תודה לאלנה Mitsi (עוזר מחקר) והאב קרול הנקוק (אחות מחקר) וצוות תיאטרון על תרומתם לצילומים, ולדיוויד שו (אחות מחקר) על תמיכתו בbronchoscopies המחקר שלנו. תודה גם למתנדבים שלנו רבקה דאנפי למאפשר הליך זה אמור להיות מצולם.

1. הנושאים הם נפגשו בהגעה על ידי אחות הנשימה המחקר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנושא כבר בצום ל&gt; 4 שעות לאוכל מוצק ושעה 2 לנוזלים צלולים 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההליך מבוצע כמקרה יום עם בדיקות מתאימות לפני ואחרי הליך (בהתאם למדיניות בית חולים סטנדרטית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנושא לובש חלוק בית חולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינורית מד קטנה מוכנסת (באופן אידיאלי לתוך יד שמאל) ונותרה באתרם עד תום תקופת ההחלמה שלאחר הליך 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תצפיות Preprocedure נלקחות (לחץ דם, קצב לב, saturations חמצן [פסיכומטרי]). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנושא הועבר לסוויטה ברונכוסקופיה. </li></ol> 2. נושא מוכן לנוהל בסוויטה על ידי מחקר המטפל נשימה מנוסה ברונכוסקופיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציוד ניטור מצורף כולל; 3 להוביל א.ק.ג., דופק oximeter 1,10 ומד לחץ דם. Anesthetתמיכת ic אין צורך לרבות כתב הסכמה מדעת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חמצן עלול להיות מועבר באמצעות צינורית באף במהירות של עד 4 ליטר / דקה, כדי להשיג פסיכומטריים&gt; 90% 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המפעיל בודק את bronchoscope, זה כולל הבטחת יניקה יעילה על ידי aspirating מלח רגיל סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה מקומית עם לידוקאין מושגת במעברי האף (באמצעות 1 Instillagel) ורירית הפה (באמצעות xylocaine) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הרגעה היא ראויה ומתבקש על ידי הנושא, midazolam תוך ורידי מנוהל 1. סוכן מתאים היפוך (flumazenil) הוא זמין באופן מיידי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציוד החייאה צריך להיות זמין 1,10 בקלות. </li></ol> 3. Bronchoscope מוכנס ואת מיקומו <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינטובציה היא בדרך כלל דרך האף. אם זה לא אפשרי בשל פוליפים באף, turbinates המודלק, או כל חוסר נוחות ואז הנושא הוא מחובר לצינורות דרך הפה (פה משמר משמש למניעהנזק להיקף או שיניו של הנושא). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה מקומית בגרון הושלמה באמצעות ידוקאין 4%, בדרך כלל סך של 4-6 מיליליטר משמש. בדרך כלל זה גורם לשיעול על החדרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיתרי הקול הם עברו, והרדמה ברירית נוספת באמצעות 2 מיליליטר aliquots של לידוקאין 2% בקארינה, בחלוקה של האונה הימנית התחתונה (RLL) ואונה ימנית באמצע (RML) ובכניסה RML. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Bronchoscope ממוקם בתוך RML, באופן אידיאלי במגזר המדיאלי, במצב שבו הוא דיסטלי מספיק כדי להיות בעמדה בטוחה אבל לא יותר דיסטלי, כך שדרכי הנשימה מתמוטטת כאשר יניקה מוחלת (&quot;מבחן קריצה &#39;באמצעות הלחצן השאיבה ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיצוב טוב מצויינים במהלך בדיקת הקריצה ידי bronchoscope שאפשר לקיים באופן מלא בעמדה ידי bronchoscopist ודרך נשימה שלא נסגרו במלואו באופן מיידי על שאיבה עדינה. </li></ol> 4. BAL מתבצע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ארבעה 60 מיליליטר מזרקים הם מראשמלא מלוח חיממו רגיל - 60 מיליליטר, 50 מיליליטר, 50 מיליליטר, ו40 מיליליטר במזרקים רצופים. כאשר הנושא וbronchoscopist מוכנים המזרק הראשון של מי מלח הוא החדיר ידי עוזר רונכוסקופיה תוך bronchoscopist שומר על העמדה בRML. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יד שאיבה עדינה מתבצעת לאחר מכן על ידי עוזרו משתמש באותו נמל ו50 מזרק מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הליך זה ולאחר מכן חזר 3x נוסף, עם נפח מקסימאלי של 200 מיליליטר בשימוש בטכניקה הספציפית שלנו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נוזל BAL לאחזר מסולק בעדינות לתוך מכולות שכותרתו כבר החזיקו בקרח נמס. מיכלי זכוכית ניתן presiliconized כדי לעכב מצורף תא ולמקסם את החזר תא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נוזל BAL מופיע מעורפל כנגד האור עם בועות סבון משטח שהוקמו על ידי פעילי שטח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Bronchoscope יבוטל באופן מלא באיטיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נוזל BAL מועבר ללא דיחוי על קרח לעיבוד מיידי. </li></ol> 5. שחזור נושא </p&gt; <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנושא הוא התאושש ל2-4 שעות על ידי אחות מחקר בדרכי הנשימה במחלקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך תקופה זו מותר להם לנוח ואז רק לאכול ולשתות&gt; 60 1 דקות לאחר ההליך (כאשר סנוניתם מוערכת כבטוח), במטרה להפחית את הסיכון לשאיפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תצפיות הודעה פרוצדורליים מנוטרות ומתועד. בדיקה קלינית מתרחשת לפני השחרור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנושא הוא תדרך predischarge על תופעות הלוואי הנפוצות (חום, אי נוחות בחזה קלה תקין submammary, כאבי גרון) ונתן מספר טלפון במקרה תופעות לוואי משמעותי להתרחש 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנושא הוא במעקב ב1-5 ימים שלאחר הליך עם איש קשר קליני. זה יכול להיות גם בטלפון או באופן אישי. </li></ol> 6. תאים מבודדים במעבדה - ביצוע בקרח נמס במידת האפשר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנפח של נוזל BAL נרשם ומסונן דרך שכבה כפולה של ספוגית גזה סטריליתכדי להסיר תקעי ריר לprechilled צינורות 50 צנטריפוגות מיליליטר סטרילי,. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאי pelleted על ידי צנטריפוגה ב XG 500 ב-C ° 4 ל5-10 דק ונשטפו על ידי vortexing ב50 מיליליטר מלח רגיל קר. צנטריפוגה חוזרת על עצמו פעם אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים הם resuspended במדיום התרבות (RPMI-1640 +10% בסרום שור עוברי + 2 מ&quot;מ L-גלוטמין + פניצילין [40 IU / מיליליטר], סטרפטומיצין [75 IU / מיליליטר], וamphotericin B [0.5 IU / מיליליטר]) ו ספירת ההפרש בוצע באמצעות נפח שווה של trypan הכחול וhemocytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההשעיה התא היא מנורמלת לצפיפות הנדרשת (אנחנו משתמשים 1 x 10 6 תאים / מיליליטר), הוצג על ידי pipetting לתוך צלחות תרבית הרקמה מתאימות, וטופחו על 37 מעלות צלזיוס במשך 3 שעות על מנת לאפשר עמידת מקרופאג. 1 מיליליטר של השעיה תא זה לכל גם הוא מתאים לתרבות צלחות 24 גם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבודה לימפוציטים, אחרי 3 שעות של דגירה, התרבות בינונית בעדינות pipetted למעלה ולמטה 3x, ושנאסף. מדיום זה מכיל לימפוציטיםומקרופאגים nonadherent וניתן להשתמש כדי להעריך את תפקוד הלימפוציטים, זה גם עשוי לשמש בשלבים לטיהור למשל עם חרוזים מגנטיים CD14 להסיר מקרופאגים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבודת מקרופאג, אחרי 3 שעות של דגירה, המדיום הוא הסיר בזהירות עם pipetting המינימלי והוחלף במדיום טרי, חם ללא אנטיביוטיקה (RPMI 1640 +10% שור עוברי בסרום + 2 L-גלוטמין מ&quot;מ). מקרופאגים הם חסיד לצלחת תרבית רקמה (ראה איור 1). </li></ol>

<ol>
	<li>BTS, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+British+Thoracic+Society+Bronchoscopy+Guideline+Committee+-+A+sub-Committee+of+the+Standards+of+Care+Committee+of+the+British+Thoracic+Society.">The British Thoracic Society Bronchoscopy Guideline Committee - A sub-Committee of the Standards of Care Committee of the British Thoracic Society.</a> Thorax. 56 (Suppl I), 1-21 (2001).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+recommendations+and+guidelines+for+bronchoalveolar+lavage+(BAL)+report+of+the+European+Society+for+Pneumology+Task+Group.">Technical recommendations and guidelines for bronchoalveolar lavage (BAL) report of the European Society for Pneumology Task Group.</a> Eur. Respir. , 561-585 (1989).</li><li>Gordon, S. B., Irving, G. R., Lawson, R. A., Lee, M. E., Read, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+trafficking+and+killing+of+Streptococcus+pneumoniae+by+human+alveolar+macrophages+are+influenced+by+opsonins.">Intracellular trafficking and killing of Streptococcus pneumoniae by human alveolar macrophages are influenced by opsonins.</a> Infect. Immun. 68, 2286-2293 (2000).</li><li>Gordon, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+immunoglobulin+responses+to+Streptococcus+pneumoniae+are+altered+but+not+reduced+in+human+immunodeficiency+virus-infected+Malawian+adults.">Pulmonary immunoglobulin responses to Streptococcus pneumoniae are altered but not reduced in human immunodeficiency virus-infected Malawian adults.</a> J. Infect. Dis. 188, 666-670 (2003).</li><li>Fullerton, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Domestic+smoke+exposure+is+associated+with+alveolar+macrophage+particulate+load.">Domestic smoke exposure is associated with alveolar macrophage particulate load.</a> Trop. Med. Int. Health. 14, 349-354 (2009).</li><li>Jambo, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+CD4++T+cell+responses+to+respiratory+antigens+are+impaired+in+HIV-infected+adults.">Bronchoalveolar CD4+ T cell responses to respiratory antigens are impaired in HIV-infected adults.</a> Thorax. 66, 375-382 (2011).</li><li>Eagan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+fluid+immunoglobulin+from+HIV-infected+subjects+has+impaired+opsonic+function+against+pneumococci.">Lung fluid immunoglobulin from HIV-infected subjects has impaired opsonic function against pneumococci.</a> Clin. Infect. Dis. 44, 1632-1638 (2007).</li><li>Rose, A. S., Knox, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+lavage+as+a+research+tool.">Bronchoalveolar lavage as a research tool.</a> Sem. Respir. Crit. Care Med. 28, 561-573 (2007).</li><li>Wright, A. K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Nasal+Challenge+with+Streptococcus+pneumoniae+is+Immunising+in+the+Absence+of+Carriage.">Human Nasal Challenge with Streptococcus pneumoniae is Immunising in the Absence of Carriage.</a> PLoS Pathog. , (2012).</li><li>Bolliger, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERS/ATS+statement+on+interventional+pulmonology+European+Respiratory+Society/American+Thoracic+Society.">ERS/ATS statement on interventional pulmonology European Respiratory Society/American Thoracic Society.</a> Eur. Respir. J. 19, 356-373 (2002).</li><li>Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Duncan, P. G., Lalor, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+lavage+in+the+normal+volunteer+subject.+I.+Technical+aspects+and+intersubject+variability.">Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. I. Technical aspects and intersubject variability.</a> Chest. 94, 275-280 (1988).</li><li>Ettensohn, D. B., Jankowski, M. J., Redondo, A. A., Duncan, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+lavage+in+the+normal+volunteer+subject.+2.+Safety+and+results+of+repeated+BAL,+and+use+in+the+assessment+of+intrasubject+variability.">Bronchoalveolar lavage in the normal volunteer subject. 2. Safety and results of repeated BAL, and use in the assessment of intrasubject variability.</a> Chest. 94, 281-285 (1988).</li><li>De Brauwer, E. I., Jacobs, J. A., Nieman, F., Bruggeman, C. A., Drent, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoalveolar+lavage+fluid+differential+cell+count.+How+many+cells+should+be+counted.">Bronchoalveolar lavage fluid differential cell count. How many cells should be counted.</a> Anal. Quant. Cytol. Histol. 24, 337-341 (2002).</li><li>Mtunthama, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malawians+permit+research+bronchoscopy+due+to+perceived+need+for+healthcare.">Malawians permit research bronchoscopy due to perceived need for healthcare.</a> J. Med. Ethics. 34, 303-307 (2008).</li><li>Pereira, W., Kovnat, D. M., Snider, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+prospective+cooperative+study+of+complications+following+flexible+fiberoptic+bronchoscopy.">A prospective cooperative study of complications following flexible fiberoptic bronchoscopy.</a> Chest. 73, 813-816 (1978).</li><li>Huang, Y. C., Bassett, M. A., Levin, D., Montilla, T., Ghio, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+phase+reaction+in+healthy+volunteers+after+bronchoscopy+with+lavage.">Acute phase reaction in healthy volunteers after bronchoscopy with lavage.</a> Chest. 129, 1565-1569 (2006).</li><li>Gritzfeld, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Human+Pneumococcal+Carriage.">Experimental Human Pneumococcal Carriage.</a> J. Vis. Exp. (72), (2013).</li></ol>

אנדריאה מ &#39;קולינס ממומן על ידי קרן ביל ומלינדה גייטס, ולא אינטרסים מנוגדים פוטנציאליים. היא קיבלה כספים מחברת מרק (MSD) וGSK כדי להשתתף בכנסים ודמי הרצאה. 50 Bals המחקר שבוצע באופן עצמאי. ג&#39;יימי Rylance ממומן על ידי קרן Wellcome, ואין לו ניגוד עניינים. הוא לא קיבל כל קרנות אחרות. 70 Bals המחקר שבוצע באופן עצמאי. דניאל ג ווטון ממומן על ידי NIHR דוקטורט מלגה, ואין לו ניגוד עניינים. 40 Bals המחקר שבוצע באופן עצמאי. יש אנג&#39;לה ד רייט אין אינטרסים מנוגדים פוטנציאליים. סייע עם מעל 100 Bals מחקר. יש אדם KA רייט אין אינטרסים מנוגדים פוטנציאליים. הוא עיבד מעל 50 דגימות BAL. דאנקן ג פולרטון </strong&gt; אין לו אינטרסים מנוגדים פוטנציאליים. 100 Bals המחקר שבוצע באופן עצמאי. יש סטיבן ב גורדון אין אינטרסים מנוגדים פוטנציאליים. הוא קיבל כספים מחברת מרק (MSD) ונוברטיס כדי להשתתף בכנסים. 400 Bals המחקר שבוצע באופן עצמאי.

על מנת להשיג תוצאות טובות הבאות מועילים: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> anesthetisation טוב בבסיס הלשון והלוע התחתון אחורי. זה חשוב כי זה משפר את הסובלנות פרוצדורליים של הנושא ואת הנוחות כללית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כך או ילדים (קוטר חיצוני 3.4-3.6 מ&quot;מ) או bronchoscope הבוגר (קוטר חיצוני 4.8-5.9 מ&quot;מ) ניתן להשתמש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם יש אי נוחות במהלך אינטובציה האף, אינטובציה האוראלית היא מועדפת. באופן כללי אינטובציה האף היא גם טכניקה פשוטה או צריך להיות נטושה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר החדרה ראשונית של לידוקאין ללוע התחתון, הנושא עשוי להעדיף bronchoscope לפירעון עד לתחילתה של הרדמה, במיוחד אם bronchoscope מוכנס דרך הפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא 10 לפחות x 10 מיליליטר מזרקים prefilled רק עם 2-4 מיליליטר של לידוקאין. יש להשאיר אוויר במזרקים המאפשרים אספקה ​​משופרת של ההרדמה ישירות על גבי מיתרים וMuco Endobronchialsa. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאז השיעול במהלך ההליך מפחית באופן משמעותי את תשואת BAL; באמצעות מי מלח מחומם ויש הרדמה ברירית טובה חשובה כדי להפחית את זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 50 מיליליטר המזרקים יש prefilled עם מי מלח מחומם. זה נפוץ 50 מיליליטר הראשון של מלח רגיל החדיר להניב בין 10-20 מיליליטר עקב אובדן מת חלל והשאר רץ לתוך דרך נשימת המסוף. aliquots נוספים להחזיר חלק גדול יותר של נוזל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המפעיל תמיד צריך לבדוק bronchoscope לפני אינטובציה, כולל הבטחת יניקה יעילה על ידי aspirating מלח רגיל סטרילי. אובדן של יניקה יכול להתרחש בדרך כלל עקב מסתלסל של הצינור או דליפה סביב הקשרים עם bronchoscope או מכשיר יניקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך שאיבה ידנית, באופן אידיאלי בדרכי הנשימה לא צריכה לקרוס. אם יניקה חוזר ונשנה מתמוטטת בדרכי הנשימה, חוזרת BAL מופחתים למנגנון שסתום, והדלקת מקומית ודימום הוא בסבירות גבוהה יותר: זה בתורו גורם מ &#39;דרכי הנשימהעפרות עצבניות ושיעול סביר יותר. בחירת סניף subsegmental RML המתאים ביותר ושימוש בלחצי יניקה נמוכים ולכן הם גם חשובות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר האוויר נשאף, כל הזמן לבדוק שוב את החיבור של המזרק לbronchoscope וגם עמדתו של bronchoscope בדרכי נשימת דיסטלי. אם מדובר בבעיה חוזרת ונשנית, שלאחר ההליך להבטיח שאין חורים ברונכוסקופ עצמו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> BAL ממעשנים הוא לעתים קרובות כהה יותר בשל נוכחותם של חלקיקים תאיים. מעשנים עלולים לסבול רונכוסקופיה פחות טוב, ויש לי שיעול מוגבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תשואת נפח BAL עדיפה היא&gt; 100 מיליליטר. תשואה של&gt; 150 מיליליטר היא מצוינת. אנחנו לא חווינו כל תשואות&gt; 170 מיליליטר. אין קשר לינארי בין תשואת התא ותשואת נפח BAL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תשואות של &lt;100 מיליליטר הן, בניסיון שלנו, בסבירות גבוהה יותר לגרום לתופעות לוואי כגון שיעול, כאבים בחזה וחום. אנו ממליצים כי נבדקים עם תשואות של &lt;100 מ&quot;ל להיות recoורד בעמדה לרוחב השמאל, זה עשוי לסייע לניקוז של כל נוזל ריאה הנותרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קשר קליני צריך להיעשות עם הנושא בתוך 1-5 ימים כדי להבטיח שאין תופעות לוואי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרגעה midazolam משמשת ל&lt; 50% מנבדקים בבריטניה וב&lt; 5% במלאווי. Midazolam אינו מופיע כדי לשפר את הסבילות ישירות; כמה מפעילים מרגישים שהרגעה עשויה לעתים להיות בלתי יעילה בשמירה על דיאלוג קוהרנטי (ומרגיע) בנושא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניסיוננו, יש עקומה למידה משמעותית עם טכניקה זו. לדוגמא תיאום בין הרופא והאחות לוקח זמן ותשואות הן בדרך כלל נמוכות יותר בתחילתו של תהליך הלמידה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנושאי HIV חיוביים, אנו משתמשים באנטיביוטיקה מונעת prebronchoscopy. </li></ol>

רקע ברונכוסקופיה Fiberoptic פותחה עבור פרקטיקה קלינית, זה נעשה שימוש נרחב גם אבחנה וטיפולית 1,2. ברונכואלוואולרית שטיפה (BAL) מסירה תאי nonadherent וריאות נוזל רירית מהמשטח הרירי; ביופסיה משמשת כדי לדגום רקמות הריריות וSubmucosal. בסביבות מחקר, BAL מאפשר דגימה של מולד (מקרופאגים ריאות 3-5), סלולארי (B-ו-T-תאי 6), ולחות (אימונוגלובולינים 7) תגובות בתוך הריאות. BAL הוא מקובל בעולם למטרות מחקר 8 ומאז 1999 הטכניקה שבוצעה ב&gt; 1,000 נבדקים בבריטניה ובמלאווי על ידי הקבוצה שלנו. אנו משתמשים בטכניקה זו במחקרים של תגובה חיסונית מולדת, סלולרית, ולחות לאנטיגן pneumococcal כוללים מרכבת ניסוי אנושית pneumococcal 9,17, עשן ביומסה 5, איידס וחיסון, וסטו טיפול מן החוץמת להחלמה מדלקת ריאות. הטכניקה שלנו משתמשת בשאיבת כף יד עדינה של נוזל החדיר; זה נועד למקסם חזר BAL נפח ולהפעיל כוח גזירה מינימום על epithelia ריסי על מנת לשמר את המבנה ותפקוד של תאים בתוך נוזל BAL. בהקשר מחקר BAL מנצל טכניקה שונה מזו הנהוגה על ידי רופאי טיפול בדרכי הנשימה ואינטנסיביים (שטיפה שמכונה לעתים קרובות הסימפונות, כביסות, שטיפה, או BAL) שמכוונים להשיג יתרון אבחון או טיפול. טכניקת המחקר נועדה לאסוף תאים ולשמר את הכדאיות כדי להקל את הצמיחה של תאי in vivo התרבות לשעבר. מסיבות אלה טכניקת המחקר משתמשת instillate גדול נפח (בדרך כלל בסדר הגודל של 200 מיליליטר) ומעסיקה שאיבה ידנית כדי להפחית את הנזק לתאים. חולים מקבלים הרדמה מקומית, הציעו סדציה הכרתית (midazolam), ולסבול את ההליך היטב עם תופעות לוואי מינימאליים. subjec המילולי והכתובמידע לא משפר את הסובלנות וכתב הסכמה מהדעת היא חובת 1. מטרה המטרה הכללית היא שההליך צריך להיות בטוח ויעיל. נושאים שלא צריכים לחוות כל הפרעה פיזיולוגית ומפעילים צריכים לאסוף באופן עקבי בעודף של BAL 100 מיליליטר מנושאים. לאחר ההליך, נושאים צריכים לחוות תופעות לוואי מינימליות. בטיחות בטיחות של הנושא היא בעל חשיבות עליונה. נבדקים שנבחרו בקפידה תוך שימוש בקריטריוני הכללה והדרה ברורים. פרוטוקול זה כולל תיאור של הסיכונים הפוטנציאליים ואת הצעדים שננקטו כדי להקל עליהם. התוויות נגד לרונכוסקופיה מחקר עשויות לבוא לידי ביטוי מוחלט או יחסי, ונכללות בפרוטוקול המחקר שלנו כקריטריוני הדרה והכללה. כל הנושאים שלנו מוקרנים כדי להבטיח בריאות מלאה. התוויות נגד מוחלטותכוללים עמוד השדרה יציבה צוואר הרחם, היפוקסיה להגיב, תעוקת חזה בלתי יציבה, diathesis דימום, והפרעות קצב לב ממאירות. התוויות נגד יחסית, כוללים אלה התנאים קשורים עם שיעורי סיבוך מוגברים, כוללות: כללי: בצורה גרועה שיתופי נושא 1, כל למשל אפילפסיה בעיה רפואית כללית משמעותית, ברונכוסקופיה הקודמת נסבלת גרוע, תופעות לוואי לידוקאין או midazolam, הריון, תזונה לקויה ידועה. נשימה: [saturations (פסיכומטרית) באוויר &lt;94%] היפוקסיה, hypercapnia, אסטמה לא יציבה 1, תפקוד נשימה לקויה באופן משמעותי 1 (FEV 1 &lt;1 ליטר), יתר לחץ דם ריאתי. לב וכלי דם: אורמיה, בתוך 6 שבועות של אוטם שריר הלב 1, חסימת וריד הנבוב מעולה. אחר: דיכוי חיסוני (הקבוצה שלנו מבצעת proce זה באופן קבועדורה בנושאי HIV חיוביים). ראה טבלת מס &#39;1 - סיכונים הקשורים לBAL למחקר.

<table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:966px;" width="966">
	<tbody>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:25px;">
			Material
			</td>
			<td style="width:161px;height:25px;">
			Company
			</td>
			<td style="width:151px;height:25px;">
			Catalogue Number
			</td>
			<td style="width:410px;height:25px;">
			Comments
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Fibreoptic bronchoscope, light and suction source
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Surgical gown, sterile gloves
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sphygnomanometer
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For continuous patient monitoring
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Pulse oximeter
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For continuous patient monitoring
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			3 lead ECG monitor
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For continuous patient monitoring
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Nasal oxygen delivery 2-4l/min
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Lidocaine 10% spray (Xylocaine)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			AstraZeneca
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For topical anaesthesia
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Lidocaine hydrochloride 2%
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For topical anaesthesia
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Lidocaine gel (Instillagel)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Farco-Pharma, Germany
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Normal saline, sterile 200ml
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Warm to 30oC
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			10ml taper-end syringe (x10)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For administration of lidocaine
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Intravenous cannula 18G
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For administration of midazolam
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Midazolam
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For sedation
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Flumazenil
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Reversal of benzodiazepine sedation (emergency use only)
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			60ml taper-end syringes (x4)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For normal saline injection and BAL fluid withdrawal.
			May require connector to attach to the injection port of the bronchoscope
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sterile gauze swab
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Vernaid, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sterile container for BAL fluid
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			See text and comments
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Siliconised glass bottles reduce macrophage adherence. Alternatively, 50ml centrifuge tubes may be used (total capacity 200ml)
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Sigmacote
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			SL2
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Only if siliconised glass bottles used. NB: Harmful and flammable. If used, follow precautions detailed in manufacturer&#8217;s MSDS
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Centrifuge
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;"></td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			At least 4x50ml tube capacity. Refrigeration to 4oC preferred.
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Shandon Cytospin centrifuge
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Thermo Scientific, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			RPMI 1640 medium with L-glutamine
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			R8758
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Fetal bovine serum
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			F6178
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Penicillin-Streptomycin
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			P4333
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Amphotericin B
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Sigma, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			A2942
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Tissue culture plates
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Greiner Bio-One, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			662160
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Alternative products available from other suppliers
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Glass microscope slides
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			unspecified
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Shandon cytofunnel
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Thermo Scientific, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			A78710003
			
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Shandon cytoclip
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Thermo Scientific, UK
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			59910052
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			For differential count only
			</td>
		</tr>
		<tr>
			<td style="width:244px;height:26px;">
			Hemacolor staining set (fixative, red and blue reagents)
			</td>
			<td style="width:161px;height:26px;">
			Merck, Germany
			</td>
			<td style="width:151px;height:26px;">
			111661
			</td>
			<td style="width:410px;height:26px;">
			Use according to manufacturer&#8217;s instructions
			</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bronchoalveolar lavage (bal) for research; obtaining adequate sample yield

אנו מתארים טכניקת מחקר לרונכוסקופיה עם סיב אופטי שטיפה ברונכואלוואולרית (BAL) באמצעות שאיבה שנערכה ידנית יד על מנת להסיר תאי nonadherent ונוזל רירית ריאה מהמשטח הרירי. בסביבות מחקר, BAL מאפשר דגימה של מולד (מקרופאג ריאות), תגובות תאיות (B-ו-T-תאים), ולחות (אימונוגלובולינים) בתוך הריאות. BAL הוא מקובל בעולם למטרות מחקר ומאז 1999 הטכניקה שבוצעה ב&gt; 1,000 נבדקים בבריטניה ובמלאווי על ידי הקבוצה שלנו. הטכניקה שלנו משתמשת בשאיבת כף יד עדינה של נוזל החדיר; זה נועד למקסם חזר BAL נפח ולהפעיל כוח גזירה מינימום על epithelia ריסי על מנת לשמר את המבנה ותפקוד של תאים בתוך נוזל BAL ולשמר את הכדאיות כדי להקל על הצמיחה של תאי in vivo התרבות לשעבר. טכניקת המחקר ולכן משתמשת בנפח גדול יותר תוספותtillate (בדרך כלל בסדר הגודל של 200 מיליליטר) ומעסיק שאיבה ידנית כדי להפחית את הנזק לתאים. חולים מקבלים הרדמה מקומית, הציעו סדציה הכרתית (midazolam), ולסבול את ההליך היטב עם תופעות לוואי מינימאליים. מידע נושא מילולי וכתוב משפר את הסובלנות וכתב הסכמה מהדעת היא חובה. בטיחות של הנושא היא בעל חשיבות עליונה. נבדקים שנבחרו בקפידה תוך שימוש בקריטריוני הכללה והדרה ברורים. פרוטוקול זה כולל תיאור של הסיכונים הפוטנציאליים, ואת הצעדים שננקטו כדי להקל עליהם, רשימת התוויות נגד, ולפני בדיקות שלאחר ההליך, כמו גם טכניקות רונכוסקופיה ומעבדה מדויקות.

תוצאות קליניות טובות הן BAL נפח של מעל 100 מיליליטר ונושא שחווה ברוב, אי נוחות קטין (ראה טבלה 1). זה דורש נושא נינוח ושיתופי. המטפל חייב להיות בטוח, מוכן ומזומן (חומרים), והבנה כלפי המתנדב. השתנות אינטר ותוך נושא בתשואה סלולרית (כולל ספירת ההפרש) שתוארו. ספירת תאי ההפרש מנבדקים בריאים הן בדרך כלל מקרופאגים&gt; 90% עם מספר קטן של נויטרופילים (&lt;2%) ולימפוציטים (5-10%). תאי BAL centrifuged על גבי שקופיות מיקרוסקופ יכולים להיות מוכתמים בכתם גרעיני ההפרש כדי להשיג מידע זה (איור 1). באיור 1, תאי BAL תוקנו ונצבעו באמצעות מכתים Hemacolor על פי הוראות היצרן. צריכים לספור לפחות 300 תאים כדי להשיג תוצאות אמינות למקרופאגים,נויטרופילים ולימפוציטים; 500 תאים לסוגים נדירים יותר של תאים. <table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מפגע </td><td> סיכון </td><td> צמצם בפרוטוקול זה על ידי: </td></tr><tr><td colspan="3"> השפעה של ברונכוסקופיה ו1 BAL, 14 </td></tr><tr><td> אי נוחות קלה </td><td> &lt;25% 14, # </td><td> שיכוך כאבים מתאימים ותרופות הרגעה. גישה בטוחה ואכפתיות לנושא. </td></tr><tr><td> דימום מאף </td><td> &lt;1% # </td><td> לחץ מתון לאינטובציה האף בלבד. אם אי נוחות נושא או צמצם הצטמצם - אינטובציה דרך הפה במקום. </td></tr><tr><td> דימום Endobronchial (hemoptysis) </td><td> &lt;0.1% * 15 </td><td> לא ביופסיות שנלקחו. שליטה קפדנית ברונכוסקופיה - הימנעות רירית בדרכי הנשימה. </td></tr><tr><td> NausEA, דלקת ריאות הקאות ושאיפה </td><td> &lt;0.02% 14, # </td><td> צום של preprocedure שעה אוכל&gt; 4 מוצק 1. הרדמה מקומית הולמת. עמדת Semirecumbent במהלך הליך. תצפית שלאחר ההליך זהיר. </td></tr><tr><td> קדחת </td><td> 14 0.01 - 1% #, 16 </td><td> מתייחס לדלקת, ויכול למזער על ידי איסוף מקסימאלי של BAL. אונה אחת BAL בלבד. # </td></tr><tr><td> האף כואב / בגרון וצרידות </td><td> &lt;25% 14, # </td><td> הרדמה מקומית מספיקה של האף, הגרון וגרון (מזעור שיעול). </td></tr><tr><td> זיהום </td><td> &lt;0.1% באיידס שלילי, 1% בנשאיות 14, # </td><td> הליך כביסה bronchoscope תקן 1. אונה אחת BAL בלבד. # זיהוי מוקדם של זיהום: בדיקה קלינית בתוך 1 שעותקשר קליני ד 1-5 ימים לאחר ברונכוסקופיה. </td></tr><tr><td> כאבים בחזה / שיעול </td><td> &lt;0.2% 14, # </td><td> אונה אחת BAL בלבד. אוסף המקסימאלי BAL. # </td></tr><tr><td colspan="3"> השפעות של תרופות: לידוקאין, midazolam </td></tr><tr><td> הפרעות קצב </td><td> נדיר מאוד * </td><td rowspan="3"> מקסימום של 5 מ&quot;ג / ק&quot;ג לידוקאין 14 בשימוש. מי מלח מחומם נורמלי החדיר. # דופק oximetry (פסיכומטריים&gt; 90% עם תוספת חמצן), ניטור לב בכל הליך. אנטגוניסט נזודיאזפינים (flumazenil) זמין באופן מיידי. </td></tr><tr><td> חוסר התמצאות / תסיסה </td><td> &lt;0.1% # † </td></tr><tr><td> דיכאון נשימה אירובי </td><td> נדיר מאוד * </td></tr></tbody></table> * לא מנוסה בקבוצה שלנו בלמעלה מ 1,500 נהלי מחקר. † Idiosyncratic ולא תגובה תלוית מינון. # הניסיון של הקבוצה שלנו בלמעלה מ 1,500 נהלי מחקר. טבלת 1. סיכונים הקשורים לBAL למחקר. זה כולל את המפגע או סיכון וכיצד זה הוא מופחת על ידי שימוש בטכניקה שתוארה. השפעות של ברונכוסקופיה / BAL וגם את ההשפעות של כל תרופות מרפא המשמשות כלולות. <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/4345/4345fig1highres.jpg" width="500" /> איור 1. שקופיות מיקרוסקופ מציג BAL המקרופאגים ונויטרופילים מזדמנים. תאי BAL תוקנו במתנול ומוכתם באדום Hemacolor (Y eosin) וכחול (תכלת ב &#39;).

Watch this Scientific Journal Video about Bronchoalveolar Lavage BAL for Research; Obtaining Adequate Sample Yield at JoVE.com

Bronchoalveolar Lavage BAL for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

אנו מתארים טכניקת מחקר לרונכוסקופיה סיב אופטי ושטיפה ברונכואלוואולרית באמצעות שאיבה בלחץ נמוכה. הטכניקה משמשת כדי לקצור תאים חיסוניים ממשטחי רונכואלוואולרית ריאות. משמש הרדמה מקומית וטשטוש קל בהכרה (midazolam). נושאים לסבול את תופעות לוואי מינימליות גם הליך וניסיון.

שטיפה ברונכואלוואולרית (BAL) למחקר; קבלת תשואה הולמת לדוגמא

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove ...

bronchoalveolar-lavage-bal-for-research-obtaining-adequate-sample

Research

JoVE Journal

Medicine

Bronchoalveolar Lavage (BAL) for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

73.0K Views.  National Institute for Health Research.  אנו מתארים טכניקת מחקר לרונכוסקופיה סיב אופטי ושטיפה ברונכואלוואולרית באמצעות שאיבה בלחץ נמוכה. הטכניקה משמשת כדי לקצור תאים חיסוניים ממשטחי רונכואלוואולרית ריאות. משמש הרדמה מקומית וטשטוש קל בהכרה (midazolam). נושאים לסבול את תופעות לוואי מ?...

Video: Bronchoalveolar Lavage BAL for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

Generation of Comprehensive Thoracic Oncology Database - Tool for Translational Research

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer specimens and clinical data to be available to researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database also captures a large volume of genomic and proteomic data obtained from various tumor tissue studies. A team of clinical and basic science researchers, a biostatistician, and a bioinformatics expert was convened to design the database. Variables of interest were clearly defined and their descriptions were written within a standard operating manual to ensure consistency of data annotation. Using a protocol for prospective tissue banking and another protocol for retrospective banking, tumor and normal tissue samples from patients consented to these protocols were collected. Clinical information such as demographics, cancer characterization, and treatment plans for these patients were abstracted and entered into an Access database. Proteomic and genomic data have been included in the database and have been linked to clinical information for patients described within the database. The data from each table were linked using the relationships function in Microsoft Access to allow the database manager to connect clinical and laboratory information during a query. The queried data can then be exported for statistical analysis and hypothesis generation.

A thoracic oncology database was developed to serve as a comprehensive repository for clinical and laboratory data for the purposes of translational research. The database will serve translational cancer researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database is adaptable to other cancer models, as well as other human diseases.

הדור של מסד נתונים מקיף החזה אונקולוגיה - כלי למחקר Translational

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

ספיגה דו צדדי משותף עורק תרדמה כגירוי נפשית מראש מספיק כדי לגרום סובלנות איסכמי מוקדמת לאיסכמיה מוחית מיקוד

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a valuable tool for understanding ovarian cancer, their use has many limitations. These include the lack of heterogeneity and the plethora of genetic alterations associated with extended in vitro passaging.&#160;Here we describe a method that allows for rapid establishment of primary ovarian cancer cells form solid clinical specimens collected at the time of surgery. The method consists of subjecting clinical specimens to enzymatic digestion for 30 min. The isolated cell suspension is allowed to grow and can be used for downstream application including drug screening. The advantage of primary ovarian cancer cell lines over established ovarian cancer cell lines is that they are representative of the original specific clinical specimens they are derived from and can be derived from different sites whether primary or metastatic ovarian cancer.

This study describes a detailed method for isolation and characterization of primary ovarian cancer cells from solid clinical specimens. Ovarian cancer clinical specimens are subjected to enzymatic digestion to obtain viable, fibroblast-free epithelial ovarian cancer (EOC) cells highly suitable for downstream applications.

שיטה לקבלת תאי סרטן השחלות ראשיים מתוך דגימות מוצקים

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human specimens, precious samples must be handled with the greatest care in order to ensure integrity of organs, tissues, and cells to the highest degree. Unfortunately, tissue processing by definition requires extraction of tissues from the host, a change which can cause great cellular stress and have major repercussions on subsequent analyses. These stresses could result in the specimen being no longer representative of the site from which it was retrieved. Therefore, a strict protocol must be adhered to while processing these specimens to ensure representativeness. The desired assay(s) must also be taken into consideration in order to ensure that an optimal technique is used for sample processing. Outlined here is a protocol for tissue retrieval, processing and various analyses which may be performed on processed tissue in order to maximize downstream production from limited tissue samples.

Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

עבודה עם רקמות אנושיות לחקר סרטן Translational

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

Lavage-induced Surfactant Depletion in Pigs As a Model of the Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS)

Various animal models of lung injury exist to study the complex pathomechanisms of human acute respiratory distress syndrome (ARDS) and evaluate future therapies. Severe lung injury with a reproducible deterioration of pulmonary gas exchange and hemodynamics can be induced in anesthetized pigs using repeated lung lavages with warmed 0.9% saline (50 ml/kg body weight). Including standard respiratory and hemodynamic monitoring with clinically applied devices in this model allows the evaluation of novel therapeutic strategies (drugs, modern ventilators, extracorporeal membrane oxygenators, ECMO), and bridges the gap between bench and bedside. Furthermore, induction of lung injury with lung lavages does not require the injection of pathogens/endotoxins that impact on measurements of pro- and anti-inflammatory cytokines. A disadvantage of the model is the high recruitability of atelectatic lung tissue. Standardization of the model helps to avoid pitfalls, to ensure comparability between experiments, and to reduce the number of animals needed.

Lavage-induced Surfactant Depletion in Pigs As a Model of the Acute Respiratory Distress Syndrome ARDS

Repeated pulmonary lavages in anesthetized pigs induce lung injury resembling major aspects of human acute respiratory distress syndrome (ARDS). For this purpose the lungs are repeatedly lavaged with 0.9% saline at 37 &#176;C. The goal of the protocol is a reproducible mitigation of gas exchange and hemodynamics for research in ARDS.

דלדול פעילי שטח הנגרמת שטיפה בחזירים כמודל של תסמונת מצוקה נשימתית חריפה (ARDS)

Various animal models of lung injury exist to study the complex pathomechanisms of human acute respiratory distress syndrome (ARDS) and evaluate future ...

Sample Preparation for Computed Tomography-based Three-dimensional Visualization of Murine Hind-limb Vessels

Blood vessels are complex networks with tree-like structures, and vascular networks are essential for maintaining both circulation and maintaining organ function. Clarifying the mechanism of blood vessel formation is therefore extremely useful for elucidating developmental processes and pathological mechanisms. Murine hind-limb vessels are often used as a model for physiological and pathological angiogenesis. Evaluation is mainly performed via a two-dimensional method using tissue sections. However, methods for evaluating three-dimensional (3D) vascular morphology are particularly limited. This paper introduces a method for visualizing murine hind-limbs using computed tomography (CT). Radiation-opaque resin is injected through the descending aorta, and whole vessels are filled with dye. By adjusting the time of dye injection, arterial-specific filling is also possible, and samples can be obtained with any micro-X-ray CT device. This contrast method provides a basic technique for the 3D evaluation of murine blood vessels in the lower extremities. Furthermore, this method can be used to visualize all blood vessels below the diaphragm and evaluate blood vessels in the abdominal organs.

Here, we describe a visualization and quantification method for murine hind-limb vessels using micro-X-ray computed tomography.

הכנה מדגמית להדמיה תלת-ממדית מבוססת טומוגרפיה ממוחשבת של כלי דם הינדיים של מורין

Blood vessels are complex networks with tree-like structures, and vascular networks are essential for maintaining both circulation and maintaining organ ...

Technique for Obtaining Mesenchymal Stem Cell from Adipose Tissue and Stromal Vascular Fraction Characterization in Long-Term Cryopreservation

Human mesenchymal stem cells derived from adipose tissue have become increasingly attractive as they show appropriate features and are an accessible source for regenerative clinical applications. Different protocols have been used to obtain adipose-derived stem cells. This article describes different steps of an improved time-saving protocol to obtain a more significant amount of ADSC, showing how to cryopreserve and thaw ADSC to obtain viable cells for culture expansion. One hundred milliliters of lipoaspirate were collected, using a 26 cm three-hole and 3 mm caliber syringe liposuction, from the abdominal area of nine patients who subsequently underwent elective abdominoplasty. The stem cells isolation was carried out with a series of washes with Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline (DPBS) solution supplemented with calcium and the use of collagenase. Stromal Vascular Fraction (SVF) cells were cryopreserved, and their viability was checked by immunophenotyping. The SVF cellular yield was 15.7 x 105 cells/mL, ranging between 6.1-26.2 cells/mL. Adherent SVF cells reached confluence after an average of 7.5 (&#177;4.5) days, with an average cellular yield of 12.3 (&#177; 5.7) x 105 cells/mL. The viability of thawed SVF after 8 months, 1 year, and 2 years ranged between 23.06%-72.34% with an average of 47.7% (&#177;24.64) with the lowest viability correlating with cases of two-year freezing. The use of DPBS solution supplemented with calcium and bag resting times for fat precipitation with a shorter time of collagenase digestion resulted in an increased stem cell final cellular yield. The detailed procedure for obtaining high yields of viable stem cells was more efficient regarding time and cellular yield than the techniques from previous studies. Even after a long period of cryopreservation, viable ADSC cells were found in the SVF.

The present protocol describes an improved methodology for ADSC isolation resulting in a tremendous cellular yield with time gain compared to the literature. This study also provides a straightforward method for obtaining a relatively large number of viable cells after long-term cryopreservation.

טכניקה לקבלת תאי גזע מזנכימליים מרקמת שומן ואפיון שבר כלי דם סטרומלי בשימור בהקפאה ארוכת טווח

Human mesenchymal stem cells derived from adipose tissue have become increasingly attractive as they show appropriate features and are an accessible ...

Isolation of Murine Intestinal Mesenchyme Resulting in a High Yield of Telocytes

The murine small intestine, or colon mesenchyme, is highly heterogenous, containing distinct cell types including blood and lymphatic endothelium, nerves, fibroblasts, myofibroblasts, smooth muscle cells, immune cells, and the recently identified cell type, telocytes. Telocytes are unique mesenchymal cells with long cytoplasmic processes, reaching a distance of tens to hundreds of microns from the cell body. Telocytes have recently emerged as an important intestinal stem cell niche component, providing Wnt proteins that are essential for stem and progenitor cell proliferation.
Although protocols on how to isolate mesenchyme from the mouse intestine are available, it is not clear whether these procedures allow the efficient isolation of telocytes. Isolating telocytes efficiently requires special protocol adjustments that would allow dissociation of the strong cell-cell contact between telocytes and neighboring cells without affecting their viability. Here, available intestinal mesenchyme isolation protocols were adjusted to support the successful isolation and culture of mesenchyme containing a relatively high yield of viable single-cell telocytes.
The obtained single-cell suspension can be analyzed by several techniques, such as immunostaining, cell sorting, imaging, and mRNA experiments. This protocol yields mesenchyme with sufficiently conserved antigenic and functional properties of telocytes, and can be used for several applications. For example, they can be used for co-culture with mouse- or human-derived organoids to support organoid growth with no growth factor supplementation, to better reflect the situation in the original tissue.

Here, we present a protocol to isolate murine intestinal mesenchyme, including telocytes. These can be used for several applications, such as co-culture with mouse or human-derived organoids, to support growth and better reflect the situation in the original tissue.

בידוד של מזנכימה במעי מורין וכתוצאה מכך תשואה גבוהה של טלוציטים

The murine small intestine, or colon mesenchyme, is highly heterogenous, containing distinct cell types including blood and lymphatic endothelium, nerves, ...

Preparing Zanba-Stir-Fried Tiebangchui (TBC) Sample for Processing Technology Optimization

To begin a single factor experiment to compare Tiebangchui, or TBC slice thickness, for processing technology optimization, prepare five test groups each having 30 grams of TBC, but different slice thickness. Then weigh 90 grams of Zanba, which is three times as much as that of the TBC in each group. Set the temperature and the time of the automatic stir fry machine to 140 degrees Celsius and 40 minutes respectively.After the machine has heated up to the set temperature, add the weighed amounts of TBC and Zanba into the machine. Then using a high speed smashing machine, grind the Zanba stir-fried TBC into powder. Next, weigh two grams of Zanba stir-fried TBC powder in a conical flask.To the sample in the flask, add three milliliters of ammonia solution followed by 50 milliliters of a mixture of isopropyl alcohol and ethyl acetate, having a volume ratio of one is to one. After recording the weight of the conical flask with the contents, ultrasonicate the TBC sample for 30 minutes at 220 volts and 40 kilohertz maintaining a temperature below 25 degrees Celsius. Weigh the conical flask with the sample once again after the ultrasonic extraction.Make up for the lost weight by adding the isopropyl alcohol and ethyl acetate mixture mentioned previously, and filter the sample solution. Evaporate 25 milliliters of the filtrate to dryness using a rotary evaporator at 40 degrees Celsius. Then dissolve the residue in five milliliters of a solution of 0.05 hydrochloric acid in methanol.Filter the solution through a 0.2 micron syringe filter, and analyze it by performing high performance liquid chromatography, or HPLC. Calculate the contents of the MDA and DDAs in different processing products according to the standard curve. Calculate the comprehensive score based on the results via the critic method.Following the method demonstrated above, compare the amounts of Zanba, processing temperatures, and times for processing technology optimization. The results of the single factor tests revealed that the comprehensive scores of Zanba stir-fried TBC were highest when the sliced thickness is two centimeters, the amount of Zanba is three times, the processing temperature is 120 degrees Celsius, and the processing time is 60 minutes. The results revealed the range of slicing thickness, amount of Zanba, processing temperature, and processing time to be used for future experiments.

הכנת דוגמת Tiebangchui מוקפצת זנבה (TBC) לאופטימיזציה של טכנולוגיית עיבוד

גילוי סמנים ביולוגיים לא פולשניים לפרוטאומיקה של דמעות באמצעות LC-MS

A Protein Suspension-Trapping Sample Preparation for Tear Proteomics by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

Tear fluid is one of the easily accessible biofluids that can be collected non-invasively. Tear proteomics has the potential to discover biomarkers for several ocular diseases and conditions. The suspension trapping column has been reported to be an efficient and user-friendly sample preparation workflow for the broad application of downstream proteomic analysis. Yet, this strategy has not been well-studied in the analysis of human tear proteome. The present protocol describes an integrated workflow from clinical human tear samples to purified peptides for non-invasive tear protein biomarker research using mass spectrometry, which provides insights into disease biomarkers and monitoring when combined with bioinformatics analysis. A protein suspension trapping sample preparation was applied and demonstrated the discovery of tear proteome with fast, reproducible, and user-friendly procedures, as a universal, optimized sample preparation for human tear fluid analysis. In particular, the suspension trapping procedure outperformed in-solution sample preparation in terms of peptide recovery, protein identification, and shorter sample preparation time.

מחבר זרקור: קידום ניתוח נוזל הדמעות באמצעות פרוטוקול סטנדרטי לחקר פרוטאומיקה 

This protocol describes a method for collecting tear samples using Schirmer strips and an integrated quantitative workflow for discovering non-invasive tear protein biomarkers. The suspension trapping sample preparation workflow enables fast and robust tear sample preparation and mass spectrometric analysis, resulting in higher peptide recovery yields and protein identification than standard in-solution procedures.

הכנת דגימה ללכידת תרחיף חלבונים עבור פרוטאומיקה של דמעות על ידי כרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריית מסה טנדם

Tear fluid is one of the easily accessible biofluids that can be collected non-invasively. Tear proteomics has the potential to discover biomarkers for ...