). Characterizing the biology of this phenotypically distinct group of cells could substantially improve our understanding of early events during the metastatic cascade.

Tumor invasion is a dynamic process facilitated by bidirectional interactions between malignant epithelium and the cancer associated stroma. In order to examine cell-specific responses at the tumor stroma-interface we have combined organotypic co-culture and laser micro-dissection techniques.
Organotypic models, in which key stromal constituents such as fibroblasts are 3-dimentioanally co-cultured with cancer epithelial cells, are highly manipulatable experimental tools which enable invasion and cancer-stroma interactions to be studied in near-physiological conditions.

Laser microdissection (LMD) is a technique which entails the surgical dissection and extraction of the various strata within tumor tissue, with micron level precision.
By combining these techniques with genomic, transcriptomic and epigenetic profiling we aim to develop a deeper understanding of the molecular characteristics of invading tumor cells and surrounding stromal tissue, and in doing so potentially reveal novel biomarkers and opportunities for drug development in CRC.&#160;&#160;&#160;

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molecular profiling of laser microdissected cells and stroma from synthetic, tissue-engineered colorectal cancer models represents a novel and manipulatable approach to characterize and dissect the distinctive biology at the interface between tumor cells at the invasive front and cancer associated stromal cells. &#160;

מולקולרי פרופיל של microenvironment הגידול פולש במודל 3 ממדים של תאי סרטן המעי הגס ו<em&gt; Ex vivo</em&gt; פיברובלסטים

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Certain classes of chemotherapies may exert acute vascular changes that may progress into long-term conditions that may predispose the patient to an increased risk of vascular morbidity.&#160;Yet, albeit&#160;the mounting clinical evidence, there is a paucity of clear studies of vascular toxicity and therefore the etiology of a heterogeneous group of vascular/cardiovascular disorders remains to be elucidated. Moreover, the mechanism that may underlie vascular toxicity can completely differ from the principles of chemotherapy-induced cardiotoxicity, which is related to direct myocyte injury. We have established a real-time, in vivo molecular imaging platform&#160;to evaluate&#160;the potential&#160;acute&#160;vascular toxicity of anti-cancer therapies.
We have set up a platform of in vivo, high-resolution molecular imaging&#160;in mice,&#160;suitable for visualizing vasculature within confined organs and reference blood vessels within the same individuals whereas each individual serve as its own control. Blood vessel walls were impaired after doxorubicin administration, representing a unique mechanism of vascular toxicity that may be the early event in end-organ injury. Herein, the method of fibered confocal fluorescent microscopy (FCFM) based imaging is described, which provides an innovative mode to understand physiological phenomena at the cellular and sub-cellular levels in animal subjects.

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

We herein describe the method of fibered confocal fluorescent microscopy (FCFM) based imaging, which provides an innovative mode to understand physiological phenomena at the cellular and sub-cellular levels in animal subjects.

בעקבות כימותרפיה כלי דם רעילות - בזמן אמת<em&gt; In vivo</em&gt; הדמיה של ירידת ערך כלי

Certain classes of chemotherapies may exert acute vascular changes that may progress into long-term conditions that may predispose the patient to an ...

Establishment and Characterization of UTI and CAUTI in a Mouse Model

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. Females are disproportionately afflicted by UTI: 50% of all women will have a UTI in their lifetime. Additionally, 20-40% of these women who have an initial UTI will suffer a recurrence with some suffering frequent recurrences with serious deterioration in the quality of life, pain and discomfort, disruption of daily activities, increased healthcare costs, and few treatment options other than long-term antibiotic prophylaxis. Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) is the primary causative agent of community acquired UTI. Catheter-associated UTI (CAUTI) is the most common hospital acquired infection accounting for a million occurrences in the US annually and dramatic healthcare costs. While UPEC is also the primary cause of CAUTI, other causative agents are of increased significance including Enterococcus faecalis. Here we utilize two well-established mouse models that recapitulate many of the clinical characteristics of these human diseases. For UTI, a C3H/HeN model recapitulates many of the features of UPEC virulence observed in humans including host responses, IBC formation and filamentation. For CAUTI, a model using C57BL/6 mice, which retain catheter bladder implants, has been shown to be susceptible to E. faecalis bladder infection. These representative models are being used to gain striking new insights into the pathogenesis of UTI disease, which is leading to the development of novel therapeutics and management or prevention strategies.

The ability to model urinary tract infections (UTI) is crucial in order to be able to understand bacterial pathogenesis and spawn the development of novel therapeutics. This work&#8217;s goal is to demonstrate mouse models of experimental UTI and catheter associated UTI that recapitulate and predict findings seen in humans.

ההקמה ואפיון של UTI וCAUTI במודל עכבר

Urinary tract infections (UTI) are highly prevalent, a significant cause of morbidity and are increasingly resistant to treatment with antibiotics. ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

חסך בתאי עכבר מן xenografts גידול האנושי משפר משמעותי ניתוח במורד זרם של תאי יעד

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a wide variety of disorders including metabolic diseases, premature aging syndromes, and neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD). Maintenance of mitochondrial health depends on mitochondrial biogenesis and the efficient clearance of dysfunctional mitochondria through mitophagy. Experimental methods to accurately detect autophagy/mitophagy, especially in animal models, have been challenging to develop. Recent progress towards the understanding of the molecular mechanisms of mitophagy has enabled the development of novel mitophagy detection techniques. Here, we introduce several versatile techniques to monitor mitophagy in human cells, Caenorhabditis elegans (e.g., Rosella and DCT-1/ LGG-1 strains), and mice (mt-Keima). A combination of these mitophagy detection techniques, including cross-species evaluation, will improve the accuracy of mitophagy measurements and lead to a better understanding of the role of mitophagy in health and disease.

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Mitophagy, the process of clearing damaged mitochondria, is necessary for mitochondrial homeostasis and health maintenance. This article presents some of the latest mitophagy detection methods in human cells, Caenorhabditis elegans, and mice.

במבחנה and In Vivo זיהוי של Mitophagy ב תאים אנושיים, C. Elegansועכברים

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

A Doxorubicin-Induced Murine Model of Dilated Cardiomyopathy In Vivo

Dilated cardiomyopathy (DCM) refers to a spectrum of heterogeneous myocardial disorders characterized by ventricular dilation and depressed cardiac performance in the absence of hypertension, valvular, congenital, or ischemic heart diseases, and which may be related to infection, autoimmune or metabolic abnormalities, or family inheritance. It can progress into congestive heart failure with a poor prognosis. Doxorubicin (Dox) is widely employed as a chemotherapeutic drug, but its use is limited because it causes DCM-like changes of the myocardium. Its myocardial toxicity is attributed to oxidative stress, chronic inflammation, and cardiomyocyte apoptosis. A model of DCM exploiting these Dox-induced DCM symptoms has not been established.

Described is a protocol to establish a Doxorubicin-induced dilated cardiomyopathy (DCM) model in mice via long-term intraperitoneal injection of Doxorubicin.

דגם מורין המושרה על ידי דוקסורוביצין של קרדיומיופתיה מונפשת ב- Vivo

Dilated cardiomyopathy (DCM) refers to a spectrum of heterogeneous myocardial disorders characterized by ventricular dilation and depressed cardiac ...

Generation and Characterization of Right Ventricular Myocardial Infarction Induced by Permanent Ligation of the Right Coronary Artery in Mice

Right ventricular infarction (RVI) is a common presentation in clinical practice. Severe RVI can lead to fatal hemodynamic dysfunction and arrhythmia. In contrast to the extensively used mouse myocardial infarction (MI) model generated by left coronary artery ligation, the RVI mouse model is rarely employed due to the difficulty associated with model generation. Research on the mechanisms and treatment of RVI-induced RV remodeling and dysfunction requires animal models to mimic the pathophysiology of RVI in patients. This study introduces a feasible procedure for RVI model generation in C57BL/6J mice. Further, this model was characterized based on the following: infarct size evaluation at 24 h after MI, assessment of cardiac remodeling and function with echocardiography, RV hemodynamics assessment, and histology of the infarct zone at 4 weeks after RVI. In addition, a coronary vasculature cast was performed to observe the coronary arterial arrangement in RV. This mouse model of RVI would facilitate the research on mechanisms of right heart failure and seek new therapeutic targets of RV remodeling.

There are several differences between the right and left ventricles. However, the pathophysiology of right ventricular infarction (RVI) has not been clarified. In the present protocol, a reproducible method for RVI mouse model generation is introduced, which may provide a means to explain the mechanism of RVI.

יצירת ואפיון של אוטם שריר הלב בחדר הימני המושרה על ידי קשירת קבועה של העורק הכלילי הימני בעכברים

Right ventricular infarction (RVI) is a common presentation in clinical practice. Severe RVI can lead to fatal hemodynamic dysfunction and arrhythmia. In ...