עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (מענק 08UDE017788-05). EBP גם מכיר תמיכת הקרן הספרדית למדע וטכנולוגיה (FECYT). המחברים מודים שונדה ט גיילורד וPratyusha Mogalisetti לקריאה ביקורתית של כתב היד.

<img alt="איור 1" width="600px" fo:content-width="5.5in" src="/files/ftp_upload/50726/50726fig1.jpg" /> איור 1. . זרימת עבודה ליישום מערך נוגדני microsphere סיבים אופטיים לאפיון רוק (1) מיקרוסכמות מקודדות באופן פנימי עם שני צבעי ניאון, (2) זעירים המקודדים משתנים חיצוני עם נוגדנים חד שבטיים חלבון ספציפי; (3) זעירים מהריבוב מעורבב, ו (4) שהופקד באופן אקראי בmicrowells חרוט בקצה הפרוקסימלי של צרור סיבים אופטיים; (5) חלבוני רוק הם נתפסו על ידי זעירים דרך immunoassay כריך, ו( 6) לכמת באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. 1. קידוד מיקרוסכמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל אירופיום נתרן (III) thenoyltrifluoroacetonate trihydrate (EU-TTA, MW = 869.54 g / mol) בבקבוקון זכוכית בצבע ענבר ולהכין פתרון מניות 200 מ&quot;מ בtetrahydrofuran (THF). מערבבים בעדינות על ידי pipetting; חזותי לאמתהצבע הוא נמס לגמרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל coumarin 30 (C30, MW = 347.41 g / mol) בבקבוקון זכוכית בצבע ענבר ולהכין פתרון מניות 12 מ&quot;מ בTHF. מערבבים בעדינות על ידי pipetting; ויזואלית לאמת את הצבע הוא נמס לגמרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 700 μl של פתרון עובד לכל סוג microsphere באמצעות פתרונות המניות וTHF להגיע ריכוז סופי מפורט בטבלה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא זעירים (10% w / v) מושעים גם על ידי vortexing, ולאחר מכן להעביר 60 השעיה μl לצינור microcentrifuge 1.5 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 600 μl PBS להשעיה microsphere ומערבבים על ידי pipetting 20x. צנטריפוגות הצינור ב 10,000 סל&quot;ד במשך 3 דקות ולהסיר את supernatant בזהירות. חזור על תהליך זה 2x אחר לשטוף זעירים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף 3x גלולה microsphere עם THF באמצעות הליך דומה כצעד 1.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ההשעיה microsphere / THF ב 10,000 סל&quot;ד במשך 3 דקות, להסיר את supernatant, מחדש להשעות גלולה ב 600 μlפתרון עובד מפורט בטבלה 1. מעבירים את התערובת לצינור microcentrifuge 1.5 מיליליטר חדש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאטום צינור microcentrifuge עם Parafilm ולמקם אותו על שייקר. לנער ב3,000 סל&quot;ד ו דגירה של 24 שעות, להגן מפני אור על ידי כיסוי ההתקנה באמצעות תיבה מכוסות בנייר אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ההשעיה microsphere ב 10,000 סל&quot;ד במשך 3 דקות לצורה כדורית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את פתרון צבע supernatant, לשטוף זעירים מ6X עם 600 מתנול μl ולאחר מכן עם 600 μl PBS המכיל Tween-20 0.01% נוספים 6x, כמתואר בשלב 1.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את microspheres המקודד ב600 μl PBS המכיל Tween-20 0.01% על 4 מעלות צלזיוס עד לשימוש, להגן מפני אור. </li></ol><table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם סוג microsphere: </td><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> 6 </strong&gt; </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Eu-TTA (מ&quot;מ) </td><td> 100 </td><td> 100 </td><td> 10 </td><td> 100 </td><td> 10 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> C30 (מ&quot;מ) </td><td></td><td> 1 </td><td> 1 </td><td> 6 </td><td> 6 </td><td> 1 </td><td> 6 </td></tr></tbody></table> טבלת 1. ריכוזים של האיחוד האירופי-TTA וC30 עובדים פתרונות. 2. הכנת מיקרוסכמות חלבון ללכוד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן MES חיץ [2 - חומצה (N-morpholino) ethanesulfonic (MES) 0.1 M, NaCl 0.9%, SDS 0.01%, pH 5.7] וחיץ PBS / SDS (סודיום פוספט 0.01 M, NaCl 0.154 M, SDS 0.01%, ה-pH 7.4) מראש בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 200 μl השעיה מקודדת microsphere (המכילה זעירים ~ 2 מ&quot;ג) לתוך צינור 1.5 microcentrifuge מיליליטר בטוח-Lock. חשוב להשתמש בסוג זה של צינור microcentrifuge כדי למנוע דליפה במהלך הדגירה בשלב 2.6. </li> &lt;li&gt; לשטוף זעירים עם MES 600 μl חיץ 3x כמתואר בשלב 1.5. הוסף 700 MES μl לגלולת microsphere ומערבבים היטב על ידי pipetting. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 0.105 גר &#39;/ מיליליטר 1-אתיל-3-[3-dimethylaminopropyl] carbodiimide הידרוכלוריד (EDC, MW = 191.7 g / mol) ו0.163 sulfo-N-hydroxysulfosuccinimide גר&#39; / מיליליטר (sulfo-NHS, MW = 217.13 g / mol) פתרונות במאגר MES בצינורות נפרדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 150 μl מוכן טרי טיפת פתרון EDC אחרת טיפה לתוך ההשעיה microsphere. EDC hydrolyzes מהר מאוד, ולכן הוא חיוני לשימוש פתרון טרי על מנת להבטיח את יעילות הקיבוע. מייד לאחר התוספת של EDC, להוסיף פתרון sulfo-NHS 150 μl לזעיר, ומערבב היטב על ידי pipetting ולאמת את ההשעיה היא הומוגנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שווי הצינור, לאטום אותו עם Parafilm, ולמקם אותו על שייקר. לנער ב1,500 סל&quot;ד 4 שעות, להגן מפני אור באמצעות תיבה מכוסות בנייר אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה suspens microsphereיון ב 10,000 סל&quot;ד במשך 3 דקות כדי ליצור גלולה ולהסיר את supernatant. שטוף זעירים עם 3x חיץ 500 μl PBS / SDS כפי שמתואר בשלב 1.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 200 μl חיץ PBS / SDS לגלולה, ומערבב היטב זעירים ולהעביר את הפתרון ל300 μl חיץ PBS / SDS המכיל 60 נוגדנים ללכוד מיקרוגרם. חשוב להשעות את גלולה microsphere הראשונה ולאחר מכן להוסיף את ההשעיה microsphere לתוך תמיסת הנוגדן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה את תערובת נוגדנים זעירים על ידי הטלטול ב1,500 סל&quot;ד במשך 4 שעות על שייקר, להגן מפני אור באמצעות תיבה מכוסות בנייר אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ההשעיה microsphere ב 10,000 סל&quot;ד במשך 3 דקות כדי ליצור גלולה ולהסיר את supernatant. שטוף זעירים עם StartingBlock μl 500 (TBS) חסימת 3x חיץ, כמתואר בשלב 1.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים זעירים עם 1 מיליליטר של TBS חיץ חסימת דגירה זעירים ב1,500 סל&quot;ד עבור שעה 1 על שייקר, להגן מפני אור באמצעות מפרצון תיבהאדום עם רדיד אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ההשעיה microsphere ב7,000 סל&quot;ד למשך 3 דקות כדי ליצור גלולה ולהסיר את supernatant. לשטוף 3x גלולה עם 500 TBS μl חסימת חיץ, כמתואר בשלב 1.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה פתרון microsphere ב7,000 סל&quot;ד למשך 3 דקות כדי ליצור גלולה ולהסיר את supernatant. הוסף 500 TBS μl חסימת חיץ ומערבבים על ידי pipetting. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את ההשעיה microsphere הותאם על 4 מעלות צלזיוס עד לשימוש, להגן מפני אור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תהליך זה כדי להפוך סוגים אחרים של זעירים באמצעות נוגדנים מתאימים. </li></ol> 3. Microarray עצרת סיבים אופטיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים 50 μl של כל סוג של החלבון זעירים מללכוד לתוך צינור microcentrifuge autoclaved חדש. צנטריפוגה המניה זעירים מהברכה ב7,000 סל&quot;ד למשך 3 דקות, ולהסיר את supernatant, כך שהנפח הנותר הוא כ 100 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבילות יד לחתוך סיבים אופטיים לכ 5 סנטימטר באורך ורצף ללטש את שני הקצוות במכונת ליטוש באמצעות 30, 15, 9, 6, 3, 1, 0.5, ו0.05 יהלומים מיקרומטר בגודל מלחך סרטים. Sonicate החבילה המלוטשת במי deionized במשך 2 דקות כדי להסיר את כל חלקיקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים הבר ערבוב מגנטי קטן לתוך צינור microcentrifuge 0.5 מיליליטר, להוסיף 400 μl של PBS ללא חלבון חיץ ומערבבים על צלחת ערבוב מגנטית ל30 דקות כדי להסיר בועות אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחרוט קצה אחד של צרור סיבים המלוטש בפתרון 0.025 N HCl ל150 שניות 10,16. מייד לצלול וsonicate הסוף חרוט במים deionized דקות 1. ייבש את צרורות סיבים עם אוויר דחוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר צרור סיבים על בעל סיבים ולחסום את הקצה חרוט ב, PBS החיץ נטול חלבון ללא בועה במשך שעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> aliquot μl הפקדת 1 של ההשעיה microsphere מאוחסן על הקצה חרוט של צרור הסיבים אופטיים. הגן על ההתקנה מהאור עם תיבה בנייר אלומיניום, ולחכות ל15 דקות. הנפח של ההשעיה תהיהלהקטין על ידי אידוי ולאלץ זעירים לתוך microwells חרוט. חזור על שלב טעינה זה עוד פעם אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במטלית ספוגה בתמיסת מדגם להסיר זעירים שאינם לכודים בmicrowells. Microarray החלבון מוכן לשימוש כעת. תלך מייד לשלב 4.1 לניתוח רוק. </li></ol> 4. ניתוח דגימת רוק באמצעות Microarray מיקרוסכמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 200 פתרון מדגם μl (100 supernatant רוק μl מדולל עם נפח שווה של StartingBlock T20 (PBS) חסימת חיץ. פרוטוקול האוסף לsupernatant רוק כבר פורסם בעבר 10). לתוך צינור microcentrifuge autoclaved 0.5 מיליליטר. טובלים את microarray החלבון טעון בסיבים לתוך התמיסה ולדגור על שייקר ב600 סל&quot;ד במשך 2 שעות, להגן מפני אור באמצעות תיבה מכוסות בנייר אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 20 מיליליטר לשטוף חיץ על ידי הוספת 200 μl 10% פתרון BSA ו200 μl 10% 20-Tween ל19.6 מיליליטר PBS, mix גם בעדינות על ידי רועד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים את microarray החלבון לתוך צינור microcentrifuge autoclaved חדש המכיל 200 לשטוף חיץ μl ולנער ב600 סל&quot;ד במשך 2 דקות. חזור על לשטוף 3x זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה microarray ב100 פתרון μl של קוקטייל של נוגדנים לזיהוי המכיל 5 מיקרוגרם / מיליליטר של אנטי VEGF, IP-10, IL-8, EGF, MMP-9, נוגדני זיהוי biotinylated IL-1β בStartingBlock T20 (PBS) חסימת חיץ ל30 דקות בטמפרטורת חדר על שייקר ב600 סל&quot;ד, להגן מפני אור באמצעות תיבה מכוסות בנייר אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף 3x microarray עם לשטוף חיץ כמתואר בשלב 4.3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה microarray ב200 μl של מיקרוגרם / המצומד R-phycoerythrin streptavidin מיליליטר (SAPE) פתרון 20 PBS ב 600 סל&quot;ד על שייקר ל10 דקות, להגן מפני אור באמצעות תיבה מכוסות בנייר אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את 5x microarray עם לשטוף חיץ כמתואר בשלב 4.3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את הקצה הדיסטלי של הסיבים (כלומר, הסוף משםמהזעיר מ) צרור עם ספוגית רוויה עם אתנול מוחלט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייבש את שני הקצוות של הסיבים עם אוויר דחוס. הר את הסיבים במיקרוסקופ epifluorescent ותדמית באמצעות הקצה הדיסטלי של הסיבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש תמונות microsphere המקבילות לאיחוד האירופי-TTA, C30, ועוצמות פליטת הקרינה SAPE. התקנת מסננים אופטיים וזמני חשיפה לדימות פלואורסצנטי של האיחוד האירופי-TTA, C30, וSAPE מתוארים בטבלה 2. </li></ol><table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> ערוץ </td><td> Eu-TTA </td><td> C30 </td><td> SAPE </td></tr><tr><td> Exciter </td><td> 365/10x </td><td> 350/50x </td><td> 546/10x </td></tr><tr><td> Beamsplitter </td><td> 525DCLP </td><td> 400DCLP </td><td> 560LP </td></tr><tr><td> פולט </td><td> 620/60m </td><td> 460/50m </td><td> 580/30m </td></tr><tr><td> זמן חשיפה </td><td> 1 שניות</td><td> 0.3 שניות </td><td> 1 שניות </td></tr></tbody></table> טבלה 2. פרמטרים לשלוש תמונות הניאון של microarray.

<ol>
	<li>Schena, M., Shalon, D., Davis, R. W., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+monitoring+of+gene-expression+patterns+with+a+complementary-DNA+microarray.">Quantitative monitoring of gene-expression patterns with a complementary-DNA microarray.</a> Science. 270, 467-470 (1995).</li><li>Schena, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Protein Microarray. , (2004).</li><li>Tam, S. W., Wiese, R., Lee, S., Gilmore, J., Kumble, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+analysis+of+eight+human+Th1/Th2+cytokines+using+microarrays.">Simultaneous analysis of eight human Th1/Th2 cytokines using microarrays.</a> J. Immunol. Methods. 261 (01), 157-165 (2002).</li><li>Wang, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Array-based+multiplexed+screening+and+quantitation+of+human+cytokines+and+chemokines.">Array-based multiplexed screening and quantitation of human cytokines and chemokines.</a> J. Proteome Res. 1, 337-343 (2002).</li><li>de Jager, W., Velthuis, t. e., Prakken, H., Kuis, B. J., W, G. T., Rijkers, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+detection+of+15+human+cytokines+in+a+single+sample+of+stimulated+peripheral+blood+mononuclear+cells.">Simultaneous detection of 15 human cytokines in a single sample of stimulated peripheral blood mononuclear cells.</a> Clin. Diagn. Lab. Immunol. 10, 133-139 (2003).</li><li>Lee, H. J., Nedelkov, D., Corn, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+plasmon+resonance+imaging+measurements+of+antibody+arrays+for+the+multiplexed+detection+of+low+molecular+weight+protein+biomarkers.">Surface plasmon resonance imaging measurements of antibody arrays for the multiplexed detection of low molecular weight protein biomarkers.</a> Anal. Chem. 78, 6504-6510 (2006).</li><li>Vignali, D. A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+particle-based+flow+cytometric+assays.">Multiplexed particle-based flow cytometric assays.</a> J. Immunol. Methods. 243 (00), 243-255 (2000).</li><li>Rissin, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-molecule+enzyme-linked+immunosorbent+assay+detects+serum+proteins+at+subfemtomolar+concentrations.">Single-molecule enzyme-linked immunosorbent assay detects serum proteins at subfemtomolar concentrations.</a> Nat. Biotechnol. 28, 595-599 (2010).</li><li>Zhang, H., Nie, S., Etson, C. M., Wang, R. M., Walt, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oil-sealed+femtoliter+fiber-optic+arrays+for+single+molecule+analysis.">Oil-sealed femtoliter fiber-optic arrays for single molecule analysis.</a> Lab Chip. 12, 2229-2239 (2012).</li><li>Blicharz, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiber-Optic+Microsphere-Based+Antibody+Array+for+the+Analysis+of+Inflammatory+Cytokines+in+Saliva.">Fiber-Optic Microsphere-Based Antibody Array for the Analysis of Inflammatory Cytokines in Saliva.</a> Anal. Chem. 81, 2106-2114 (2009).</li><li>Mukhopadhyay, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Devices+to+drool+for.">Devices to drool for.</a> Anal. Chem. 78, 4255-4259 (2006).</li><li>Wong, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+diagnostics+powered+by+nanotechnologies,+proteomics+and+genomics.">Salivary diagnostics powered by nanotechnologies, proteomics and genomics.</a> J. Am. Dent. Assoc. 137, 313-321 (2006).</li><li>Segal, A., Wong, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+diagnostics:+enhancing+disease+detection+and+making+medicine+better.">Salivary diagnostics: enhancing disease detection and making medicine better.</a> Eur. J. Dent. Educ. 12, 22-29 (2008).</li><li>St John, M. A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin+6+and+interleukin+8+as+potential+biomarkers+for+oral+cavity+and+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma.">Interleukin 6 and interleukin 8 as potential biomarkers for oral cavity and oropharyngeal squamous cell carcinoma.</a> Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 130, 929-935 (2004).</li><li>Herr, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+immunoassays+as+rapid+saliva-based+clinical+diagnostics.">Microfluidic immunoassays as rapid saliva-based clinical diagnostics.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 5268-5273 (2007).</li><li>Pantano, P., Walt, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ordered+nanowell+arrays.">Ordered nanowell arrays.</a> Chem. Mater. 8, 2832-2835 (1996).</li><li>Schena, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Protein Microarrays. , (2005).</li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

חוקרים צריכים לשים לב במיוחד לשלבים הבאים: לדיוק פענוח טוב יותר, יש צורך לאמת את microspheres הושעו הומוגנית בכל הדגירה ולשטוף צעדים במהלך הליך הקידוד זעירים. בנוסף, זעירים מהמקודדים צריכים להיות מוגן מפני אור לאורך כל הניסוי. לאחר תהליכי קידוד והאחסון נאותים, מצאנו כי דיו?...

מאז microarray הראשון שדווח על ידי מארק Schena ועמיתים לעבודה באמצע 1990, כלי רב עוצמה זה נוצל בתחומים רבים של מחקר ביולוגי 1. microarrays נוגדנים המסוגל בו זמנית גילוי חלבונים רבים בנוזלי אבחון, כגון דם, יש יישומים חשובים באבחון קליני והקרנת סמן 2-10. רוק, המכיל רבים מאותו analytes כמו דם, כבר נחשב כחלופה עדיפה על דם בגלל אוסף רוק הוא בטוח, לא פולשנית, ויכול להתבצע על ידי אנשי צוות רפואיים מאומנים מינימאלי 11-13. נכון לעכשיו, ניתוח חלבון מרובב באמצעות דגימות רוק הוא מוגבל על ידי מספר גורמים חשובים, כוללים הריכוז הנמוך של חומר אנליטי יעד 14 וטווח הריכוז הרחב של סמנים ביולוגיים שונים 15. . בזאת, אנחנו מדגימים את הניתוח של שישה חלבונים: גורם אנושי אנדותל כלי דם צמיחה (VEGF), חלבון מושרה אינטרפרון גאמא 10, metallopeptidase מטריצה ​​9 (MMP-9), ובטא interleukin-1 (IP-10, interleukin-8 (IL-8), גורם הגדילה באפידרמיס) (EGF) (IL-1β) . הביצועים של השיטה בתחילה אומת באמצעות פתרונות סטנדרטיים המהווים חלבוני אנליטי רקומביננטי וחסימת מאגר. דגימות רוק אמיתיות שנאספו מחולים במחלות נשימה כרוניות שונות, כמו גם ביקורת בריאה נבדקו גם עם ביצועים משביעי רצון. הפרוטוקול צריך להיות ישים analytes חלבון אחר ומבוסס מבחני microsphere אחרים. פלטפורמה זו מציעה יתרונות משמעותיים בתחום הכימיה אנליטית כפי שהיא מאפשרת ניתוח סימולטני מהיר, מדויק, ושחזור של ריכוזים נמוכים של כמה חלבונים עם מגוון רחב דינמי, אינטראקציות לא ספציפיים מינימליות, צריכת מדגם מופחתת, ועלות נמוכה בהשוואה ל Assay הצמוד אנזימים מקבילים immunosorbent (ELISA).

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eu-TTA dye</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AC42319-0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>THF</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34865-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amber glass vial</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-339-23B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coumarin 30 dye</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>546127-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microspheres</td>
			<td>Bangslabs</td>
			<td>PC05N/6698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS 10x concentrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5493-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>W4502-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tw-20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7949-100 ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BupH MES buffered saline</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>28390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>05030-500ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SS256-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe-lock microcentrifuge tube</td>
			<td>VWR labshop</td>
			<td>53511-997</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDC</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>22980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfo-NHS</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>24510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human VEGF capture antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB293</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human IP-10 capture antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human IL-8 capture antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human EGF capture antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human MMP-9 capture antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human IL-1&#946; capture antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 isotype control antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StartingBlock (TBS) buffer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>37542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl standard solution 1.0 N</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>318949-500 ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5 ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein-free (PBS) buffer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>37572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human VEGF 165</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>293-VE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human IP-10</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>266-IP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human IL-8</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>208-IL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human EGF</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>236-EG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human MMP-9</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>911-MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human IL-1&#946;</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>201-LB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StartingBlock T20 (PBS) buffer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>37539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blocker BSA in PBS</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>37525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated VEGF detection antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>BAF293</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated IP-10 detection antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>BAF266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated IL-8 detection antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>BAF208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated EGF detection antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>BAF236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated MMP-9 detection antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>BAF911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated IL-1&#946; detection antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>BAF201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin, R-phycoerythrin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>S-21388</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol (200 proof)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E7023-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

multiplexed fluorescent microarray for human salivary protein analysis using polymer microspheres and fiber-optic bundles

בזאת, אנו מתארים פרוטוקול למדידה בו זמנית שישה חלבונים המצויים ברוק באמצעות מערך נוגדנים מבוסס microsphere סיבים אופטיים. הטכנולוגיה חיסונית המערך מועסק משלבת את היתרונות של ייצור מערך השעיה מבוסס microsphere עם השימוש במיקרוסקופ פלואורסצנטי. כפי שתואר בפרוטוקול הווידאו, זעירים מפולימר 4.5 מיקרומטר זמין מסחרי היו מקודד לשבעה סוגים שונים, הנבדלים בריכוז של שני צבעי ניאון לכודים פיזי בתוך זעירים. Microspheres המקודד המכיל קבוצות carboxyl פני השטח שונו עם נוגדנים חד שבטיים ללכידה דרך הכימיה צימוד EDC / NHS. כדי להרכיב את microarray החלבון, הסוגים השונים של זעירים ממקודדים ופונקציונלית היו מעורבים ושהופקדו באופן אקראי ב4.5 מיקרומטר microwells, שנחרתו כימיים בקצה הפרוקסימלי של צרור סיבים אופטיים. צרור סיבים האופטיים שימש גם כמוביל והדמיה מ &#39;icrospheres. לאחר הרכבה, microarray שימש כדי ללכוד חלבונים בsupernatant הרוק שנאסף מהמרפאה. זיהוי התבסס על immunoassay כריך באמצעות תערובת של נוגדנים לזיהוי biotinylated לanalytes שונה עם בדיקה ניאון streptavidin מצומדות, R-phycoerythrin. Microarray היה צילם על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי בשלושה ערוצים שונים, שני לרישום microsphere ואחת לאות assay. Micrographs הקרינה אז היו מפוענח ונותח באמצעות אלגוריתם תוצרת בית בMATLAB.

תמונות הקרינה משלושה ערוצים מראים קטע קטן של צרור סיבים האופטיים מוצגות איורים 2A-C. תמונות אלה נותחו באמצעות אלגוריתם שנכתב ב MATLAB (כפי שמתוארת בפירוט רב יותר בסעיף הדיון). הניתוח מעסיק גם מידע מתמונת Eu-TTA הקידוד (איור 2 א) ואת תמונת קידוד C30 (איור 2)</...

Watch this Scientific Journal Video about Multiplexed Fluorescent Microarray for Human Salivary Protein Analysis Using Polymer Microspheres and Fiber-optic Bundles at JoVE.com

Multiplexed Fluorescent Microarray for Human Salivary Protein Analysis Using Polymer Microspheres and Fiber-optic Bundles

אנו מתארים הליך לאפיון חלבוני רוק באמצעות מערכי נוגדנים מבוססי microsphere מרובבים. נוגדנים חד שבטיים היו קשורים קוולנטית ל4.5 מיקרומטר זעירים מפולימר ניאון בקידוד צבע באמצעות הכימיה carbodiimide. Microspheres שונה הופקד בmicrowells סיבים אופטיים כדי למדוד את רמות חלבון ברוק באמצעות immunoassays כריך הקרינה.

הריבוב פלורסנט Microarray לניתוח חלבוני רוק אדם שימוש מיקרוסכמות פולימרים ואגדים של סיבים אופטיים

Herein, we describe a protocol for simultaneously measuring six proteins in saliva using a fiber-optic microsphere-based antibody array. The immuno-array ...

multiplexed-fluorescent-microarray-for-human-salivary-protein

Research

JoVE Journal

Chemistry

11.6K Views.  Tufts University.  אנו מתארים הליך לאפיון חלבוני רוק באמצעות מערכי נוגדנים מבוססי microsphere מרובבים. נוגדנים חד שבטיים היו קשורים קוולנטית ל4.5 מיקרומטר זעירים מפולימר ניאון בקידוד צבע באמצעות הכימיה carbodiimide. Microspheres שונה הופקד בmicrowells סיבים אופטיים כדי למדוד את ר...

Video: Multiplexed Fluorescent Microarray for Human Salivary Protein Analysis Using Polymer Microspheres and Fiber-optic Bundles

Gyroid Nickel Nanostructures from Diblock Copolymer Supramolecules

Nanoporous metal foams possess a unique combination of properties - they are catalytically active, thermally and electrically conductive, and furthermore, have high porosity, high surface-to-volume and strength-to-weight ratio. Unfortunately, common approaches for preparation of metallic nanostructures render materials with highly disordered architecture, which might have an adverse effect on their mechanical properties. Block copolymers have the ability to self-assemble into ordered nanostructures and can be applied as templates for the preparation of well-ordered metal nanofoams. Here we describe the application of a block copolymer-based supramolecular complex - polystyrene-block-poly(4-vinylpyridine)(pentadecylphenol) PS-b-P4VP(PDP) - as a precursor for well-ordered nickel nanofoam. The supramolecular complexes exhibit a phase behavior similar to conventional block copolymers and can self-assemble into the bicontinuous gyroid morphology with two PS networks placed in a P4VP(PDP) matrix. PDP can be dissolved in ethanol leading to the formation of a porous structure that can be backfilled with metal. Using electroless plating technique, nickel can be inserted into the template&#39;s channels. Finally, the remaining polymer can be removed via pyrolysis from the polymer/inorganic nanohybrid resulting in nanoporous nickel foam with inverse gyroid morphology.

This article describes the preparation of well-ordered nickel nanofoams via electroless metal deposition onto nanoporous templates obtained from self-assembled diblock copolymer based supramolecules.

ניקל ננו gyroid מSupramolecules קופולימר Diblock

Nanoporous metal foams possess a unique combination of properties - they are catalytically active, thermally and electrically conductive, and furthermore, ...

Preparation of Highly Porous Coordination Polymer Coatings on Macroporous Polymer Monoliths for Enhanced Enrichment of Phosphopeptides

We describe a protocol for the preparation of hybrid materials based on highly porous coordination polymer coatings on the internal surface of macroporous polymer monoliths. The developed approach is based on the preparation of a macroporous polymer containing carboxylic acid functional groups and the subsequent step-by-step solution-based controlled growth of a layer of a porous coordination polymer on the surface of the pores of the polymer monolith. The prepared metal-organic polymer hybrid has a high specific micropore surface area. The amount of iron(III) sites is enhanced through metal-organic coordination on the surface of the pores of the functional polymer support. The increase of metal sites is related to the number of iterations of the coating process.
The developed preparation scheme is easily adapted to a capillary column format. The functional porous polymer is prepared as a self-contained single-block porous monolith within the capillary, yielding a flow-through separation device with excellent flow permeability and modest back-pressure. The metal-organic polymer hybrid column showed excellent performance for the enrichment of phosphopeptides from digested proteins and their subsequent detection using matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry. The presented experimental protocol is highly versatile, and can be easily implemented to different organic polymer supports and coatings with a plethora of porous coordination polymers and metal-organic frameworks for multiple purification and/or separation applications.

A procedure for the preparation of porous hybrid separation media composed of a macroporous polymer monolith internally coated by a high surface area microporous coordination polymer is presented.

הכנת תיאום מאוד נקבובי פולימר ציפויים על מונוליתים פולימר Macroporous להעשרה משופרת של Phosphopeptides

We describe a protocol for the preparation of hybrid materials based on highly porous coordination polymer coatings on the internal surface of macroporous ...

Functionalization of Single-walled Carbon Nanotubes with Thermo-reversible Block Copolymers and Characterization by Small-angle Neutron Scattering

We demonstrate a protocol for single-walled carbon nanotube functionalization using thermo-sensitive PEO-PPO-PEO triblock copolymers in an aqueous solution. In a carbon nanotube/PEO105-PPO70-PEO105 (poloxamer 407) aqueous solution, the amphiphilic poloxamer 407 adsorbs onto the carbon nanotube surfaces and self-assembles into continuous layers, driven by intermolecular interactions between constituent molecules. The addition of 5-methylsalicylic acid changes the self-assembled structure from spherical-micellar to a cylindrical morphology. The fabricated poloxamer 407/carbon nanotube hybrid particles exhibit thermo-responsive structural features so that the density and thickness of poloxamer 407 layers are also reversibly controllable by varying temperature. The detailed structural properties of the poloxamer 407/carbon nanotube particles in suspension can be characterized by small-angle neutron scattering experiments and model fit analyses. The distinct curve shapes of the scattering intensities depending on temperature control or addition of aromatic additives are well described by a modified core-shell cylinder model consisting of a carbon nanotube core cylinder, a hydrophobic shell, and a hydrated polymer layer. This method can provide a simple but efficient way for the fabrication and in-situ characterization of carbon nanotube-based nano particles with a structure-tunable encapsulation.

A method for the functionalization of carbon nanotubes with structure-tunable polymeric encapsulation layers and structural characterization using small-angle neutron scattering is presented.

Functionalization של ננו-צינורות פחמן חד-דופנות עם קופולימרים לחסום Thermo-הפיך אפיון על ידי פיזור קטן זווית ניוטרון

We demonstrate a protocol for single-walled carbon nanotube functionalization using thermo-sensitive PEO-PPO-PEO triblock copolymers in an aqueous ...

The Preparation and Properties of Thermo-reversibly Cross-linked Rubber Via Diels-Alder Chemistry

A method for using Diels Alder thermo-reversible chemistry as cross-linking tool for rubber products is demonstrated. In this work, a commercial ethylene-propylene rubber, grafted with maleic anhydride, is thermo-reversibly cross-linked in two steps. The pending anhydride moieties are first modified with furfurylamine to graft furan groups to the rubber backbone. These pendant furan groups are then cross-linked with a bis-maleimide via a Diels-Alder coupling reaction. Both reactions can be performed under a broad range of experimental conditions and can easily be applied on a large scale. The material properties of the resulting Diels-Alder cross-linked rubbers are similar to a peroxide-cured ethylene/propylene/diene rubber (EPDM) reference. The cross-links break at elevated temperatures (&#62; 150 &#176;C) via the retro-Diels-Alder reaction and can be reformed by thermal annealing at lower temperatures (50-70 &#176;C). Reversibility of the system was proven with infrared spectroscopy, solubility tests and mechanical properties. Recyclability of the material was also shown in a practical way, i.e., by cutting a cross-linked sample into small parts and compression molding them into new samples displaying comparable mechanical properties, which is not possible for conventionally cross-linked rubbers.

A simple two-step approach involving rubber modification and cross-linking yields fully reworkable, elastic rubber products.

הכנת המאפיינים של Thermo-הפיך צולב הגומי Via דילס-אלדר לכימיה

A method for using Diels Alder thermo-reversible chemistry as cross-linking tool for rubber products is demonstrated. In this work, a commercial ...

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic acids containing three to six carbons), such as malate and citrate, are critical to the proper functioning of many biological systems, where they function in cellular respiration and can serve as indicators of cell health. In foods, organic acid content can have significant impact on taste, with increased SCCA levels resulting in a sour or &#34;acid&#34; taste. Because of this, methods for the rapid analysis of organic acid levels are of particular interest to the food and beverage industries. Unfortunately, however, most methods used for SCCA quantification are dependent on time-consuming protocols requiring the derivatization of samples with hazardous reagents, followed by costly chromatographic and/or mass spectrometric analyses. This method details an alternate method for the detection and quantification of organic acids from plant material and food samples using free zonal capillary electrophoresis (CZE), sometimes simply referred to as capillary electrophoresis (CE). CZE provides a cost-effective method for measuring SCCAs with a low limit of detection (0.005 mg/ml). This article details the extraction and quantification of SCCAs from plant samples. While the method provided focuses on measurement of SCCAs from coffee beans, the method provided can be applied to multiple plant-based food materials.

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

This article presents a method for the detection and quantification of organic acids from plant material using free zonal capillary electrophoresis. An example of the potential application of this method, determining the effects of a secondary fermentation on organic acid levels in coffee seeds, is provided.

באמצעות אלקטרופורזה נימים לכמת חומצות אורגניות מרקמות צמח: מקרה מבחן בחינה<em&gt; קפה ערביקה</em&gt; זרעים

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic ...

Microfluidic Dry-spinning and Characterization of Regenerated Silk Fibroin Fibers

The protocol demonstrates a method for mimicking the spinning process of silkworm. In the native spinning process, the contracting spinning duct enables the silk proteins to be compact and ordered by shearing and elongation forces. Here, a biomimetic microfluidic channel was designed to mimic the specific geometry of the spinning duct of the silkworm. Regenerated silk fibroin (RSF) spinning doped with high concentration, was extruded through the microchannel to dry-spin fibers at ambient temperature and pressure. In the post-treated process, the as-spun fibers were drawn and stored in ethanol aqueous solution. Synchrotron radiation wide-angle X-ray diffraction (SR-WAXD) technology was used to investigate the microstructure of single RSF fibers, which were fixed to a sample holder with the RSF fiber axis normal to the microbeam of the X-ray. The crystallinity, crystallite size, and crystalline orientation of the fiber were calculated from the WAXD data. The diffraction arcs near the equator of the two-dimensional WAXD pattern indicate that the post-treated RSF fiber has a high orientation degree.

A protocol for the microfluidic spinning and microstructure characterization of regenerated silk fibroin monofilament is presented.

Microfluidic יבש-ספינינג ואפיון של סיבי Fibroin משי מחדש

The protocol demonstrates a method for mimicking the spinning process of silkworm. In the native spinning process, the contracting spinning duct enables ...

Electrochemical Impedance Spectroscopy as a Tool for Electrochemical Rate Constant Estimation

Electrochemical impedance spectroscopy (EIS) was used for advanced characterization of organic electroactive compounds along with cyclic voltammetry (CV). In the case of fast reversible electrochemical processes, current is predominantly affected by the rate of diffusion, which is the slowest and limiting stage. EIS is a powerful technique that allows separate analysis of stages of charge transfer that have different AC frequency response. The capability of the method was used to extract the value of charge transfer resistance, which characterizes the rate of charge exchange on the electrode-solution interface. The application of this technique is broad, from biochemistry up to organic electronics. In this work, we are presenting the method of analysis of organic compounds for optoelectronic applications.

Electrochemical impedance spectroscopy (EIS) of species that undergo reversible oxidation or reduction in solution was used for determination of rate constants of oxidation or reduction.

עכבה אלקטרוכימי ספקטרוסקופיה ככלי הערכה מתמדת קצב אלקטרוכימי

Electrochemical impedance spectroscopy (EIS) was used for advanced characterization of organic electroactive compounds along with cyclic voltammetry (CV). ...

Time-resolved Photophysical Characterization of Triplet-harvesting Organic Compounds at an Oxygen-free Environment Using an iCCD Camera

Here, we present a sensible method of the acquisition and analysis of time-resolved photoluminescence using an ultrafast iCCD camera. This system enables the acquisition of photoluminescence spectra covering the time regime from nanoseconds up to 0.1 s. This enables us to follow the changes in the intensity (decay) and emission of the spectra over time. Using this method, it is possible to study diverse photophysical phenomena, such as the emission of phosphorescence, and the contributions of prompt and delayed fluorescence in molecules showing thermally activated delayed fluorescence (TADF). Remarkably, all spectra and decays are obtained in a single experiment. This can be done for solids (thin film, powder, crystal) and liquid samples, where the only limitations are the spectral sensitivity of the camera and the excitation wavelength (532 nm, 355 nm, 337 nm, and 266 nm). This technique is, thus, very important when investigating the excited state dynamics in organic emitters for their application in organic light-emitting diodes and other areas where triplet harvesting is of paramount importance. Since triplet states are strongly quenched by oxygen, emitters with efficient TADF luminescence, or those showing room temperature phosphorescence (RTP), must be correctly prepared in order to remove any dissolved oxygen from solutions and films. Otherwise, no long-lived emission will be observed. The method of degassing solid samples as presented in this work is basic and simple, but the degassing of liquid samples creates additional difficulties and is particularly interesting. A method of minimizing solvent loss and changing the sample concentration, while still enabling to remove oxygen in a very efficient and a repeatable manner, is presented in this work.

Here, we present a method of the spectroscopic characterization of organic molecules by means of time-resolved photoluminescence spectroscopy on the nanosecond-to-millisecond timescale in oxygen-free conditions. Methods to efficiently remove oxygen from the samples and, thus, limit luminescence quenching are also described.

זמן לפתור Photophysical אפיון של שלישיה-קציר תרכובות אורגניות ללא חמצן-הסביבה שימוש iCCD המצלמה

Here, we present a sensible method of the acquisition and analysis of time-resolved photoluminescence using an ultrafast iCCD camera. This system enables ...

Using Cyclic Voltammetry, UV-Vis-NIR, and EPR Spectroelectrochemistry to Analyze Organic Compounds

Cyclic voltammetry (CV) is a technique used in the analysis of organic compounds. When this technique is combined with electron paramagnetic resonance (EPR) or ultraviolet-visible and near-infrared (UV-Vis-NIR) spectroscopies, we obtain useful information such as electron affinity, ionization potential, band-gap energies, the type of charge carriers, and degradation information that can be used to synthesize stable organic electronic devices. In this study, we present electrochemical and spectroelectrochemical methods to analyze the processes occurring in active layers of an organic device as well as the generated charge carriers.

In this article, we describe electrochemical, electron paramagnetic resonance, and ultraviolet-visible and near-infrared spectroelectrochemical methods to analyze organic compounds for application in organic electronics.

באמצעות וולטמטריה ציקלית, UV-Vis-ניר EPR Spectroelectrochemistry לנתח תרכובות אורגניות

Cyclic voltammetry (CV) is a technique used in the analysis of organic compounds. When this technique is combined with electron paramagnetic resonance ...

Sample Preparation in Quartz Crystal Microbalance Measurements of Protein Adsorption and Polymer Mechanics

In this study, we present various examples of how thin film preparation for quartz crystal microbalance experiments informs the appropriate modeling of the data and determines which properties of the film can be quantified. The quartz crystal microbalance offers a uniquely sensitive platform for measuring fine changes in mass and/or mechanical properties of an applied film by observing the changes in mechanical resonance of a quartz crystal oscillating at high frequency. The advantages of this approach include its experimental versatility, ability to study changes in properties over a wide range of experimental time lengths, and the use of small sample sizes. We demonstrate that, based on the thickness and shear modulus of the layer deposited on the sensor, we can acquire different information from the material. Here, this concept is specifically exploited to display experimental parameters resulting in mass and viscoelastic calculations of adsorbed collagen on gold and polyelectrolyte complexes during swelling as a function of salt concentration.

The quartz crystal microbalance can provide accurate mass and viscoelastic properties for films in the micron or submicron range, which is relevant for investigations in biomedical and environmental sensing, coatings, and polymer science. The sample thickness influences which information can be obtained from the material in contact with the sensor.

הכנה לדוגמא במיקרומאזן קריסטל קוורץ מדידות של חלבון ומכניקה פולימר

In this study, we present various examples of how thin film preparation for quartz crystal microbalance experiments informs the appropriate modeling of ...