Este trabalho foi financiado pelo Instituto Karolinska KID-financiamento Autoridade de Protecção, sueco Radiação, Instituto Karolinska Eye Research Foundation, Gun och Bertil Stohnes Stiftelse, Olho St. Erik Hospital Research Foundation, Ögonfonden, Konung Gustav V: s och Drottning Viktorias Frimurarstiftelse.

1. A exposição à radiação ultravioleta <ol><li> 15 min antes da exposição, anestesiar uma ratazana Sprague-Dawley do sexo feminino, com uma mistura de 90 mg / kg de Ketalar (cetamina), e 10 mg / kg de Rompun (xilazina) por injecção intraperitoneal. </li><li> Colocar o animal em um limitador de rato e apertar as correias até a imobilização do rato sem provocar um aperto do tronco 13. </li><li> Instilar Mydriacyl (tropicamida), 10 mg / ml, em ambos os olhos dos ratos para induzir midríase. </li><li> Colocar o animal para que um olho está posicionado de encontro a um estreito feixe de RUV a 300 nm 14 nm com 10 largura total a metade do valor máximo e proteger o olho contralateral com fita adesiva preta. </li><li> Exponha o rato unilateralmente limiar sub-dose de 1 kJ / m 2 RUV-B a 300 nm para 15 min 15. </li></ol> 2. Dissecação <ol><li> Após pré-determinado intervalo de pós-exposição (1, 5, 24 e 120 horas), o sacrifício do rato de seis semanas de idade (peso &lt;200 g) por carbon asfixia e dióxido de deslocamento das vértebras cervicais. </li><li> Enuclear olhos. Depois disso, coloque a córnea do olho para baixo, lado posterior para cima. Em seguida, o perfurador de um furo através da aplicação de um mínimo de uma cânula de calibre 27 e empurre tangencialmente à esclerótica para evitar danificar a lente que é muito próximo da esclera. Em seguida, usar um par de tesouras de cirurgia oftálmica para cortar circunferencialmente logo atrás do limbo até que a porção posterior da esclerótica pode ser levantada. Depois, levante a lente com uma pinça sem corte curvas. </li><li> Remover restos do corpo ciliar do equador do cristalino sob um microscópio, mantendo a lente na solução de sal equilibrada de não mais do que 5-10 minutos. </li></ol> 3. RT-PCR quantitativa <ol><li> Colocar uma lente em uma mistura de 350 ul de tampão de lise RA1 (NucleoSpin ARN II de ARN total isolado kit) e 3,5 ul de β-mercaptoetanol em 2 ml de tubo Eppendorf. </li><li> Manter a lente nesta mistura durante 30 min à temperatura ambiente. </li><li> Homogeneizar a lente comuma agulha até que apenas o núcleo duro do cristalino é deixada entre a lente (córtex e da cápsula da lente são lisadas em tampão de lise). Remover o núcleo a partir da mistura. </li><li> Armazenar as amostras imediatamente a -70 ° C. </li><li> Descongelar as amostras e seguir o protocolo &quot;purificação RNA total a partir de células cultivadas e tecidos&quot; (NucleoSpin RNA II RNA total isolamento kit). </li><li> Armazenar as amostras de ARN a -70 ° C. </li><li> Para verificar a remoção suficiente de DNA de cada amostra, execute uma PCR sob as seguintes condições (passo 1: 95 ° C durante 2 min; passo 2 durante 40 ciclos de: 95 ° C durante 20 segundos, 55 ° C durante 20 seg, 72 ° C durante 20 segundos; passo 3: 72 ° C durante 7 min) com os iniciadores de ADN específicos de p53, para a frente 5&#39;-ACCCTCTGACCTTTTTCCCA-3 &#39;e inverso 5&#39;-TGCTGGGATCTTAGGCACTC-3&#39; e a Taq DNA polimerase (dNTPack), de acordo com a fabricação protocolo. O produto de PCR esperado é 243 pares de bases. </li><li> Executar uma electroforese em gel de agarose 1,5% para detectar ADN do produto de PCR específico de 243 pares de bases. Para preparar1,5% de agarose gel em tampão TBE ter 3,75 g de agarose e resolvê-lo em 250 ml de tampão TBE. Adicionar brometo de etídio (0,5 mg / ml) em 500 ul de 500 ml de solução a 1,5% de gel de agarose. Aquece-se a mistura num forno de microondas owen e agitar para resolver a agarose. </li></ol> Nenhuma das amostras tem de revelar quaisquer produtos de PCR específicos de DNA em electroforese em gel de agarose a 1,5%. <ol start="9"><li> Medir a concentração de amostras de RNA (1 ul) e a razão entre a absorvância da amostra a 260 nm (RNA) e 280 nm (de proteína) em um espectrofotômetro ND-1000 NanoDrop. Se o RNA relação à proteína de RNA absorvância da amostra é de 2,0 ou mais, em seguida, a amostra de RNA é puro. Se a razão de absorvância da amostra de RNA é menor do que 2,0, refazer o RNA etapa de purificação de 3,5. </li><li> Tomar um volume de amostra de ARN correspondente a 1 ug e sintetizar cDNA após a 1 ª Strand Kit protocolo de síntese de ADNc (1 st Strand Kit de síntese de ADNc por RT-PCR). </li><li> Armazenar as amostras de cDNA a -20 ° C(Por um período de um ou mais anos, armazenar a -70 ° C). </li><li> Executar quantitativa PCR em tempo real em iCycler única cor MyiQ Real Time sistema de detecção de PCR. Carga triplicados em placa de 96 poços com 1 ul da amostra de cDNA, TaqMan Gene Expression Mix Master, TaqMan Gene Expression Assay por caspase 3, de acordo com as instruções para a fabricação. Carga triplicados em outra placa de 96 poços com 1 ul da amostra de cDNA, TaqMan Gene Expression Mix Master, TaqMan Gene Expression Assay por 18s, de acordo com as instruções para a fabricação (TaqMan Gene Expression Assay Protocol). Diluir em série de uma fracção de cDNA a partir de três escolhidos aleatoriamente não expostas lentes. Executar diluições em série juntamente com o cDNA a partir de amostras em uma placa de 96 poços. </li><li> Utilizar o método de curva padrão para a quantificação dos resultados. O número de ciclos a fluorescência limiar é utilizado como a medida em software MyiQ. Uma curva padrão de expressar o número de ciclos de limiar como uma função da concentração relativa de calibrador é eslecido para as diluições em série em cada uma das placas. cDNA a partir de três amostras não tratadas foi de lente usada para calibração. Relacionar o número limite de ciclos para cada amostra com a curva padrão para se obter a concentração relativa da amostra de cDNA medido. Finalmente, obter o nível de expressão dos genes alvo através da relação entre a concentração relativa do alvo de cDNA para os 18s de controlo interno de cDNA. </li></ol> 4. A coloração imuno-histoquímica <ol><li> Fixação <ol><li> Dissecar o olho em PBS (Tampão fosfato salino, pH 7,4). </li><li> Colocar o olho em um tubo cheio com paraformaldeído a 4% (PFA) em frio de gelo durante 20 min. Prepare PFA 4% no dia anterior. Armazenar a 4 ° C até à sua utilização. PFA é fresco por cerca de uma semana. </li><li> Remover PFA com uma micropipeta. Em seguida, lava-se com PBS arrefecido em gelo durante 20 min. </li><li> Colocar o olho em sacarose a 30%, a +4 ° C durante a noite. </li><li> Colocar o olho em um copo cheio de temperatura de corte ideal (outubro) e médio (Tissue-Tek). Colocar o olho em posição adequada para o corte. </li><li> Congelar em OCT médio sobre gelo seco. </li><li> Armazenar a -70 ° C até à sua utilização. </li></ol></li><li> Seccionamento <ol><li> Posicione o olho para crio-corte em um plano apropriado. </li><li> Corte três 5 mm de espessura médio-sagital secções de uma porção central de cada uma das lentes. Descartar pelo menos seis trechos entre seções seqüenciais para evitar manchar os mesmos núcleos em diferentes seções. </li><li> Uma vez que a seção tenha sido cortada, coloque delicadamente um slide em cima dela. A seção deve, então, ficar com o slide. </li><li> Deixar as lâminas secar ao ar antes da utilização. As lâminas podem ser armazenadas a -20 ° C até serem necessárias. </li></ol></li><li> Fluorescência imunohistoquímica <ol><li> Deixe as amostras atingir a temperatura ambiente (5-10 min). </li><li> Desenhar bordas em torno dos espécimes com uma caneta PAP-(Invitrogen). </li><li> Deixe que a fronteira seco durante algum tempo (10 min). </li><li> Rotular as lâminas de microscópio. </li><li> Rehidratar em 1 × PBS durante 15 min. </li><li> Permeabilizar a solução padrão para bloco de 30 min. </li><li> Adicionar anticorpo primário (caspase-3 de coelho, policlonal de anticorpos clivados Asp175 9661; tecnologia de sinalização celular, Inc) diluída 1:3.000 em solução bloco padrão. </li><li> Armazenar numa câmara humidificada a 4 ° C durante a noite. </li><li> Lavar com PBS por pipetagem (3 x 5 min) ou por imersão num banho de grandes dimensões (&gt; 15 min, 1-2 alterações). </li><li> Adicionar anticorpo secundário (anticorpo de coelho anti secundária com um espectro de absorção / emissão específico) diluído 1:300 em solução de bloqueio padrão. </li><li> Lavar com PBS por pipetagem (3 x 5 min) ou por imersão num banho de grandes dimensões (&gt; 15 min, 1-2 alterações). </li><li> Limpe PAP pen-manchas. </li><li> Armazenar numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 3 hr. Evitar a exposição à luz. </li><li> Adicionar uma gota de Vectashield e colocar uma lamela sobre a lâmina. Evite fazer bolhas. </li><li> Deixe secar a camada Vectashield (~ 20 min). </li><li> Mantenha seções in no escuro até a análise. </li><li> Todas as secções de controlo são tratados, na ausência de anticorpo primário. </li><li> Olhe para os resultados dentro de algumas horas sob um microscópio de fluorescência. </li><li> Conte núcleos de células epiteliais &quot;de um arco lateral nuclear para outro lado arco nuclear de cada lente. Aplicar o filtro padrão azul para ver todos os núcleos lente epitelial em azul e um filtro padrão que se encaixa a emissão do anticorpo secundário para ver os núcleos caspase-3 positiva em verde. </li><li> Registar o número de todos os núcleos lente epiteliais e o número de núcleos positivos. Conte as células três vezes para cada seção. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Brian, G., Taylor, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cataract+blindness:+challenge+for+the+21+st+century.">Cataract blindness: challenge for the 21 st century.</a> Bulletin of the World Health Organization. 79, 249-256 (2001).</li><li>Jose, J. G., Pitts, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wavelength+dependency+of+cataracts+in+albino+mice+following+chronic+exposure.">Wavelength dependency of cataracts in albino mice following chronic exposure.</a> Experimental Eye Research. 41, 545-563 (1985).</li><li>S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+cataract+in+the+rat+after+exposure+to+radiation+in+the+300+nm+wavelength+region.+A+study+of+the+macro-,+micro-+and+ultrastructure.">Acute cataract in the rat after exposure to radiation in the 300 nm wavelength region. A study of the macro-, micro- and ultrastructure.</a> Acta Ophthalmol. (Copenh). 66, 141-152 (1988).</li><li>Meyer, L., Dong, X., Wegener, A., S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose+dependent+cataractogenesis+and+Maximum+Tolerable+Dose+(MTD+2.3:16)+for+UVR+-+B+induced+cataract+in+C57BL/6J+mice.">Dose dependent cataractogenesis and Maximum Tolerable Dose (MTD 2.3:16) for UVR - B induced cataract in C57BL/6J mice.</a> Experimental Eye Research. 86, 282-289 (2008).</li><li>McCarty, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+lifetime+ocular+exposure+to+UV-B:+the+Melbourne+visual+impairment+project.">Assessment of lifetime ocular exposure to UV-B: the Melbourne visual impairment project.</a> Developments in Ophthalmology. 27, 9-13 (1997).</li><li>Sasaki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+cortical+cataract+in+subjects+of+diverse+races+and+latitude.">Localization of cortical cataract in subjects of diverse races and latitude.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 4210-4214 (2003).</li><li>S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+cataract+induced+by+ultraviolet+radiation.">Experimental cataract induced by ultraviolet radiation.</a> Acta Ophthalmol. (Copenh. 68, 1-77 (1990).</li><li>Galichanin, K., L&#246;fgren, S., Bergmanson, J., S&#246;derberg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+damage+in+the+lens+after+in+vivo+close+to+threshold+exposure+to+UV-B+radiation:+cytomorphological+study+of+apoptosis.">Evolution of damage in the lens after in vivo close to threshold exposure to UV-B radiation: cytomorphological study of apoptosis.</a> Exp. Eye Res. 91, 369-377 (2010).</li><li>McCarty, C. A., Taylor, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+epidemiologic+evidence+linking+ultraviolet+radiation+and+cataracts.">A review of the epidemiologic evidence linking ultraviolet radiation and cataracts.</a> Dev. Ophthalmol. 35, 21-31 (2002).</li><li>Li, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lens+epithelial+cell+apoptosis+appears+to+be+a+common+cellular+basis+for+non-congenital+cataract+development+in+humans+and+animals.">Lens epithelial cell apoptosis appears to be a common cellular basis for non-congenital cataract development in humans and animals.</a> Journal of Cell Biology. 130, 169-181 (1995).</li><li>Michael, R., Vrensen, G., van Marle, J., Gan, L., S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+in+the+rat+lens+after+in+vivo+threshold+dose+ultraviolet+irradiation.">Apoptosis in the rat lens after in vivo threshold dose ultraviolet irradiation.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 13, 2681-2687 (1998).</li><li>Ayala, M. N., Strid, H., Jacobsson, U., S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53+Expression+and+Apoptosis+In+The+Lens+After+Ultraviolet+Radiation+Exposure.">p53 Expression and Apoptosis In The Lens After Ultraviolet Radiation Exposure.</a> Investigative ophthalmology of visual science. 48, 4187-4191 (2007).</li><li>Galichanin, K., Wang, J., Lofgren, S., Soderberg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+universal+rat+restrainer+for+ophthalmic+research.">A new universal rat restrainer for ophthalmic research.</a> Acta Ophthalmol. 89 (1), (2011).</li><li>Ayala, M. N., Michael, R., S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+cataract+after+repeated+exposure+to+ultraviolet+radiation.">In vivo cataract after repeated exposure to ultraviolet radiation.</a> Experimental Eye Research. 70, 451-456 (2000).</li><li>S&#246;derberg, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+of+ultraviolet+radiation+exposure+to+the+lens+expressed+by+maximum+tolerable+dose+(MTD).">Toxicity of ultraviolet radiation exposure to the lens expressed by maximum tolerable dose (MTD).</a> Developments in Ophthalmology. 35, 70-75 (2002).</li><li>Michael, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+repair+of+cataract+induced+by+ultraviolet+radiation.">Development and repair of cataract induced by ultraviolet radiation.</a> Ophthalmic Research. 32, 1-45 (2000).</li><li>L&#246;fgren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cataract from ultraviolet radiation. , (2001).</li><li>Ayala, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Influence of exposure patterns and oxidation in UVR induced Cataract. , (2005).</li><li>Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Safety limit estimation for cataract induced by ultraviolet radiation. , (2005).</li><li>L&#246;fgren, S., Michael, R., S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+age+and+sex+in+ultraviolet+radiation+cataract+in+the+rat.">Impact of age and sex in ultraviolet radiation cataract in the rat.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 44, 1629-1633 (2003).</li><li>Ayala, M. N., Michael, R., S&#246;derberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+exposure+time+for+UV+radiation-induced+cataract.">Influence of exposure time for UV radiation-induced cataract.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 41, 3539-3543 (2000).</li></ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

<html> Este artigo descreve métodos que permitem estudar eventos moleculares que ocorrem durante a catarata induzida UVR-B. Considerando, que a maioria das informações disponíveis para in vivo UVR catarata induzida foi derivada a partir de experiências sobre albino Sprague-Dawley 7, 16, 17, 18, ​​19, decidimos usar o rato Sprague-Dawley albinos, no presente estudo. Idade dos ratos foi de seis semanas de idade. O gênero foi escolhido para ser fêmea, porque, em co...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários (opcional) </td></tr><tr><td> Ketalar </td><td> Pfizer </td><td> 150086 </td><td> 50 mg / ml </td></tr><tr><td> Rompun </td><td> Bayer </td><td> 022545 </td><td> 20 mg / ml </td></tr><tr><td> Simplex Oculentum </td><td> Apoteket, Suécia </td><td> 336164 </td><td> 5 g </td></tr><tr><td> Mydriacyl </td><td> Alcon </td><td> 00352 </td><td> 10 mg / ml </td></tr><tr><td> Solução salina balanceada </td><td> Alcon </td><td> 0007950055 </td><td></td></tr><tr><td> 3,5 ul β-mercaptoetanol </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> NucleoSpin ARN II de isolamento de ARN total kit </td><td> Macherey-Nagel GmbH &amp; Co, Duren, Alemanha </td><td> 740.955,50 </td><td></td></tr><tr><td> p53 iniciadores de ADN específicos </td><td> biomers.net GmbH </td><td> Feitos </td><td></td></tr><tr><td> Taq DNA polimerase, dNTPack </td><td> Roche </td><td> 04 728 866 001 </td><td></td></tr><tr><td> Agarose </td><td> Sigma </td><td> A5093 </td><td></td></tr><tr><td> Solução de brometo de etídio 0,5 mg / ml </td><td> Sigma </td><td> E1385 </td><td></td></tr><tr><td> Nano Drop-ND-1000 espectrofotômetro </td><td> Produtos Nanodrop </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 1 st Strand kit de síntese de ADNc por RT-PCR (AMV) </td><td> Roche Diagnostics GmbH </td><td> 11 483 188 001 </td><td></td></tr><tr><td> iCycler MyiQ única cor em tempo real sistema de detecção de PCR </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td></td><td></td></tr> &lt;tr&gt; <td> Placa de 96 poços </td><td> Sarstedt </td><td> 72.1979.202 </td><td></td></tr><tr><td> TaqMan Gene Expression Master Mix </td><td> Applied Biosystems </td><td> 4369016 </td><td></td></tr><tr><td> TaqMan Gene Expression Assay da caspase 3 </td><td> Applied Biosystems </td><td> Rn00563902_m1 </td><td></td></tr><tr><td> Ensaio TaqMan Gene Expression para maiores de 18 </td><td> Applied Biosystems </td><td> Hs99999901_s1 </td><td></td></tr><tr><td> MyiQ software </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Caspase-3 clivada (Asp175) </td><td> Tecnologia de sinalização celular </td><td> 9661 </td><td></td></tr><tr><td> Anti IgG de coelho </td><td> Abcam </td><td> Ab6798 </td><td></td></tr><tr><td> Sacarose </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 84097 </td><td></td></tr&gt; <tr><td> Vectashield </td><td> Vector Laboratories </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Microscópio Universal Axioplan 2 Imagem </td><td> Carl Zeiss </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldeído </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 441244 </td><td></td></tr><tr><td> Tampão TBE 10x </td><td> Promega </td><td> V4251 </td><td></td></tr></tbody></table>

characterization of molecular mechanisms of in vivo uvr induced cataract

A catarata é a principal causa de cegueira no mundo 1. A Organização Mundial de Saúde define catarata como uma turvação da lente do olho, o que impede a transferência da luz. A catarata é uma doença multi-factorial associada com diabetes, o tabagismo, radiação ultravioleta (RUV), o álcool, a radiação ionizante, esteróides e hipertensão. Há evidências experimentais 2-4 e epidemiológica forte que 5,6 UVR provoca catarata. Foi desenvolvido um modelo animal para a RUV B catarata induzida em ambos com 7 anestesiados e não anestesiados animais 8. A única cura para a catarata é a cirurgia, mas este tratamento não é acessível a todos. Estimou-se que o atraso de aparecimento da catarata por 10 anos poderia reduzir a necessidade de cirurgia de catarata em 50% 9. Para atrasar a incidência de catarata, que é necessária para compreender os mecanismos de formação de catarata e encontrar estratégia de prevenção eficazgias. Entre os mecanismos para o desenvolvimento de cataratas, a apoptose desempenha um papel crucial na iniciação da catarata em humanos e animais 10. Nosso foco tem sido recentemente apoptose na lente como o mecanismo para o desenvolvimento de cataratas 8,11,12. Prevê-se que uma melhor compreensão do efeito da radiação UV sobre a via de apoptose proporcionará possibilidades para a descoberta de novos fármacos para prevenir a catarata. Neste artigo, nós descrevemos como catarata pode ser induzida experimentalmente pela exposição in vivo a RUV-B. Além disso RT-PCR e imuno-histoquímica estão apresentados como ferramentas para o estudo dos mecanismos moleculares de catarata induzida por radiação UV-B.

As várias fontes de variação nas medidas foram estimadas com uma análise de variância, e verificou-se que, considerando três medidas por animal da variância para as medições foi da ordem de 15% do que para os animais. Assim, tendo em vista a análise da lente inteira, não é possível aumentar a precisão. Testes ortogonal elucidado um contraste estatisticamente significativo para a caspase-3 de mensagem entre 120 intervalo de latência hr vs intervalos mais curtos de latência. <e...

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Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

A catarata é a principal causa de cegueira no mundo. Radiação solar ultravioleta (UVR) é o principal fator de risco para o desenvolvimento de catarata. Um modelo animal de longe RUV-B catarata induzida foi desenvolvido. Neste artigo vamos descrever os métodos de investigação de formação de catarata: a exposição a raios ultravioletas, RT-PCR e imuno-histoquímica.

Caracterização de mecanismos moleculares de<em&gt; Em vivo</em&gt; RUV catarata induzida

Cataract is the leading cause of blindness in the world 1. The World Health Organization defines cataract as a clouding of the lens of the eye which ...

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Research

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Medicine

Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract

9.8K visualizações.  Karolinska Institutet. A catarata é a principal causa de cegueira no mundo. Radiação solar ultravioleta (UVR) é o principal fator de risco para o desenvolvimento de catarata. Um modelo animal de longe RUV-B catarata induzida foi desenvolvido. Neste artigo vamos descrever os métodos de investigação de formação de catarata: a exposição a raios ultravioletas, RT-PCR e imuno-histoquímica.