שיטה זו יכולה לסייע לענות על שאלות מפתח בתחום הרבייה. וההינדוקרינולוגיה. והם ישימים לחקר תסמונת השחלות הפוליציסטיות או PCOS והיפראנדרוגניזם.
היתרון של טכנאי זה הוא שזה מקל על שחרור עקבי, אחיד, ארוך טווח של הורמונים בצורה יעילה ויקרה. JHUs טיפול בהליך יהיה פינג שו, טכנאי מהמעבדה שלי. להכנת דיהידרוטסטוסטרון או גלולה DHT, השתמש בסכין גילוח כדי לחתוך חתיכה 15 מילימטר של צינורות סיליקון.
ולהשתמש במזרק שלושה מיליליטר מצויד במחט קהה 20 מד להזריק שניים עד חמישה מילימטרים סיליקון דבק רפואי לקצה אחד של הצינור. אפשר לאמבטיות להתייבש בן לילה. ולבדוק אם יש בועות אוויר בקצה האטום.
לובש את ציוד המגן האישי המתאים לשפוך אבקת DHT לתוך סירת דרך פלסטיק בזרימה. להרשים את הקצה שנפתח של הצינור כתרים דבק לתוך האבקה. באמצעות מהדק נייר גדול ומיישר, לדכא את האבקה לתוך הצינור, עד DHT מגיע לעומק הניסוי המתאים.
ואז לאטום את הצד שנפתח של הצינור עם סיליקון לילה. למחרת בבוקר, לחתוך כל צד אטום כדי לקבל אורך שני מילימטר של סיליקון משני צידי DHT ולא כדורי שליטה DHT. לאחר מכן לאחסן את כדורי בצינור חרוט 50 מיליליטר עטוף בנייר כסף בטמפרטורת החדר עד שלושה חודשים.
עבור הדור מודל העכבר PCOS לצייד עד 20 כדורי DHT או שליטה נפרד 50 צינורות חרוט מיליליטר המכיל 30 מיליליטר של 0.9 אחוז מלוחים במשך 24 שעות ב 37 מעלות צלזיוס. למחרת, לאשר חוסר תגובה קמצוץ בוהן בעכבר נקבה בת חודשיים הרדמה ולהשתמש גזה סטרילית לנהל רציף Povidone-יוד ו 70 אחוז אתינול קרצוף לאזור הניתוח. לאחר מכן, לעשות חתך חמישה מילימטר דרך העור ליד הצוואר.
ולהשתמש טרוקאר 10 מד לעשות מנהרה 15 מילימטר בכיוון rostral. השתמש trocar להכניס גלולה dorsally לתוך המנהרה ולאטום את החתך עם דבק כירורגי. בקירוב ידני של קצות הפצע במדפים ולהשתמש במשיחות צחצוח עדינות כדי להחיל שלוש שכבות סרט דקות של דבק נוזלי לס"מ אחד מכל צד של קצות הפצע הנגדיים.
לאחר מכן מניחים את העכבר לבד בכלוב על כרית חום עם ניטור עד שליטה מלאה. החלפת גלולה כל ארבעה שבועות כדי לשמור על רמה קבועה של חשיפה אנדרוגן. שלושה ימים לאחר החדרת גלולה, להשתמש פיפטה p10 להשפריץ עשרה microliters של מלוחים סטריליים לתוך חלל הנרתיק ולהשתמש בקצה פיפטה כדי לשחזר מיד את מלוחים.
מורחים את דגימת תמיסת הים של התא הנרתיק על שקופית שכותרתה. ולאפשר לתמיסת מלח להתייבש בטמפרטורת החדר. תקן את השקופיות המיובשות במיכל של 100 אחוז אתינול למשך חמש דקות לפחות.
לאחר מכן תכתימו את השקופיות למשך דקה אחת כל אחת במאגר B ובאגר C מערכת כתמים מהירה. בסוף החיץ הדגירה C לשטוף את המגלשות עם מי ברז במשך שלוש שניות ולייבש אותם בטמפרטורת החדר. כדי לקבוע את המחזוריות ההיסטרוסית, הצג את השקופיות תחת המטרה פי עשרה של מיקרוסקופ אור.
ספור את הימים בכל שלב וחלק במספר הימים הכולל לחישוב אחוזי זמן בכל שלב. כדי לבדוק את עמידות הגלוקוז, 20 ימים DHT הכנסה, מהר את העכברים לילה. לשקול את העכברים למחרת בבוקר, ולהשתמש גלוקומטר ורצועות בדיקה כדי למדוד את רמת הגלוקוז בזיליקום של דם וריד הזנב.
להזריק את העכברים עם שני גרם לכל קילוגרם משקל גוף של 20 אחוז דקסטרוז. לאחר מכן למדוד את רמת הגלוקוז של דגימות דם וריד הזנב ב 15, 30, 60, 90, 120 דקות לאחר הממשל dextrose. כדי לרכוש צאצאים נקבה מ DHT הוכנסו עלמות, להזיז את העכבר הנשי כדי לבדוק בכלוב עם זכר פורה מוכח ביום 15, בעקבות החדרת גלולה.
לתעד את משקל הגוף של הגברת כל שבוע כדי לקבוע אם העכבר בהריון. ביום שלאחר הלידה 7, לטבול קצה lancet לתוך הדבק קעקוע ולסמן כל גור עם קעקוע על בוהן. שקלו את העכברים המסומנים כל שבעה ימים עד גיל 70.
בין תאריך לידה 12 ל -16, אוזן אגרוף העכברים כדי למספר אותם על פי המערכת כפי שמודגם באיור. כדי להבחין בין המינים, בדוק את הצד הגחון של כל עכבר מתויג. לנקבות יהיו פטמות נראות לעין.
כדי לאסוף דגימות דם עבור ניתוחים שונים במורד הזרם להשתמש Lancet כדי לאסוף את נפח הניסוי המשוער של דם בין תשע לעשר בבוקר על ידי דימום ורידים תת-מנודדים. וצנטריפוגה הדגימות כדי לאפשר איסוף סרום. ואז לאחסן את דגימות הסרומים ב 1.5 צינורות מיקרו צנטריפוגה מיליליטר במינוס 80 מעלות צלזיוס עד הניתוח שלהם.
כדי להעריך את גיל ההתבגרות בצאצאים הנשיים DHT, כל יום לאחר גמילת ביום שלאחר הלידה 21, לבדוק את פתיחת הנרתיק על ידי בדיקה חזותית. ולהשתמש בקליברים כדי למדוד את המרחק של פינו-איברי המין. למרות הערכים המוחלטים של סרום DHT שונים בין ספקטרומטריית מסה וניתוח אליסה, השינוי העממי היחסי של DHT לעומת הכנסה ללא DHT דומה הן מניסויים והן מניסויים שונים.
רמות DHT גדלים באופן משמעותי מן ההתעברות מראש דרך ההריון הן DHT ולא עכברים DHT. עם זאת, רמות DHT גבוהות פי שניים בעכברי DHT בהשוואה ללא עכברי DHT בנקודות זמן טרום תפיסה והן בנקודות זמן הריון. בנות DHT למבוגרים להפגין הבדלים בתפקוד הרבייה.
לדוגמה, שיבש מחזוריות eestrous בהשוואה למבוגרים אין בנות DHT חווה פעמים ארוכות באופן משמעותי ב- metestrus diestrus ופחות זמן פרו אסתרית ואסטרית. בעת ניסיון הליך זה חשוב לזכור להידגר כדורי במשך 24 שעות לפני שהם משמשים לשחרור אחיד של ההורמון. בעקבות הליך זה, ניתן גם לבחון את ההשלכות הרבייה והמטבוליות של חשיפה ל- DHT.
לאחר התפתחותו, טכנאי זה סלל את הדרך לחוקרים בתחום האנדוכרונולוגיה ואינטראקציות עובריות אימהיות לחקר PCOS וההשפעה של היפראנדרוגניזם ברמה נמוכה בעכברים נקביים. אל תשכח כי עבודה עם DHT יכול להיות מסוכן מאוד ואת אמצעי הזהירות כגון לבישת כפפות מסכה ומ המשקפיים, ועובד מכסה המנוע ביו בטיחות, תמיד צריך להילקח בעת ביצוע הליך זה.
