עבודה זו נתמכת על ידי ג&#39;קסון מעבדת מרכז סרטן פיילוט גרנט ומיין קרן הסרטן.

1. פרוטוקול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדם עכבר עם קטמין וxylazine במינון של קטמין מ&quot;ג 0.1 ו 0.01 מ&quot;ג של xylazine ל1 גרם של משקל גוף. Carprofen (0.005 מ&quot;ג לכל 1 גרם של משקל גוף) משמש לשיכוך כאבים והוא מנוהל לפני ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל הכלים כירורגיים, כולל מקדח השיניים, הוא קיטור המעוקר ב חיטוי. אם ניתוחים יצוו הם שיש לבצע, את הטיפים של מכשירי ניתוח חייבים להיות מחדש מעוקרים עם חרוז זכוכית מעקר (מדע פיין כלי FST 250) לפני כל ניתוח שלאחר מכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהעכבר הגיע מטוס כירורגית של הרדמה, שהוערך על ידי העדר תגובה לקמצוץ בוהן, היא ממוקמת על צמר גפן ואז הממוקם על משטח מחומם כדי לשמור על טמפרטורת גוף של ~ 37 ° C. עומק ההרדמה מנוטר לעתים קרובות במהלך הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פרווה הוסרה מהראש הגבה באזור משולש כ ~ 3 מ&quot;מ זנב לnares והארכת caudally לספירהrvical חוליות. משחה לרפואת עיניים מוחלת על עיניים כדי להגן עליהם מהתייבשות וגירוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העכבר ממוקם בrecumbancy גחון ולחטא את העור עם יוד ניתוחית, 70% אתנול, ומטליות סטריליות. דש 0.8 x 1.0 סנטימטר של עור המכסה את ההיבט הגבי של העצמות הקדמיות והקודקודית של הגולגולת מוסר באמצעות מספריים עדינים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משכך כאבים מקומי, 0.5% לידוקאין, מיושם באופן מקומי לקרום העצם ואת הרקמות שנחשפו בשולי הפצע. קרום העצם הוסר על ידי גירוד את הגולגולת בעדינות עם להב סכין חיתוך; זה יעזור דבק cyanoacrylate לדבוק עצם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אזור קליפת המוח של עניין מתואר בגולגולת עם טוש. השטח של עניין לא צריך להיות ממוקם מעל תפרים בגולגולת, כדי למנוע ניזק לכלי שיט גדולים שבבסיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שכבה דקה של דבק cyanoacrylate מוחלת על שולי הפצע, כדי למנוע החלחול של נוזלי serosanguinous, ולמעט בגולגולתהאזור של עניין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלט שיני אור פעיל משמש בפרוטוקול שלנו לאיטום הגולגולת. לפני היישום של בטון שיניים, כל הגולגולת החשופה למעט השטח המיועד לדילול מטופל עם פריימרים וכתוצאה מכך עם הסוכן המליט מערכת מלט שיני אור הופעל. ברגע שהחומר הקושר מיובש, מלט שיני אור המופעל מיושם על מנת לכסות את הגולגולת. כדי לייצב את הראש של העכבר לניתוח והדמיה שלאחר מכן, אגוז hex סטרילי # 00-90 מוטבע בבטון בשיניים במרחק מהאזור לדילול. השימוש במלט שיני אור פעיל מאפשר לנו להכין את הגולגולת ללא צורך למהר לסיים את כל ההליך. לאחר הכנת מלט השיניים בגולגולת הושלמה, מלט השיניים נרפא עם אור הנראה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מלט השיניים הוא נרפא, בעל כיסוי ראש ממכשיר stereotactic הוא רכוב לאגוז hex על ראש העכבר באמצעות # 00-90 בורג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Drאופ של בטמפרטורת חדר, 0.9% סליין סטרילי מוחל על אזור הגולגולת לדילול. בעזרת stereomicroscope, מייקרו-תרגיל במהירות גבוהה משמש כדי לדלל אזור עגול של הגולגולת (בדרך כלל 4-5 ~ מ&quot;מ קוטר) מעל האזור של עניין. קידוחים והיישום של מי מלח לאזור הקדח מבוצעים לסירוגין במהלך הליך הדילול, כדי למנוע פגיעת תרמית ברקמת המוח הבסיסית. מלוח סופג חום וגם עוזר לרכך את העצם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גולגולת העכבר מורכבת משתי שכבות דקות של עצם קומפקטי, רבדת שכבה עבה של עצם ספוגי. השכבה החיצונית של עצם הקומפקטי ביותר של העצם הספוגי יוסרה באמצעות המקדח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי שרוב העצם הספוגי מוסר, החללים שנותרו בתוך העצם הספוגי ניתן לראות תחת מיקרוסקופ לנתח, המציין כי קידוח מתקרב לשכבת העצם הקומפקטית הפנימית. בשלב זה, עובי גולגולת עדיין צריך להיות יותר מ 50 מיקרומטר. גולגולת צריך להיות דלילהמשיך בזהירות כדי לקבל דקה מאוד (~ 20 מיקרומטר) וחלק הכנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע העובי הרצוי של גולגולת מושג (~ 20 מיקרומטר), שהגולגולת לוטשה ראשון באמצעות שוט סיליקון בהזמנה אישית עם יהלום דבק (6-15 מיקרומטר) לכ 10 דקות. ליטוש יהלומי הדבק משרת שתי מטרות. ראשית, זה עוד יותר מדלל את הגולגולת בלי הפעלת לחץ על הגולגולת הדקה יותר, ובכך למנוע ניזק מקרי לרקמת המוח הבסיסית. שנית, הוא משמש כצעד ראשוני לליטוש הגולגולת דללה לפני פח התחמוצת הפרטנית משמשת לליטוש גולגולת נוספת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ליטוש יהלומי הדבק, הגולגולת הדקה יותר מלוטשת עם תחמוצת בדיל לכ 10 דקות. ברגע שהגולגולת היא מלוטשת, תחמוצת הבדיל הוא הסמיק משם עם מי מלח עד שהגולגולת דללה מופיעה נקיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בשלב זה, אם החלון גולגולתי הוא לשמש לאורך in vivo הדמיה, אזור הגולגולת הדקה ניקה הוא מיובש. טיפה קטנה של ברורדבק cyanoacrylate מוחל לאטום את החלון גולגולתי. השכבה של דבק cyanoacrylate בין הגולגולת הדקה יותר וcoverslip צריכה להיות דקה ככל האפשר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הזרקה היא שיש לבצע לאחר יצירת חלון גולגולתי נמלים, בשלב זה, מחט מזרק 26-מד משמשת ליצירת פתח קטן בצד אחד של חלון, המצוחצח וגולגולת דקה. פתיחה זו משמשת להזרקת תאי GBM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוס טפטפה סטרילית עם קצה הפתיחה כ 50 מיקרומטר בקוטר הוא משך באמצעות חולץ פיפטה. פיפטה זה ישמש להזרקת תאי GBM, והוא הועמס על micromanipulator. פיפטה נטענת בזווית של 30 מעלות, כך שאתר הזרקת תאי GBM יהיה רחוק מאתר ההדמיה הסופי. קצה פיפטה יוסר תחת מיקרוסקופ נתיחה. השעית תא GBM היא החזית שנטענה לתוך פיפטה ידי שאיבה באמצעות משאבת מזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הזרקת פיפטה טעונה עם תאי GBM, העכבר יועבר חזרה תחת המיקרוסקופ האלקטרוני. פיפטה ההזרקה יורדת לכיוון הפתח הקטן בחלון גולגולתי ולבסוף הוכנסה לתוך המוח דרך הפתח באמצעות micromanipulator. μl 1 מתוך השעית תא GBM מוזרק לתוך 100-200 מיקרומטר המוח ממשטח המוח (מהירות: 0.1 μl / דקות, משך: 10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגולגולת היא מיובשת, טיפה קטנה של דבק cyanoacrylate ברור מוחלת על הגולגולת המיובשת, וחתיכה בגודל 3-# 1 מ&quot;מ coverslip היא דבקה אזור הגולגולת הדקה ומלוטש. הרווח בין coverslip ומלט שיניים סמוך הוא חתום עם דבק cyanoacrylate. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ניתוח, העכבר מוזרק מתחת לעור עם מי מלח חם סטרילי 1 מ&quot;ל ומסופק עם חום משלים כדי לשמור על טמפרטורת גוף עד שהתאושש לגמרי מההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור הדמיה, עכברים מורדמים עם קטמין וxylazine במינון של קטמין מ&quot;ג 0.1 ו 0.01 מ&quot;ג של xylazine ל1 גרם של משקל גוף. עכברים משותקים באמצעות מסגרת stereotactic מותאמת אישיתמתחת למיקרוסקופ. אם חוזר על עצמו בגוף חי הדמיה מתבצע על בסיס יומי, isofluorane יהיה אפשרות טובה יותר, כמו עכברים להראות סימנים של תלות בשימוש חוזר ונשנה של קטמין. </li></ol> 2. נציג תוצאות ניתוח חלון גולגולתי מוצלח יציאות מאפשר החלון גולגולתי להישאר ברור במשך שבועות עד חודשים. איור 1 מציג את כלי הדם מתחת לחלון גולגולתי יציאות ראה בעיני רווחו באמצעות אור backscattered. תמונות vasculature אלו שמשו כאתרים לאיתור אזורי המוח הזהה להדמיה חוזרת ונשנית. כדי להמחיש את שני התאים אנדותל כלי הדם ותאי GBM, חצה את B6.Cg-Tg (Tek-cre) 1Ywa / י העכבר, שתוויות בתאי אנדותל כלי דם עם B6.Cg-GT (רוזה) 26Sor tm9 (CAG-tdTomato ) Hze / י עכבר, ועכברים שנוצרו עם תאי אנדותל כלי דם שכותרתו עם tdTomato החלבון פלואורסצנטי האדום. לאחר מכן בצענו את הליך craniotomy יציאות במייל אלהלסה&quot;נ, והזריק GFP שכותרתו תאי GBM לתוך המוח שלהם דרך פתח קטן בצד של חלון גולגולתי. לאחר מכן בצענו in vivo הדמית שני פוטוני longitudinally על העכברים שהוזרקו. גל עירור הליזר נקבע על 910 ננומטר, אשר גרם לעירור של שני GFP וtdTomato. שני פוטוני ההדמיה בוצעה במיקרוסקופ שהותקן שני פוטוני ליזר סריקה עם שני גלאים ליכולת האיתור סימולטני ירוקה / אדום פלואורסצנטי. איור 2 מראה בדוגמא vivo של ייזום גליומה מתאי GBM הזריקו ליד כלי הדם. יציאות החלון גולגולתי הוא גם בחירה מצוינת עבור זמן לשגות כרוני בתחום הדמית vivo. איור 3 מציג מכתים GFAP של חלקים בקליפת מוח מעכבר ללא ניתוח יציאות, עכבר 7 ימים לאחר ניתוח יציאות, ועכבר 7 ימים לאחר ניתוח ויציאות הזרקת תמיסת מלח. זה ברור מהתמונות שהעכבר ללא ניתוח והעכבר עם porניתוח TS אין לי דבק, ואילו לאחר הזרקה מי מלח, דבק נצפה ברקמת המוח של העכבר, בשל פיפטה חדירה וזריקה של תמיסת מלח במוח. תוצאה זו מדגימה דבקה שאינה מתרחשת מתחת לחלון גולגולתי היציאות, מתן אימות עצמאית שיציאות חלון גולגולתי שתואר כאן אינן מובילה לדבקות שמזוהה בדרך כלל עם &quot;גולגולת פתוחה&quot; חלון גולגולתי כרוני. איור 4 מראה ברזולוציה גבוהה הדמיה של קוצים הדנדריטים מאותה העכבר ביום של ניתוח (יום 0) ו 32 ימים לאחר יצירת חלון היציאות (יום 32), הוכחה כי חלון היציאות הוא גם בחירה מצוינת עבור רזולוציה גבוהה in vivo ההדמיה. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig1.jpg" /> איור 1. יזואליזציה של כלי דם מתחת לחלון מלוטש ומחוזק דלל גולגולת גולגולת באמצעות אור backscattered. ימים לא מייצגים<html> הוא מספר הימים לאחר ניתוח; תמונות צולם החל מיום הניתוח באופן מיידי לאחר השלים הזרקת תאי GBM. בר סולם:. 0.5 מ&quot;מ <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig1large.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig2.jpg" /> איור 2. ויזואליזציה של תאים מוזרקים GBM ומערכת כלי דם בגוף חי. עכברים שנשאו הן Tek-Cre וROSA26 CAG-tdTomato שמשו להזרקת תאי GBM. תאי אנדותל כלי דם תויגו עם tdTomato (אדום), ותאי GBM תויגו עם GFP (ירוק). תמונות נרכשו החל 24 שעות לאחר הזרקת תאי GBM. סכום כולל של 10-12 שדות סמוכים של נוף נלקחו ונאספו סמוך זה לזה, עם תאי GBM הזריקו זוהו במרכז השדה הכולל, כדי לייצר את התמונות הסופיות. ימים מייצגים את מספר הימים לאחר ניתוח. סרגל קנה מידה: 100 מיקרומטר.href = &quot;http://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig2large.jpg&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig3.jpg" /> איור 3. דבק אינו מתרחש לאחר ניתוח חלון יציאות גולגולת. פנלים עליונים: סעיף עטרת עכבר מוח בהגדלה נמוכה. פנל שמאלי: עכבר ללא כל ניתוח חלון גולגולתי; אין הפעלת GFAP נצפה ברקמת המוח. פנל תיכון: עכבר עם חלון גולגולתי יציאות שנוצרו בצד הימני של המוח, אף הפעלת GFAP נצפה ברקמת המוח. לוח ימני: עכבר עם חלון יציאות גולגולת והזרקה מי מלח מהצד של חלון היציאות. הפעלת GFAP הוא ציין בצד של חלון היציאות, אבל לא בצד של רקמת מוח השלמה. סרגל קנה מידה: 1 מ&quot;מ. פנל תחתון: תמונות גבוה יותר כוח של רקמות מוח באזורים שהוזכרו בקופסה הלבנה של תמונות העליונות בלוח. סרגל קנה מידה: 100 מיקרומטר. <ahref = &quot;http://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig3large.jpg&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig4.jpg" /> איור 4. הדמיה של קוצים הדנדריטים מ- 1 עכברי YFPH ברזולוציה גבוהה. תמונות נרכשו ביום ניתוח יציאות, ו32 ימים לאחר ניתוח יציאות. ניכר מהתמונות שרוב הקוצים מציגים ביום 0 הם 32 ימים לאחר ניתוח נראים בבירור יציאות. סרגל קנה מידה: 2 מיקרומטר.

<ol>
	<li>Paulino, A. C., Teh, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+brain+tumors.">Treatment of brain tumors.</a> N. Engl. J. Med. 352, 2350-2353 (2005).</li><li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> N. Engl. J. Med. 352, 987-996 (2005).</li><li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells.">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432, 396-401 (2004).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li><li>Cheng, L., Bao, S., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+therapeutic+implications+of+cancer+stem+cells+in+glioblastoma.">Potential therapeutic implications of cancer stem cells in glioblastoma.</a> Biochem. Pharmacol. 80, 654-665 (2010).</li><li>Cheng, L., Ramesh, A. V., Flesken-Nikitin, A., Choi, J., Nikitin, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+cancer+stem+cell+research.">Mouse models for cancer stem cell research.</a> Toxicol. Pathol. 38, 62-71 (2010).</li><li>Dirks, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumor+stem+cells:+the+cancer+stem+cell+hypothesis+writ+large.">Brain tumor stem cells: the cancer stem cell hypothesis writ large.</a> Mol. Oncol. 4, 420-430 (2010).</li><li>Ebben, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cancer+stem+cell+paradigm:+a+new+understanding+of+tumor+development+and+treatment.">The cancer stem cell paradigm: a new understanding of tumor development and treatment.</a> Expert Opin. Ther. Targets. 14, 621-632 (2010).</li><li>Germano, I., Swiss, V., Casaccia, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+brain+tumors,+neural+stem+cell,+and+brain+tumor+cancer+cells:+where+is+the+link.">Primary brain tumors, neural stem cell, and brain tumor cancer cells: where is the link.</a> Neuropharmacology. 58, 903-910 (2010).</li><li>Park, D. M., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+glioma+cancer+stem+cells.">Biology of glioma cancer stem cells.</a> Mol. Cells. 28, 7-12 (2009).</li><li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-like+glioma+cells+promote+tumor+angiogenesis+through+vascular+endothelial+growth+factor.">Stem cell-like glioma cells promote tumor angiogenesis through vascular endothelial growth factor.</a> Cancer Res. 66, 7843-7848 (2006).</li><li>Calabrese, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perivascular+niche+for+brain+tumor+stem+cells.">A perivascular niche for brain tumor stem cells.</a> Cancer Cell. 11, 69-82 (2007).</li><li>Barami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+neural+stem+cells+with+their+vascular+niche:+implications+in+the+malignant+progression+of+gliomas.">Relationship of neural stem cells with their vascular niche: implications in the malignant progression of gliomas.</a> J. Clin. Neurosci. 15, 1193-1197 (2008).</li><li>Gilbertson, R. J., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+a+tumour's+bed:+glioblastoma+stem+cells+and+the+vascular+niche.">Making a tumour's bed: glioblastoma stem cells and the vascular niche.</a> Nat. Rev. Cancer. 7, 733-736 (2007).</li><li>Cho, R. W., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+cancer+stem+cells.">Recent advances in cancer stem cells.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 18, 48-53 (2008).</li><li>Drew, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+optical+access+through+a+polished+and+reinforced+thinned+skull.">Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull.</a> Nat. Methods. 7, 981-984 (2010).</li></ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

המפתח לחלון גולגולתי מוצלח יציאות הוא דליל וליטוש. אמנם דליל הראשוני יכול להתבצע במהירות, יש להקפיד על מנת להבטיח הומוגנית הדילול של הגולגולת על פני שטח גדול. אנחנו בדרך כלל למרוח שכבה דקה של מלח לגולגולת, ולאחר מכן לעבור גולגולת דקה אחת בכל פעם, כך שתמיסת המלח מתאדה ז...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> DMEM/F12 (1:1) עם פירובט נתרן </td><td> Thermo Sci Hyclone </td><td> SH3026101 </td><td></td></tr><tr><td> B-27 תוסף חינם סרום (50x) </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td><td></td></tr><tr><td> GlutaMax-1 מוסף </td><td> Invitrogen </td><td> 35050061 </td><td></td></tr><tr><td> פתרון לפניצילין סטרפטומיצין </td><td> Thermo Sci Hyclone </td><td> SV30010 </td><td></td></tr><tr><td> בינוני ניתוק תא Accutase אנזים </td><td> eBiosciences </td><td> 00-4555-56 </td><td></td></tr><tr><td> T25 צלוחיות-אוורור כובע ירוק </td><td> Sarstedt </td><td> 83.1810.502 </td><td></td></tr><tr><td> 70% אלכוהול </td><td> LAHS JAX </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10% povidone-יוד פתרון מקומי </td><td> LAHS JAX </td><td></td><td></td></tr><tr><td> קטמין הידרוכלוריד </td><td> אספקת לבריאות בעלי החיים באטלר </td><td> NDC # 11695-0550-1 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> Akorn, Inc </td><td> נדא # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> Carprofen </td><td> LAHS JAX </td><td></td><td></td></tr><tr><td> משחה לרפואת עיניים </td><td> מוצרי Dechra הווטרינריים </td><td> 17033-211-38 </td><td></td></tr><tr><td> 0.5% לידוקאין הידרוכלוריד </td><td> ריג&#39;נט, Inc </td><td> NDC 0517-0625-25 </td><td></td></tr><tr><td> דבק cyanoacrylate </td><td> הנקל קורפ </td><td> 46551 </td><td></td></tr><tr><td> מטליות סטריליות </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 23-400-114 </td><td></td></tr><tr><td> להדביק יהלומים </td><td> אספקת יישומון </td><td> BBE60 </td><td></td></tr><tr><td> תחמוצת בדיל </td><td> LORTONE, Inc </td><td> 591-038 </td><td></td></tr><tr><td> ליינר ונד 2V </td><td> Kuraray רפואי בע&quot;מ </td><td> 1921-KA </td><td></td></tr><tr><td> Clearfil AP-X </td><td> Kuraray רפואי בע&quot;מ </td><td> 1721-KA </td><td></td></tr><tr><td> מלוח </td><td> LAHS JAX </td><td></td><td></td></tr><tr><td> כיסוי זכוכית </td><td> וורנר מכשירים </td><td> 64-0720 </td><td></td></tr><tr><td> אגוזי Hex </td><td> חלקים קטנים, Inc </td><td> HNX-0090-C </td><td></td></tr><tr><td> משאבת מזרק </td><td> Syringepump.com </td><td> NE-1000 </td><td></td></tr><tr><td> מערכת ההדמיה שני פוטונים </td><td> מובנה מותאם אישית (כל מערכת המסחרית הייתעבודה) </td><td></td><td></td></tr></table>

imaging glioma initiation in vivo through a polished and reinforced thin-skull cranial window

Glioma הוא אחת הצורות הקטלניות ביותר של הסרטן אנושי. הטיפול היעיל ביותר לגליומה מועד ניתוח ואחריו קרינת הטיפול מציע למטופלים רק יתרונות צנועים, כמו רוב החולים אינם שורד יותר מחמש שנים לאחר אבחון בשל 1,2 ההישנות גליומה. הגילוי של תאי גזע סרטני בגידולים במוח אדם טומן בחובו הבטחה לבעל השפעה עצומה על פיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשניות לגליומה 3. תאי גזע סרטני מוגדרים על ידי היכולת שלהם הוא לעצמי לחדש ולבדל, ונחשבים לתאים היחידים בגידול שיש להם את היכולת ליזום גידולים חדשים 4. ההקרנות הבאות glioma ההישנות היא חשבה שהוא נובע מהתנגדות של תאי גזע glioma (GSCs) לטיפול 5-10. בחי, GSCs מוצגים להתגורר בנישת perivascular שהיא חשוב לשמירה על מאפייני גזעם תאים כמו 11-14 . מרכז לאורגניאספקת מפעלי של נישת GSC הן תאי אנדותל כלי דם 12. ראיות מצביעות על כך שקיימים GSCs והאינטראקציה שלהם עם תאי אנדותל כלי הדם חשובים להתפתחות גידולים, ולזהות GSCs והאינטראקציה שלהם עם תאי האנדותל כמטרות טיפוליות חשובות עבור גליומה. הנוכחות של GSCs נקבעה באופן ניסיוני על ידי היכולת שלהם ליזום גידולים חדשים על 15 השתלת orthotopic. זו מושגת בדרך כלל על ידי הזרקת מספר מסוים של תאי GBM שבודדו מגידולים אנושיים לתוך מוחם של עכברים קשות חיסוניים לקויים, או של תאי GBM עכבר למוחם של עכברים מארחים congenic. מבחנים לצמיחת גידול לאחר מכן, בוצעו לאחר זמן מספיק כדי לאפשר GSCs בין תאי GBM הזריקו להצמיח גידולים-בדרך כלל כמה שבועות או חודשים חדשים. לפיכך, מבחנים קיימים אינם מאפשרים בחינה של התהליך הפתולוגי החשוב של חניכת גידול מGSCs הבודד in vivo. כתוצאה מכך, החיוניnsights לתפקידים הספציפיים של GSCs והאינטראקציה שלהם עם תאי אנדותל כלי דם בשלבים המוקדמים של ייזום גידול חסר. תובנה אלה הן קריטיות לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשניות לגליומה, ותהיינה לה השלכות רבות למניעת הישנות גליומה בחולים. כאן יש להתאים את יציאות הליך חלון גולגולתי 16 ו in vivo שני הפוטונים מיקרוסקופיה כדי לאפשר הדמיה של חניכה מתאי גידול GBM הזריקו במוח של עכבר חי. הטכניקה שלנו תסלול את הדרך למאמצים עתידיים על מנת להבהיר את מנגנוני האיתות העיקריים בין GSCs ותאי אנדותל כלי דם במהלך חניכת גליומה.

Watch this Scientific Journal Video about Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window at JoVE.com

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

על ידי שילוב של-גולגולת דקה מלוטשת ומחוזקת (יציאות) גולגולתי חלון והזרקת גליובלסטומה (GBM) תא, אנו יכולים לצפות בייזום וצמיחה מתאים מוזרקים GBM במוח של עכבר חי longitudinally גליומה.

הדמית Glioma ייזום<em&gt; In Vivo</em&gt; דרך חלון גולגולתי מלוטש ומחוזק-גולגולת דקה

Glioma is the one of the most lethal forms of human cancer. The most effective glioma therapy to date-surgery followed by radiation treatment-offers ...

imaging-glioma-initiation-vivo-through-polished-reinforced-thin-skull

Research

JoVE Journal

Medicine

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

13.0K Views.  The Jackson Laboratory. על ידי שילוב של-גולגולת דקה מלוטשת ומחוזקת (יציאות) גולגולתי חלון והזרקת גליובלסטומה (GBM) תא, אנו יכולים לצפות בייזום וצמיחה מתאים מוזרקים GBM במוח של עכבר חי longitudinally גליומה.

Video: Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

In vivo Near Infrared Fluorescence (NIRF) Intravascular Molecular Imaging of Inflammatory Plaque, a Multimodal Approach to Imaging of Atherosclerosis

The vascular response to injury is a well-orchestrated inflammatory response triggered by the accumulation of macrophages within the vessel wall leading to an accumulation of lipid-laden intra-luminal plaque, smooth muscle cell proliferation and progressive narrowing of the vessel lumen. The formation of such vulnerable plaques prone to rupture underlies the majority of cases of acute myocardial infarction. The complex molecular and cellular inflammatory cascade is orchestrated by the recruitment of T lymphocytes and macrophages and their paracrine effects on endothelial and smooth muscle cells.1
Molecular imaging in atherosclerosis has evolved into an important clinical and research tool that allows in vivo visualization of inflammation and other biological processes. Several recent examples demonstrate the ability to detect high-risk plaques in patients, and assess the effects of pharmacotherapeutics in atherosclerosis.4 While a number of molecular imaging approaches (in particular MRI and PET) can image biological aspects of large vessels such as the carotid arteries, scant options exist for imaging of coronary arteries.2 The advent of high-resolution optical imaging strategies, in particular near-infrared fluorescence (NIRF), coupled with activatable fluorescent probes, have enhanced sensitivity and led to the development of new intravascular strategies to improve biological imaging of human coronary atherosclerosis.
Near infrared fluorescence (NIRF) molecular imaging utilizes excitation light with a defined band width (650-900 nm) as a source of photons that, when delivered to an optical contrast agent or fluorescent probe, emits fluorescence in the NIR window that can be detected using an appropriate emission filter and a high sensitivity charge-coupled camera. As opposed to visible light, NIR light penetrates deeply into tissue, is markedly less attenuated by endogenous photon absorbers such as hemoglobin, lipid and water, and enables high target-to-background ratios due to reduced autofluorescence in the NIR window. Imaging within the NIR 'window' can substantially improve the potential for in vivo imaging.2,5
Inflammatory cysteine proteases have been well studied using activatable NIRF probes10, and play important roles in atherogenesis. Via degradation of the extracellular matrix, cysteine proteases contribute importantly to the progression and complications of atherosclerosis8. In particular, the cysteine protease, cathepsin B, is highly expressed and colocalizes with macrophages in experimental murine, rabbit, and human atheromata.3,6,7 In addition, cathepsin B activity in plaques can be sensed in vivo utilizing a previously described 1-D intravascular near-infrared fluorescence technology6, in conjunction with an injectable nanosensor agent that consists of a poly-lysine polymer backbone derivatized with multiple NIR fluorochromes (VM110/Prosense750, ex/em 750/780nm, VisEn Medical, Woburn, MA) that results in strong intramolecular quenching at baseline.10 Following targeted enzymatic cleavage by cysteine proteases such as cathepsin B (known to colocalize with plaque macrophages), the fluorochromes separate, resulting in substantial amplification of the NIRF signal. Intravascular detection of NIR fluorescence signal by the utilized novel 2D intravascular NIRF catheter now enables high-resolution, geometrically accurate in vivo detection of cathepsin B activity in inflamed plaque.
In vivo molecular imaging of atherosclerosis using catheter-based 2D NIRF imaging, as opposed to a prior 1-D spectroscopic approach,6 is a novel and promising tool that utilizes augmented protease activity in macrophage-rich plaque to detect vascular inflammation.11,12 The following research protocol describes the use of an intravascular 2-dimensional NIRF catheter to image and characterize plaque structure utilizing key aspects of plaque biology. It is a translatable platform that when integrated with existing clinical imaging technologies including angiography and intravascular ultrasound (IVUS), offers a unique and novel integrated multimodal molecular imaging technique that distinguishes inflammatory atheromata, and allows detection of intravascular NIRF signals in human-sized coronary arteries.

In vivo Near Infrared Fluorescence NIRF Intravascular Molecular Imaging of Inflammatory Plaque, a Multimodal Approach to Imaging of Atherosclerosis

We detail a new near-infrared fluorescence (NIRF) catheter for 2-dimensional intravascular molecular imaging of plaque biology in vivo. The NIRF catheter can visualize key biological processes such as inflammation by reporting on the presence of plaque-avid activatable and targeted NIR fluorochromes. The catheter utilizes clinical engineering and power requirements and is targeted for application in human coronary arteries. The following research study describes a multimodal imaging strategy that utilizes a novel in vivo intravascular NIRF catheter to image and quantify inflammatory plaque in proteolytically active inflamed rabbit atheromata.

בשנת vivo קרוב אינפרא אדום דימות פלואורסצנטי intravascular (NIRF) מולקולרית של רובד דלקתיות, גישה multimodal כדי הדמיה של טרשת עורקים

The vascular response to injury is a well-orchestrated inflammatory response triggered by the accumulation of macrophages within the vessel wall leading ...

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate since the advent of in vivo bioluminescent imaging technologies 1-3. Indeed, the ability to locate and quantify tumor growth longitudinally in a single cohort of animals to completion of the study as opposed to sacrificing individual groups of animals at specific assay times has revolutionized how researchers investigate breast cancer metastasis. Unfortunately, current methodologies preclude the real-time assessment of critical changes that transpire in cell signaling systems as breast cancer cells (i) evolve within primary tumors, (ii) disseminate throughout the body, and (iii) reinitiate proliferative programs at sites of a metastatic lesion. However, recent advancements in bioluminescent imaging now make it possible to simultaneously quantify specific spatiotemporal changes in gene expression as a function of tumor development and metastatic progression via the use of dual substrate luminescence reactions. To do so, researchers take advantage for two light-producing luciferase enzymes isolated from the firefly (Photinus pyralis) and sea pansy (Renilla reniformis), both of which react to mutually exclusive substrates that previously facilitated their wide-spread use in in vitro cell-based reporter gene assays 4. Here we demonstrate the in vivo utility of these two enzymes such that one luminescence reaction specifically marks the size and location of a developing tumor, while the second luminescent reaction serves as a means to visualize the activation status of specific signaling systems during distinct stages of tumor and metastasis development. Thus, the objectives of this study are two-fold. First, we will describe the steps necessary to construct dual bioluminescent reporter cell lines, as well as those needed to facilitate their use in visualizing the spatiotemporal regulation of gene expression during specific steps of the metastatic cascade. Using the 4T1 model of breast cancer metastasis, we show that the in vivo activity of a synthetic Smad Binding Element (SBE) promoter was decreased dramatically in pulmonary metastasis as compared to that measured in the primary tumor 4-6. Recently, breast cancer metastasis was shown to be regulated by changes within the primary tumor microenvironment and reactive stroma, including those occurring in fibroblasts and infiltrating immune cells 7-9. Thus, our second objective will be to demonstrate the utility of dual bioluminescent techniques in monitoring the growth and localization of two unique cell populations harbored within a single animal during breast cancer growth and metastasis.

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

Herein we describe the methods to construct, visualize, and quantify the bioluminescent reactions of both firefly and renilla luciferase enzymes expressed in metastatic breast cancer cells during their growth and metastasis in vivo.

במצע כפולה vivo bioluminescent ההדמיה

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

ניצול חלון גולגולת לדמיין עורק המוח האמצעי במהלך ספיג אנדותלין-1 מושרה מזרח מוחות עורקים

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

3D-Neuronavigation In Vivo Through a Patient's Brain During a Spontaneous Migraine Headache

A growing body of research, generated primarily from MRI-based studies, shows that migraine appears to occur, and possibly endure, due to the alteration of specific neural processes in the central nervous system. However, information is lacking on the molecular impact of these changes, especially on the endogenous opioid system during migraine headaches, and neuronavigation through these changes has never been done. This study aimed to investigate, using a novel 3D immersive and interactive neuronavigation (3D-IIN) approach, the endogenous &#181;-opioid transmission in the brain during a migraine headache attack in vivo. This is arguably one of the most central neuromechanisms associated with pain regulation, affecting multiple elements of the pain experience and analgesia. A 36 year-old female, who has been suffering with migraine for 10 years, was scanned in the typical headache (ictal) and nonheadache (interictal) migraine phases using Positron Emission Tomography (PET) with the selective radiotracer [11C]carfentanil, which allowed us to measure &#181;-opioid receptor availability in the brain (non-displaceable binding potential - &#181;OR BPND). The short-life radiotracer was produced by a cyclotron and chemical synthesis apparatus on campus located in close proximity to the imaging facility. Both PET scans, interictal and ictal, were scheduled during separate mid-late follicular phases of the patient's menstrual cycle. During the ictal PET session her spontaneous headache attack reached severe intensity levels; progressing to nausea and vomiting at the end of the scan session. There were reductions in &#181;OR BPND in the pain-modulatory regions of the endogenous &#181;-opioid system during the ictal phase, including the cingulate cortex, nucleus accumbens (NAcc), thalamus (Thal), and periaqueductal gray matter (PAG); indicating that &#181;ORs were already occupied by endogenous opioids released in response to the ongoing pain. To our knowledge, this is the first time that changes in &#181;OR BPND during a migraine headache attack have been neuronavigated using a novel 3D approach. This method allows for interactive research and educational exploration of a migraine attack in an actual patient's neuroimaging dataset.

3D-Neuronavigation In Vivo Through a Patient&#039;s Brain During a Spontaneous Migraine Headache

In this study, the authors report for the first time a novel 3D-Immersive &#38; Interactive Neuronavigation (3D-IIN) through the impact of a spontaneous migraine headache attack in the &#956;-opioid system of a patient's brain in vivo.

3D-Neuronavigation<em&gt; בVivo</em&gt; דרך המוח של חולה במהלך מיגרנה ספונטנית

A growing body of research, generated primarily from MRI-based studies, shows that migraine appears to occur, and possibly endure, due to the alteration ...

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in vivo demonstration of such cells has only recently been attained. Here, in vivo imaging techniques to investigate the role of endogenous osteogenic stem/progenitor cells (OSPCs) and their progeny in bone repair are provided. Using osteo-lineage cell tracing models and intravital imaging of induced microfractures in calvarial bone, OSPCs can be directly observed during the first few days after injury, in which critical events in the early repair process occur. Injury sites can be sequentially imaged revealing that OSPCs relocate to the injury, increase in number and differentiate into bone forming osteoblasts. These methods offer a means of investigating the role of stem cell-intrinsic and extrinsic molecular regulators for bone regeneration and repair.

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Quantitative measurement of bone progenitor function in fracture healing requires high resolution serial imaging technology. Here, protocols are provided for using intravital microscopy and osteo-lineage tracking to sequentially image and quantify the migration, proliferation and differentiation of endogenous osteogenic stem/progenitor cells in the process of repairing bone fracture.

עוקב<em&gt; בvivo</em&gt; הדמיה של תאי גזע / אב osteogenic במהלך תיקון שבר

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in ...

Combined In vivo Optical and &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in vivo optical and &#956;CT imaging allow the visualization of biological phenomena in an anatomical context. These imaging modalities may be especially useful to study conditions that impact bone. In particular, orthopaedic implant infections are an important problem in clinical orthopaedic surgery. These infections are difficult to treat because bacterial biofilms form on the foreign surgically implanted materials, leading to persistent inflammation, osteomyelitis and eventual osteolysis of the bone surrounding the implant, which ultimately results in implant loosening and failure. Here, a mouse model of an infected orthopaedic prosthetic implant was used that involved the surgical placement of a Kirschner-wire implant into an intramedullary canal in the femur in such a way that the end of the implant extended into the knee joint. In this model, LysEGFP mice, a mouse strain that has EGFP-fluorescent neutrophils, were employed in conjunction with a bioluminescent Staphylococcus aureus strain, which naturally emits light. The bacteria were inoculated into the knee joints of the mice prior to closing the surgical site. In vivo bioluminescent and fluorescent imaging was used to quantify the bacterial burden and neutrophil inflammatory response, respectively. In addition, &#956;CT imaging was performed on the same mice so that the 3D location of the bioluminescent and fluorescent optical signals could be co-registered with the anatomical &#956;CT images. To quantify the changes in the bone over time, the outer bone volume of the distal femurs were measured at specific time points using a semi-automated contour based segmentation process. Taken together, the combination of in vivo bioluminescent/fluorescent imaging with &#956;CT imaging may be especially useful for the noninvasive monitoring of the infection, inflammatory response and anatomical changes in bone over time.

Combined In vivo Optical and  &amp;#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Combined optical and &#956;CT imaging in a mouse model of orthopaedic implant infection, utilizing a bioluminescent engineered strain of Staphylococcus aureus, provided the capability to noninvasively and longitudinally monitor the dynamics of the bacterial infection, as well as the corresponding inflammatory response and anatomical changes in the bone.

בשילוב<em&gt; בvivo</em&gt; אופטי וμCT הדמיה למעקב אחר זיהום, דלקת, ועצם אנטומיה בזיהום אורטופדיים שתל בעכברים

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in ...

State of the Art Cranial Ultrasound Imaging in Neonates

Cranial ultrasound (CUS) is a reputable tool for brain imaging in critically ill neonates. It is safe, relatively cheap and easy to use, even when a patient is unstable. In addition it is radiation-free and allows serial imaging. CUS possibilities have steadily expanded. However, in many neonatal intensive care units, these possibilities are not optimally used. We present a comprehensive approach for neonatal CUS, focusing on optimal settings, different probes, multiple acoustic windows and Doppler techniques. This approach is suited for both routine clinical practice and research purposes. In a live demonstration, we show how this technique is performed in the neonatal intensive care unit. Using optimal settings and probes allows for better imaging quality and improves the diagnostic value of CUS in experienced hands. Traditionally, images are obtained through the anterior fontanel. Use of supplemental acoustic windows (lambdoid, mastoid, and lateral fontanels) improves detection of brain injury. Adding Doppler studies allows screening of patency of large intracranial arteries and veins. Flow velocities and indices can be obtained. Doppler CUS offers the possibility of detecting cerebral sinovenous thrombosis at an early stage, creating a window for therapeutic intervention prior to thrombosis-induced tissue damage. Equipment, data storage and safety aspects are also addressed.

Cranial ultrasound (CUS) is a valuable tool for brain imaging in critically ill neonates. This video shows a comprehensive approach for neonatal (Doppler) CUS for both clinical and research purposes, including a bedside demonstration of the technique.

מדינת אולטראסאונד ההדמיה אמנות הגולגולת בילודים

Cranial ultrasound (CUS) is a reputable tool for brain imaging in critically ill neonates. It is safe, relatively cheap and easy to use, even when a ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. Despite the discovery of key regulators of uterine contractility, this process is still not fully understood. Transgenic mice provide an ideal model in which to study parturition. Previously, the only method to study uterine contractility in the mouse was ex vivo isometric tension recordings, which are suboptimal for several reasons. The uterus must be removed from its physiological environment, a limited time course of investigation is possible, and the mice must be sacrificed. The recent development of radiometric telemetry has allowed for longitudinal, real-time measurements of in vivo intrauterine pressure in mice. Here, the implantation of an intrauterine telemeter to measure pressure changes in the mouse uterus from mid-pregnancy until delivery is described. By comparing differences in pressures between wild type and transgenic mice, the physiological impact of a gene of interest can be elucidated. This technique should expedite the development of therapeutics used to treat myometrial disorders during pregnancy, including preterm labor.

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

טלמטריה תוך רחמי למדידת לחץ עכבר התכווצות<em&gt; In vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

Recent advances in the application of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSC) for the treatment of tendon and ligament injuries in the horse suggest improved outcome measures in both experimental and clinical studies. Although the BMMSC are implanted into the tendon lesion in large numbers (usually 10 - 20 million cells), only a relatively small number survive (&#60;10%) although these can persist for up to 5 months after implantation. This appears to be a common observation in other species where BMMSC have been implanted into other tissues and it is important to understand when this loss occurs, how many survive the initial implantation process and whether the cells are cleared into other organs. Tracking the fate of the cells can be achieved by radiolabeling the BMMSC prior to implantation which allows non-invasive in vivo imaging of cell location and quantification of cell numbers.
This protocol describes a cell labeling procedure that uses Technetium-99m (Tc-99m), and tracking of these cells following implantation into injured flexor tendons in horses. Tc-99m is a short-lived (t1/2 of 6.01 hr) isotope that emits gamma rays and can be internalized by cells in the presence of the lipophilic compound hexamethylpropyleneamine oxime (HMPAO). These properties make it ideal for use in nuclear medicine clinics for the diagnosis of many different diseases. The fate of the labeled cells can be followed in the short term (up to 36 hr) by gamma scintigraphy to quantify both the number of cells retained in the lesion and distribution of the cells into lungs, thyroid and other organs. This technique is adapted from the labeling of blood leukocytes and could be utilized to image implanted BMMSC in other organs.

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

This protocol describes the radiolabeling of equine mesenchymal stem cells and their implantation into tendon injuries in the horse in order to determine cell survival and tissue distribution using gamma scintigraphy.

In vivo ההדמיה ומעקב של טכנציום-99m תווית תאי גזע מח העצם mesenchymal בסוסי Tendinopathy

Recent advances in the application of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSC) for the treatment of tendon and ligament injuries in the horse suggest ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

חסך בתאי עכבר מן xenografts גידול האנושי משפר משמעותי ניתוח במורד זרם של תאי יעד

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...