אנו רוצים להודות למארק לאונרד מקרלטון Immersive סטודיו מדיה לקבלת סיוע טכני מומחה בהפקת וידאו ועריכת ד&quot;ר מרטין ורטרנד מקרלטון Immersive מעבדה וסטודיו / עצבי התחדשות לסיוע מודל חזותי. החוקרים מכירים תודה עמוק על הייעוץ המקצועי של ד&quot;ר מרילין Keaney וכל צוות המסור שלה באוניברסיטה של ​​אוטווה וטיפול בבעלי חי שירותים הווטרינריים. עבודה זו מומנה על ידי המכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR, MOP 62826) לSALB, CIHR המכון להזדקנות ויוזמת אימונים אסטרטגיים במחקר בריאות / תכנית אימוני CIHR בLipidomics ניווניות (96121 TGF) לSALB ומדע בדיוני, קרן קנדית לחדשנות למדע בדיוני, אונטריו חדשנות נאמנות למדע בדיוני, וAutodesk מחקר למדע בדיוני. ACM מקבל נטינג CIHR ופרס דוקטורט הטוב ביותר. NV מקבל מלגת פוסט מקצועית ממכון להזדקנות ותכנית אימוני CIHR בLipidomics ניווניות.

1. ריאגנטים הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטיפת נרתיק סטרילי, חיטוי מים מזוקקים כפולים (DDH 2 O) ולאחסן במכל סגור היטב בטמפרטורת חדר עד צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להערכת ציטולוגיה, להוסיף 0.1 גר &#39;האבקה סגולה גביש עד 100 מ&quot;ל של DDH 2 O. מערבב היטב. סגול קריסטל כתם (0.1%) ניתן לאחסן במכל סגור היטב בטמפרטורת חדר עד צורך. </li></ol> 2. תאי נרתיק איגום (שטיפת נרתיק) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח נורת לטקס בקצה קצה μl סטרילי 200 ותרשום כ 100 μl של DDH 2 O סטרילי באמצעות השינויים ההדרגתיים בקצה כקו מנחה נפח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרם את העכבר מחוץ לכלוב שלה ומניח אותה על אסלת הכלוב (מכסה) בקצה האחורי / אחורי שלה כלפיך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקיפות לתפוס את הזנב ולרומם את האחוריים. העכבר כעת יש רק טלפיה הקדמיות התופסניות המרזב. בשלב זה העכבר יכול להשתין. אם כן, לחכות עד שמפסיק מתן שתן. לא צריך להיות שתן נשאר בכניסה לתעלת נרתיק, ייתכן שתרצה לשטוף את הפתיחה עם DDH 2 O העודף באמצעות טיפ נפרד (כלומר, לא טיפ אוסף המדגם שלך). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחבר את הקצה של קצה DDH 2 O מלא בפתיחה של תעלת הנרתיק נזהר שלא יחדור פתח כגירוי בנרתיק (וצוואר רחם) יכול לגרום pseudopregnancy בחולדות 1,2. הדיווחים האחרונים מראים עכברים הם פחות רגישים להשפעה זו בכל זאת יש להקפיד למזער את מידת הפולשנות בניתוחים חוזרים 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עדינות לדכא את הנורה לגרש רבע למחצית מכמות המים (~ 25-50 μl) בפתיחת תעלת נרתיק. הנוזל יהיה ספונטני לשאוב לתוך התעלה ללא החדרת קצה. לאט לאט משחרר את הלחץ המופעל על הנורה. הנוזל ייסוג בחזרה לקצה. הימנע מלחץ משחרר מהר מדי כדי למנוע שאיפת הנוזללנורה. טיפ מסונן עשוי להיות שימושי למטרה זו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על 4-5 פעמים בשלב הקודמת תוך שימוש באותה עצה, נורה, ונוזל לקבלת מספר מספק של תאים בדגימה אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הנוזל בשקופית זכוכית, ומאפשר המריחה להתייבש לחלוטין בטמפרטורת חדר. ברגע יבש, מורח הייחום חולל אלה יכול להיות מוכתמים באופן מיידי או מאוחסן ומוכתם במועד מאוחר יותר. </li></ol> 3. כתמי ציטולוגיה באמצעות קריסטל ויולט * 4 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את השקף היבש בצנצנת Coplin (או כלי דומה מכתים אחר) המכיל קריסטל הסגול כתם לדקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר לצנצנת המכילה 2 Coplin DDH 2 O. שטוף את השקופיות עם DDH 2 O לדקות 1. חזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את DDH 2 O העודף מקצוות של השקופיות עם מגב רקמת חובת אור, הימנעות ממגע עם הכתם הצבעוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה כ 15 μl של גליצרול על גבי המשטח והכיסויתחליק. לחלופין, ריאגנטים הרכבה היסטולוגית אחרים יכולים להיות מנוצלים כדי לקבל כתם קבוע יותר, שאינם מתפוגג. </li></ol> * שיטת הצביעה שתוארה כאן היא ההליך הפשוט ביותר שניתן לבצע בכל מעבדה. שיטות אחרות יכולות לספק פרטים נוספים. לדוגמה, באמצעות צביעת Papanicolaou, הפדיון של תאי האפיתל בעלי גרעין ניתן להבחין בתאים פחות בוגרים תאי טורקיז ועוד מוכתמים בשלים ורודים או כתומים מוכתמים. הבדלים אלה יכולים לשמש כדי לביים proestrus המוקדם או מאוחר. 4 4. ציטולוגית נרתיק <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחן את הכתם תחת מיקרוסקופ אור כדי לקבוע סוגי תאים קיימים. בדיקה מיקרוסקופית צריך להיעשות מייד לאחר הכתמה כסגולה גביש לפזר מהתאים לאורך זמן בעת ​​השימוש בגליצרול לcoverslipping. Photomicrographs יש לנקוט בעת הניתוח כדי לתעד ציטולוגיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחל על ידי בחינת entirלמרוח דואר בהגדלה נמוכה. בחר אזור נציג ולעבור להגדלה גבוהה יותר. אתה תראה cornified תאי קשקש האפיתל, לויקוציטים, ו / או תאי אפיתל בעלי גרעין (תוצאות נציגויות, האיור 1A-C). היחס בין הווה תאים יאפשר לך לקבוע את שלב הייחום חולל על העכבר בשלב של איסוף דגימה (תוצאות נציגויות, איור 1D-G) ומצב הורמונלי המיידי (דיון, איור 2). </li></ol> 5. נציג תוצאות ציטולוגיה: שלושה סוגי תאים עיקריים ניתן להבחין בדגימות למרוח נרתיק: (1) תאי האפיתל בעלי גרעין (איור 1 א), (2) cornified תאי קשקש האפיתל (1B איור), ו( 3) Leukocytes (התרשים 1C). תאי האפיתל בעלי גרעין יש ציטופלסמה קלילות מוכתמת, קרום פלזמה צבעוני כהה יותר, וגרעין סגלגל ( <strאונג&gt; איור 1 א &#39;). תאי אפיתל קשקש Cornified הם אחיד מוכתמים, polygonal יותר בצורה יותר מקודמי אפיתל בעלי הגרעין שלהם, וחסרי גרעין (האיור 1B). leukocytes polymorphonuclear ניתן להבדיל בין תאי אפיתל בצורתם לא הסדירה, גרעינים רב צורות כהות מוכתמים, וגודל קטן (האיור 1C, חצים שחורים). האם זיהום בשתן להיות נוכח במריחה, גבישי חומצת שתן מזוהים בקלות על ידי המבנים גבישיים השונים לכל סוגי תאים צפויים (איור 3) שלהם. זה צריך להתרחש, וזיהוי אלמוני של סוג תא דומיננטי, המריחה אמורה להיות מושלכת ואינה משמשת למטרות אחסון זמני. בימוי: היחס היחסי של סוגי תאים שנצפו מריחות יכול לשמש כדי לזהות את השלב של מחזור הייחום חולל על העכבר ביום איסוף דגימה (איור 1D-G). במהלך proestrus, תאים הם כמעט אך ורקאשכולות של סיבוב, בנוי היטב בבעלי גרעין תאי אפיתל (1D איור, נציג תא מסומן על ידי חץ לבן). במהלך ייחום, תאים cornified בעיקר תאי קשקש האפיתל, בהווה באשכולות צפופים (האיור 1E, נציג תא שצוין על ידי ראש החץ). במהלך metestrus, לויקוציטים קדרות המוכתם הקטן שולט (האיור 1F, נציג תא מסומן על ידי חץ שחור). תאי אפיתל קשקש Cornified ניתן להבחין לעתים קרובות בברים, (האיור 1F, נציג תא שצוין על ידי ראש החץ שחור). במהלך diestrus, תאי קשקש cornified נדירים אפיתל עשויים עדיין להיות נוכחים (האיור 1G, נציג תא שצוין על ידי ראש החץ שחור), אולם עדיין שולט, לויקוציטים (האיור 1G, נציג תא מסומן על ידי חץ שחור). Metestrus ניתן להבחין בין diestrus ידי המראה של תאי האפיתל בעלי גרעין בdiestrus ( <stron<html> ז&gt; איור 1G, נציג תא מסומן על ידי חץ לבן). <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig1.jpg" alt="איור 1" /> איור 1. הערכת ציטולוגיה של מריחות נרתיק יכולה לשמש לזיהוי שלב ייחום חולל שלושה סוגי תאים עיקריים שזוהו בדגימות למרוח נרתיק:. () תאי אפיתל בעלי גרעין, (ב) תאי אפיתל קשקש cornified, ו (ג) תאי דם לבנים. היחס של סוגי תאים אלה נמצאים במריחה יכול לשמש כדי לזהות עכברים ב( ד &#39;) proestrus, (ה) ייחום, (F) metestrus, או (ז) diestrus כמתואר בתוצאות נציג. ראשי חץ שחורים בE, F ונקודת G לתאי קשקש cornified יציגים אפיתל. חיצים שחורים ב C, F ו-G לנקודת leykocytes נציג. חצים לבנים בD ונציג שיא G בעלי גרעין תאי אפיתל. . &quot;Alt =&quot; jpg איור 2 &quot;/&gt; איור 2. ציטולוגית מריחה בנרתיק משקפת אירועים אנדוקריניות בסיסיים. פרטים ניתנים גם בדיון. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4389/4389fig2large.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה.</a> <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3. גבישי חומצת שתן עלולים להיות מכתימים ההווה הבא גביש סגול של דגימות שתן מזוהמות. () קריסטלים שקופים ויכולים להיות בגדלים שונים (חצים ואזור התאגרף המוגדלים ב( ב)). אין תאים קיימים בתחום זה. האם זיהום שתן חומצת גביש בתוך שדות המשמשים לצביעת ציטולוגיה להיות נוכח, זה עלול להיות קשה לזהות במדויק סוגי תאים בהווה ובהכפשה אמורה להיות מושלכת. ברי קנה מידה = 50 מיקרומטר.

<ol>
	<li>Adler, N. T., Zoloth, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copulatory+behavior+can+inhibit+pregnancy+in+female+rats.">Copulatory behavior can inhibit pregnancy in female rats.</a> Science. 168, 1480-1482 (1970).</li><li>Adler, N. T., Resko, J. A., Goy, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+copulatory+behavior+on+hormonal+change+in+the+female+rat+prior+to+implantation.">The effect of copulatory behavior on hormonal change in the female rat prior to implantation.</a> Physiology. 5, 1003-1007 (1970).</li><li>Yang, J. J., Larsen, C. M., Grattan, D. R., Erskine, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mating-induced+neuroendocrine+responses+during+pseudopregnancy+in+the+female+mouse.">Mating-induced neuroendocrine responses during pseudopregnancy in the female mouse.</a> Journal of. 21, 30-39 (2009).</li><li>Hong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+mouse+estrus+cycle+in+response+to+BRCA1+inactivation+suggest+a+potential+link+between+risk+factors+for+familial+and+sporadic+ovarian+cancer.">Changes in the mouse estrus cycle in response to BRCA1 inactivation suggest a potential link between risk factors for familial and sporadic ovarian cancer.</a> Cancer research. 70, 221-228 (2010).</li><li>Hawkins, S. M., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+menstrual+cycle:+basic+biology.">The menstrual cycle: basic biology.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1135, 10-18 (2008).</li><li>Walmer, D. K., Wrona, M. A., Hughes, C. L., Nelson, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lactoferrin+expression+in+the+mouse+reproductive+tract+during+the+natural+estrous+cycle:+correlation+with+circulating+estradiol+and+progesterone.">Lactoferrin expression in the mouse reproductive tract during the natural estrous cycle: correlation with circulating estradiol and progesterone.</a> Endocrinology. 131, 1458-1466 (1992).</li><li>Parkening, T. A., Collins, T. J., Smith, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+and+pituitary+concentrations+of+LH,+FSH,+and+prolactin+in+aging+C57BL/6+mice+at+various+times+of+the+estrous+cycle.">Plasma and pituitary concentrations of LH, FSH, and prolactin in aging C57BL/6 mice at various times of the estrous cycle.</a> Neurobiology of aging. 3, 31-35 (1982).</li><li>Sarkar, D. K., Chiappa, S. A., Fink, G., Sherwood, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotropin-releasing+hormone+surge+in+pro-oestrous+rats.">Gonadotropin-releasing hormone surge in pro-oestrous rats.</a> Nature. 264, 461-463 (1976).</li><li>Rajendren, G., Gibson, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+confocal+microscopic+study+of+synaptic+inputs+to+gonadotropin-releasing+hormone+cells+in+mouse+brain:+regional+differences+and+enhancement+by+estrogen.">A confocal microscopic study of synaptic inputs to gonadotropin-releasing hormone cells in mouse brain: regional differences and enhancement by estrogen.</a> Neuroendocrinology. 73, 84-90 (2001).</li><li>Kumar, T. R., Wang, Y., Lu, N., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicle+stimulating+hormone+is+required+for+ovarian+follicle+maturation+but+not+male+fertility.">Follicle stimulating hormone is required for ovarian follicle maturation but not male fertility.</a> Nature. 15, 201-204 (1997).</li><li>Montgomery, V., Loutradis, D., Tulchinsky, D., Kiessling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FSH-induced+ovulation+in+intact+and+hypophysectomized+mice.">FSH-induced ovulation in intact and hypophysectomized mice.</a> Journal of reproduction and fertility. 84, 1-6 (1988).</li><li>Mihm, M., Gangooly, S., Muttukrishna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+normal+menstrual+cycle+in+women.">The normal menstrual cycle in women.</a> Animal reproduction science. , 124-229 (2011).</li><li>Appelgren, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histochemical+demonstration+of+drug+interference+with+progesterone+synthesis.">Histochemical demonstration of drug interference with progesterone synthesis.</a> Journal of reproduction and. 19, 185-186 (1969).</li><li>Sander, V. A., Facorro, G. B., Piehl, L., de Celis Rubin, E., Motta, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+DHEA+and+metformin+on+corpus+luteum+in+mice.">Effect of DHEA and metformin on corpus luteum in mice.</a> Reproduction. 138, 571-579 (2009).</li><li>Stocco, C., Telleria, C., Gibori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+control+of+corpus+luteum+formation,+function,+and+regression.">The molecular control of corpus luteum formation, function, and regression.</a> Endocrine reviews. 28, 117-149 (2007).</li><li>Rudolph, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+overt+menstruation+in+intact+mice.">Induction of overt menstruation in intact mice.</a> PLoS One. 7, e32922 (2012).</li><li>Yano, J., Lilly, E., Barousse, M., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell-derived+S100+calcium-binding+proteins+as+key+mediators+in+the+hallmark+acute+neutrophil+response+during+Candida+vaginitis.">Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis.</a> Infection and immunity. 78, 5126-5137 (2010).</li><li>Whitten, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence+of+anoestrus+in+mice+caged+in+groups.">Occurrence of anoestrus in mice caged in groups.</a> The Journal of endocrinology. 18, 102-107 (1959).</li><li>Lamond, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+stimulation+derived+from+other+animals+of+the+same+species+on+oestrous+cycles+in+mice.">Effect of stimulation derived from other animals of the same species on oestrous cycles in mice.</a> The Journal of endocrinology. 18, 343-349 (1959).</li><li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+I.+Cycle+frequency,+length+and+vaginal+cytology.">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biology of reproduction. 27, 327-339 (1982).</li><li>Felicio, L. S., Nelson, J. F., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+studies+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+II.+Cessation+of+cyclicity+and+the+duration+of+persistent+vaginal+cornification.">Longitudinal studies of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: II. Cessation of cyclicity and the duration of persistent vaginal cornification.</a> Biology of reproduction. 31, 446-453 (1984).</li><li>Van Der Lee, S., Boot, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+pseudopregnancy+in+mice.+II.">Spontaneous pseudopregnancy in mice. II.</a> Acta physiologica et pharmacologica Neerlandica. 5, 213-215 (1956).</li><li>Van Der Lee, S., Boot, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+pseudopregnancy+in+mice.">Spontaneous pseudopregnancy in mice.</a> Acta physiologica et pharmacologica Neerlandica. 4, 442-444 (1955).</li><li>Armaiz-Pena, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrous+cycle+modulates+ovarian+carcinoma+growth.">Estrous cycle modulates ovarian carcinoma growth.</a> Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research. 15, 2971-2978 (2009).</li><li>Jemiolo, B., Harvey, S., Novotny, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+the+Whitten+effect+in+female+mice+by+synthetic+analogs+of+male+urinary+constituents.">Promotion of the Whitten effect in female mice by synthetic analogs of male urinary constituents.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 83, 4576-4579 (1986).</li></ol>

המחברים מצהירים אין ניגוד האינטרסים. כל הניסויים בבעלי חיים בוצעו בציות מלא להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי אוניברסיטת אוטווה בעלי חי טיפול הוועדה והמועצה הקנדית על טיפול בבעלי חיים.

שינויים אלו בטיפולוגיה תא מעידים על אירועים אנדוקריניות בסיסיים. שלב proestrus של מחזור הייחום חולל תואם את שלב הזקיקים האנושי של מחזור 5 ומוגדר על ידי גידול טרום ביוץ במחזור הרמות 17-β-אסטרדיול 6, כמו גם עלייה קטנה ב7 פרולקטין (איור 2, Proestrus, פנל שמאלי). העלייה ב- β-אסטרדיול 17 בעקיפין ממגרת גונדוטרופין-שחרור הורמון הנוירונים ביפותלמוס ומחץ, בתורו, מפעילים תאים מגיבים ביותרת המוח קדמי כדי לשחרר את הורמון luteinizing הורמון זקיק ומגרה למחזור הדם 8,9 (איור 2 , Proestrus, פנל שמאלי). במריחות נרתיק שנלקחו מבעלי החיים בproestrus, הם תאי אפיתל בעלי גרעין באופן כמעט בלעדי סגלגלים (1D איור, איור 2, Proestrus, לוח ימני). השיא בהורם זקיק מגרה1 רמות ביוץ אותות וכניסה לייחום 10,11. במהלך הייחום, רמות 17-β-אסטרדיול ופרולקטין ירידת רמות שיא 6,7 (איור 2, ייחום, פנל שמאלי). מריחות נרתיק מאופיינות בזיהוי כמעט בלעדי של תאים חריגים בצורת cornified קשקש האפיתל לעתים קרובות בגושים (האיור 1E, איור 2, ייחום, לוח ימני). כניסה לmetestrus עולה בקנה אחד עם עלייה מתמדת ברמות הורמון פרוגסטרון 6 ותואמת את תחילתו של שלב שני בבני אדם 12 (איור 2, Metestrus, פנל שמאלי). כאשר רמות הפרוגסטרון מתחילות לעלות ויש זרם קל ברמות 17-β-אסטרדיול בתגובה להפעלת הגופיף צהוב 6,13,14 (איור 2, Metestrus, פנל שמאלי). סוגי התאים המצויים במריחות נרתיק בשלב זה הם תאי אפיתל מקוטעים, cornified וLeukocytes המוכתם הכהה קטן יותר (Figurהדואר 1F, איור 2, Metestrus, לוח ימני). לבסוף, כניסה לdiestrus בעכברים מתרחשת ורמות פרוגסטרון במחזור 6 שיא, המקבילה לשלב השני באיחור האנושי 12. רגרסיה של הגופיף הצהוב מובילה לירידה חדה ברמות פרוגסטרון לאחר 15,16 (איור 2, Diestrus, פנל שמאלי). Leukocytes שולט במריחות במהלך diestrus. התדירות של תאי האפיתל cornified מצטמצמת ותאי האפיתל בעלי גרעין מתחילים להתגלות רק לפני המעבר לproestrus (לוח ימני האיור 1G, איור 2, Diestrus,). לסיכום, פרוטוקול זה פשוט, שגרתי ניתן להשתמש כדי להעריך את תנודות הורמונליות יומיות והקמת שלב ייחום חולל בעכברי ניסוי מבלי לשנות מצב פוריות אם אמצעי הזהירות הבא נלקחים. דגימה יש לבצע לא יותר מאשר באמצעות הפרוטוקול יורד פולשני פעם ביוםribed כאן בהשוואה לחדירה חוזרת ונשנית של תעלת הנרתיק, שאיפה, והסתה. זה יכול לגרום לגירוי נרתיק וכתוצאה מכך 17 תגובה דלקתית וכתוצאה מלויקוציטים וסוגי תאים אחרים להיות נוכח במריחות שעלולות רודפות הערכת ציטולוגיה. יתר על כן, גם בנקבות מושבה שוכנה, זה נורמלי לראות diestrus מורחב ושלבי ייחום בעכברים שונים כמו גם אינדוקציה של 18 anestrous והזדהות זו היא שימושית בפרשנות של השפעה ההורמונלית ברבייה, מין, ומחקרי מחלה. השתנות באורך המחזור היא גם הציג עם גיל והבדלי דיור במושבות (אישי או קבוצתי לדיור) של נקבות 7,19-21. נקבות שוכנו במושבות נשיות בלבד יכולות להפסיק את הרכיבה על אופניים ולהיכנס למצב של diestrus הממושך 18,22,23 למרות שרכיבה על אופניים יכולה להיות מחדש נחקקה על ידי חשיפה לכלובי pretreated עם שתן גברי לעורר רכיבה 24,25. לכן, כדי להקים individuaאורכי מחזור הליטר לעכבר ניתן, מומלצים שההערכות לא פולשנית תוארו כאן יש לבצע מדי יום, בזהירות, עד שני מחזורים שלמים הם נצפו.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם </td><td> חברה </td><td> קטלוג # </td></tr><tr><td> 200 עצות פיפטה μl סטריליים </td><td> Diamed </td><td> E340901 </td></tr><tr><td> אטקס הנורה (מ&quot;ל 1) </td><td> דיג </td><td> 03-488-21 </td></tr><tr><td> שקופיות מיקרוסקופ זכוכית </td><td> דיג </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> קריסטל ויולט כתם (25 גרם) </td><td> דיג </td><td> C581-25 </td></tr><tr><td> מגבי רקמות חובת אור </td><td> VWR </td><td> 82003-820 </td></tr><tr><td> גליצרול </td><td> דיג </td><td> BP229-1 </td></tr><tr><td> כיסוי זכוכית מיקרוסקופ (22x30) </td><td> דיג </td><td> 12-544A </td></tr></tbody></table>

performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification

אמצעי מהיר של הערכת מצב פוריות במכרסמים הוא שימושי לא רק בחקר תפקוד רבייה אלא גם נדרש לייצור דגמים חדשים עכבר של מחלה וחקירות הוויסות הורמונלי של ניוון רקמות (או התחדשות) בעקבות אתגר פתולוגי. מחזור הרבייה העכברית (או ייחום חולל) מחולק ל 4 שלבים: proestrus, ייחום, metestrus וdiestrus. תנודות שהוגדרו במחזור הרמות של סטרואידי השחלות 17-β-אסטרדיול ופרוגסטרון, הורמונים וזקיק luteinizing הורמונים המגרים את הדמיון, ומעבר luteotropic הורמון פרולקטין האות דרך שלבי רבייה אלה. שינויים בטיפולוגיה תא בתוך תעלת הנרתיק העכברית לשקף האירועים אנדוקריניות הבסיסיים הללו. הערכה יומית של היחס היחסי של תאי בעלי גרעין אפיתל, תאי אפיתל קשקש cornified וLeukocytes הנוכחי במריחות נרתיק יכולה לשמש לזיהוי ייחום חולל עכברישלבים. מידת הפולשנות, לעומת זאת, הועסקה באיסוף דגימות אלה יכולים לשנות את מצב פוריות ולעורר תגובה דלקתית שיכול לבלבל את הערכת ציטולוגיה של מריחות. כאן, אנו מתארים פרוטוקול פשוט, לא פולשנית שיכול לשמש כדי לקבוע את השלב של מחזור הייחום חולל של עכבר נשי מבלי לשנות מחזור הרבייה שלה. אנחנו פירוט כיצד להבחין בין ארבעה שלבים של מחזור הייחום חולל על ידי איסוף וניתוח של טיפולוגיה תא השולט במריחות נרתיק ואנו מראים כיצד שינויים אלה יכולים להתפרש ביחס למעמד האנדוקרינית.

Watch this Scientific Journal Video about Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification at JoVE.com

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

כאן, אנו מתארים כיצד לזהות את השלב של הרבייה העכברית (proestrus, ייחום, metestrus, או diestrus) על ידי אוסף פשוט, לא פולשנית והערכת ציטולוגיה של דגימות למרוח בנרתיק. בנוסף, אנו מתארים כיצד ציטולוגית נרתיק משקפת רמות הורמונים במחזור שעשו את המעבר דרך מחזור הרבייה העכברי.

ביצוע שטיפת נרתיק, כתמים ויולטו קריסטל, והערכת ציטולוגית נרתיק לאחסון זמני מחזור הייחום חולל זיהוי עכבר

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

performing-vaginal-lavage-crystal-violet-staining-vaginal-cytological

Research

JoVE Journal

Biology

110.3K Views.  Neural Regeneration Laboratory and Ottawa Institute of Systems Biology. כאן, אנו מתארים כיצד לזהות את השלב של הרבייה העכברית (proestrus, ייחום, metestrus, או diestrus) על ידי אוסף פשוט, לא פולשנית והערכת ציטולוגיה של דגימות למרוח בנרתיק. בנוסף, אנו מתארים כיצד ציטולוגית נרתיק משקפת רמות הורמונים במחזור שעשו את המעבר דרך מחזור הרבייה העכברי.

Video: Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

A Reversible, Non-invasive Method for Airway Resistance Measurements and Bronchoalveolar Lavage Fluid Sampling in Mice

Airway hyperreactivity (AHR) measurements and bronchoalveolar lavage (BAL) fluid sampling are essential to experimental asthma models, but repeated procedures to obtain such measurements in the same animal are generally not feasible.  Here, we demonstrate protocols for obtaining from mice repeated measurements of AHR and bronchoalveolar lavage fluid samples.  Mice were challenged intranasally seven times over 14 days with a potent allergen or sham treated.  Prior to the initial challenge, and within 24 hours following each intranasal challenge, the same animals were anesthetized, orally intubated and mechanically ventilated.  AHR, assessed by comparing dose response curves of respiratory system resistance (RRS) induced by increasing intravenous doses of acetylcholine (Ach) chloride between sham and allergen-challenged animals, were determined.  Afterwards, and via the same intubation, the left lung was lavaged so that differential enumeration of airway cells could be performed.  These studies reveal that repeated measurements of AHR and BAL fluid collection are possible from the same animals and that maximal airway hyperresponsiveness and airway eosinophilia are achieved within 7-10 days of initiating allergen challenge.  This novel technique significantly reduces the number of mice required for longitudinal experimentation and is applicable to diverse rodent species, disease models and airway physiology instruments.  

Repeated measurements of rodent respiratory physiology and sampling of airway inflammatory cells are desirable, but generally not feasible. Here we describe a repeatable method for orally intubating mice that permits repeated measurements of airway hyperreactivity and sampling of airway inflammatory cells.

הפיך, לא פולשני שיטת ההתנגדות מדידות דרכי הנשימה ואת נוזל שטיפה ברונכואלוואולרית דגימה של עכברים

Airway hyperreactivity (AHR) measurements and bronchoalveolar lavage (BAL) fluid sampling are essential to experimental asthma models, but repeated ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves composed of a number of terminal duct lobular units made of secretory alveoli and converging ducts1. In mice, a similar architecture is observed at pregnancy in which ducts and alveoli are interspersed within the connective tissue stroma. The mouse mammary gland epithelium is a tree like system of ducts composed of two layers of cells, an inner layer of luminal cells surrounded by an outer layer of myoepithelial cells denoted by the confines of a basement membrane2. At birth, only a rudimental ductal tree is present, composed of a primary duct and 15-20 branches. Branch elongation and amplification start at the beginning of puberty, around 4 weeks old, under the influence of hormones3,4,5. At 10 weeks, most of the stroma is invaded by a complex system of ducts that will undergo cycles of branching and regression in each estrous cycle until pregnancy2. At the onset of pregnancy, a second phase of development begins, with the proliferation and differentiation of the epithelium to form grape-shaped milk secretory structures called alveoli6,7. Following parturition and throughout lactation, milk is produced by luminal secretory cells and stored within the lumen of alveoli. Oxytocin release, stimulated by a neural reflex induced by suckling of pups, induces synchronized contractions of the myoepithelial cells around the alveoli and along the ducts, allowing milk to be transported through the ducts to the nipple where it becomes available to the pups 8. Mammary gland development, differentiation and function are tightly orchestrated and require, not only interactions between the stroma and the epithelium, but also between myoepithelial and luminal cells within the epithelium9,10,11. Thereby, mutations in many genes implicated in these interactions may impair either ductal elongation during puberty or alveoli formation during early pregnancy, differentiation during late pregnancy and secretory activation leading to lactation12,13. In this article, we describe how to dissect mouse mammary glands and assess their development using whole mounts. We also demonstrate how to evaluate myoepithelial contractions and milk ejection using an ex-vivo oxytocin-based functional assay. The effect of a gene mutation on mammary gland development and function can thus be determined in situ by performing these two techniques in mutant and wild-type control mice.

This method describes how to dissect and assess mammary gland development and function from mice. Excised mammary glands are assessed for the degree of development using whole mount while milk ejection is evaluated using an oxytocin-based myoepithelial cell contraction assay.

הערכת התפתחות בלוטת החלב פונקציה ועל מודלים עכבר

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves ...

Live Cell Cycle Analysis of Drosophila Tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer and Vybrant DyeCycle Violet DNA Stain

Flow cytometry has been widely used to obtain information about DNA content in a population of cells, to infer relative percentages in different cell cycle phases. This technique has been successfully extended to the mitotic tissues of the model organism Drosophila melanogaster for genetic studies of cell cycle regulation in vivo. When coupled with cell-type specific fluorescent protein expression and genetic manipulations, one can obtain detailed information about effects on cell number, cell size and cell cycle phasing in vivo. However this live-cell method has relied on the use of the cell permeable Hoechst 33342 DNA-intercalating dye, limiting users to flow cytometers equipped with a UV laser. We have modified this protocol to use a newer live-cell DNA dye, Vybrant DyeCycle Violet, compatible with the more common violet 405nm laser. The protocol presented here allows for efficient cell cycle analysis coupled with cell type, relative cell size and cell number information, in a variety of Drosophila tissues. This protocol extends the useful cell cycle analysis technique for live Drosophila tissues to a small benchtop analyzer, the Attune Acoustic Focusing Cytometer, which can be run and maintained on a single-lab scale.

Live Cell Cycle Analysis of Drosophila Tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer and Vybrant DyeCycle Violet DNA Stain

A protocol for cell cycle analysis of live Drosophila tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer is described. This protocol simultaneously provides information about relative cell size, cell number, DNA content and cell type via lineage tracing or tissue specific expression of fluorescent proteins in vivo.

ניתוח מחזור תא חי של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; רקמות באמצעות התמקדות Cytometer אקוסטית לכוונן וה-DNA ויולט Vybrant DyeCycle כתם

Flow cytometry has  been widely used to obtain information about DNA content in a population of  cells, to infer relative percentages in different cell ...

Pyrosequencing for Microbial Identification and Characterization

Pyrosequencing is a versatile technique that facilitates microbial genome sequencing that can be used to identify bacterial species, discriminate bacterial strains and detect genetic mutations that confer resistance to anti-microbial agents. The advantages of pyrosequencing for microbiology applications include rapid and reliable high-throughput screening and accurate identification of microbes and microbial genome mutations. Pyrosequencing involves sequencing of DNA by synthesizing the complementary strand a single base at a time, while determining the specific nucleotide being incorporated during the synthesis reaction. The reaction occurs on immobilized single stranded template DNA where the four deoxyribonucleotides (dNTP) are added sequentially and the unincorporated dNTPs are enzymatically degraded before addition of the next dNTP to the synthesis reaction. Detection of the specific base incorporated into the template is monitored by generation of chemiluminescent signals. The order of dNTPs that produce the chemiluminescent signals determines the DNA sequence of the template. The real-time sequencing capability of pyrosequencing technology enables rapid microbial identification in a single assay. In addition, the pyrosequencing instrument, can analyze the full genetic diversity of anti-microbial drug resistance, including typing of SNPs, point mutations, insertions, and deletions, as well as quantification of multiple gene copies that may occur in some anti-microbial resistance patterns.

Pyrosequencing is a versatile technique that facilitates microbial genome sequencing that can be used to identify bacterial species, discriminate bacterial strains, and detect genetic mutations that confer resistance to anti-microbial agents. In this video, the procedure for microbial amplicon generation, amplicon pyrosequencing, and DNA sequence analysis will be demonstrated.

Pyrosequencing לזיהוי ואפיון חיידקים

Pyrosequencing is a versatile technique that facilitates microbial genome sequencing that can be used to identify bacterial species, discriminate ...

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both the female and male germ lines of Drosophila have contributed greatly to the current understanding of meiosis as well as stem cell biology. Excellent protocols are available in the literature for the isolation and imaging of Drosophila ovaries&#160;and testes3-12. Herein, methods for the dissection and preparation of Drosophila testes for microscopic analysis are described with an accompanying video demonstration. A protocol for isolating testes from the abdomen of adult males and preparing slides of live tissue for analysis by phase-contrast microscopy as well as a protocol for fixing and immunostaining testes for analysis by fluorescence microscopy are presented. These techniques can be applied in the characterization of Drosophila mutants that exhibit defects in spermatogenesis as well as in the visualization of subcellular localizations of proteins.

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Methods for isolating and preparing Drosophila testes samples (live and fixed) for imaging by phase-contrast and fluorescence microscopy are described herein.&#160;

ניתוח ציטולוגית של תאי זרע: הכנות בשידור חי והקבועות של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; אשכים

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both ...

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

Diversified species of Drosophila (fruit fly) provide opportunities to study mechanisms of development and genetic changes responsible for evolutionary changes. In particular, the adult stage is a rich source of morphological traits for interspecific comparison, including wing pigmentation comparison. To study developmental differences among species, detailed observation and appropriate staging are required for precise comparison. Here we describe protocols for staging of pupal periods and quantification of wing pigmentation in a polka-dotted fruit fly, Drosophila guttifera. First, we describe the method for detailed morphological observation and definition of pupal stages based on morphologies. This method includes a technique for removing the puparium, which is the outer chitinous case of the pupa, to enable detailed observation of pupal morphologies. Second, we describe the method for measuring the duration of defined pupal stages. Finally, we describe the method for quantification of wing pigmentation based on image analysis using digital images and ImageJ software. With these methods, we can establish a solid basis for comparing developmental processes of adult traits during pupal stages.

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

Protocols for staging pupal periods and measurement of wing pigmentation of Drosophila guttifera are described. Staging and quantification of pigmentation provide a solid basis for studying developmental mechanisms of adult traits and enable interspecific comparison of trait development.

שיטות מדידה של אגף פיגמנטציה של דרוזופילה guttifera ותקופות הגולמי הזמני

Diversified species of Drosophila (fruit fly) provide opportunities to study mechanisms of development and genetic changes responsible for evolutionary ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current blastocyst injection protocol. Here we report that a simple rotation of the embryo, and injection through Trans-Inner cell mass (TICM) increased the percentage of chimeric mice from 31% to 50%, with no additional equipment or further specialized training. 26 different inbred clones, and 35 total clones were injected over a period of 9 months. There was no significant difference in either pregnancy rate or recovery rate of embryos between traditional injection techniques and TICM. Therefore, without any major alteration in the injection process and a simple positioning of the blastocyst and injecting through the ICM, releasing the ES cells into the blastocoel cavity can potentially improve the quantity of chimeric production and subsequent germline transmission.

Here we present a protocol to increase chimera production without the use of new equipment. A simple orientation change of the embryo for injection can increase the number of embryos produced, and potentially reduce the timeline to germline transmission.

תא הטרנס-הפנימית המוני הזרקה של תאי גזע עובריים מוביל שיעור גבוה יותר של Chimerism

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved in humans and are associated with metabolic syndrome or other diseases. Examination of lipid accumulation in this organism can be carried out by fixative dyes or label-free methods. Fixative stains like Nile red and oil red O are inexpensive, reliable ways to quantitatively measure lipid levels and to qualitatively observe lipid distribution across tissues, respectively. Moreover, these stains allow for high-throughput screening of various lipid metabolism genes and pathways. Additionally, their hydrophobic nature facilitates lipid solubility, reduces interaction with surrounding tissues, and prevents dissociation into the solvent. Though these methods are effective at examining general lipid content, they do not provide detailed information about the chemical composition and diversity of lipid deposits. For these purposes, label-free methods such as GC-MS and CARS microscopy are better suited, their costs notwithstanding.

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Nile red staining of fixed Caenorhabditis elegans is a method for quantitative measurement of neutral lipid deposits, while oil red O staining facilitates qualitative assessment of lipid distribution among tissues.

כימות של השומנים לשפע, הערכה של השומנים הפצה Caenorhabditis elegans ע י הנילוס אדום אדום שמן מכתים O

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, uncoupling of metabolism to generate heat, and secretion of adipokines to regulate whole-body homeostasis and immune responses. Emerging research is identifying important regional differences in the developmental, molecular, and functional profiles of adipocytes located in discrete depots throughout the body. Different properties of the depots are medically relevant since metabolic diseases often demonstrate depot-specific effects. This protocol will provide investigators with a detailed anatomic atlas and dissection guide for the reproducible and accurate identification and excision of diverse mouse adipose tissues. Standardized dissection of discrete adipose depots will allow detailed comparisons of their molecular and metabolic characteristics and contributions to local and systemic pathologic states under various nutritional and environmental conditions.

Adipocytes exist in discrete depots and have diverse roles within their unique microenvironments. As regional differences in adipocyte character and function are uncovered, standardized identification and isolation of depots is crucial for advancement of the field. Herein, we present a detailed protocol for the excision of various mouse adipose depots.

זיהוי וניתוח של מחסני עכבר מגוונים

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...