The research work presented in this manuscript was supported by a grant (HL107319 to Alan Daugherty and HL107326 to Lisa A. Cassis) from the National Institutes of Health of the United States of America. The content in this manuscript is solely the responsibility of the authors and does not necessarily represent the official views of the National Institutes of Health. The publication of this manuscript was sponsored by DURECT Corporation.

הצהרת אתיקה: מחקרי עכבר מבוצעים באישור של אוניברסיטת קנטקי המוסדית הטיפול בבעלי חי ועדת שימוש (מספר פרוטוקול IACUC: 2,006-0,009). עכברים מורדמים בסיום שימוש בקוקטייל מנת יתר של קטמין (~ 210 מ&quot;ג / קילוגרם) ו xylazine (~ 30 מ&quot;ג / קילוגרם). 1. חישוב סכום AngII הערה: פרוטוקול זה משתמש בדוגמא של עירוי של AngII (1000 ng / קילוגרם / דקה) במשך 4 שבועות בקולטן 4 LDL זכר - / - עכברים שקבלו תזונה מועשרת בשומן רווי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל ללמוד עכברים לפני חישוב סכום AngII הדרוש לעירוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בתבנית (טבלת 1) כדי לחשב את מסת AngII הדרושה לניסוי. השתמש ב&quot; שיעור ממוצע שאיבה &quot;שצוין בהוראה של משאבות כ&quot; קצב השאיבה&quot; בשלב 4 של התבנית. בתבנית, שיא שלבי 1 - 5 באופן ידני, ושלבים 6 - 10 מחושבים באופן אוטומטי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתבנית, מניח שעכברים ירוויחו 1 ​​גרם של משקל גוף במהלך העירוי של AngII 1000 ng / קילוגרם / דקה במשך 4 שבועות. הערה: כל עכבר עשוי להיות עלייה במשקל גוף שונה מאוד שיהיה תלויה במשתנים רבים, כגון זן עכבר ודיאטה. אנו משתמשים באופן שיגרתי &quot;0&quot; או &quot;1 גרם&quot;, המבוססים על הניסיון שלנו ממחקרים קודמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב נפח כולל של 300 μl של פתרון AngII לכל עכבר שכן כל משאבה דורשת כ -250 μl. </li></ol></li></ol> 2. פירוק AngII <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות lyophilized בקבוקוני AngII ב -20 ° C. לאזן בקבוקוני AngII לRT לפני הפתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את המסה מחושבת AngII (7.3 מ&quot;ג כפי שמוצג בטבלה 1) לתוך צינור פלסטיק סטרילי. הערה: לחברת מרק מדד, לא משתמש בצינורות זכוכית לפירוק מאז תמיסה מימית של AngII יש זיקה חזקה לכריכה לזכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיף את הנפח המחושב של תמיסת מלח סטרילית (1200 μיב) לתוך צינור הפלסטיק המכיל את AngII, כובע lyophilized, ומערבבים היטב על ידי היפוך עד הפתרון הוא ברור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספרי עכבר תווית # 1, # 2, # 3, ומס &#39;4 בצינורות פלסטיק סטרילי בודדים עם כובעים (0.5-1.5 מיליליטר). הכן פתרון AngII מתחת למכסת מנוע למינרית לכל עכבר המבוסס על משקל גוף כפי שמחושב בשלב 1.2 ולוח 1. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדוגמא, פיפטה 3.6 מלוח μl סטרילי לתוך צינור # 1, ולאחר מכן 296.4 μl פתרון AngII, ומערבבים היטב על ידי pipetting למעלה ולמטה בעדינות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספרי עכבר תווית על צינורות פלסטיק עם מכסים (4 מיליליטר; סטרילי). אלה ישמשו לדוגרים משאבות כמתואר בשלב 3.13. </li></ol> מילוי 3. אוסמוטי משאבה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג משאבות בשני חלקים נפרדים: הגוף העיקרי של המשאבה ואת זרימת המנחה (איור 1). לכל תיבה גופי 10 משאבה וזרימת מנהלים שהם עטופים בנפרד. רשום את המספר הרבה. הערה: תמיד ללבושכפפות כי שמנים הועברו מהידיים למעטפת החיצונית של משאבות תשפענה לרעה על תפקוד שאיבה. השתמש בכפפות סטריליות, גזה, צינורות, מחט מילוי, ולשקול סירות כדי להכין את המשאבות, כדי למנוע סיכון לזיהום מהשתל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח רק מספר גופי משאבה וזרימת מנהלים הדרושים למחקר, כמו אלה לא יכולים להיות מאוחסנים נפתחו פעם אחת. אם יש צורך יותר מ -10 משאבות, להבטיח שהמספרים הרבה משאבות זהים למחקר אחד, שכן יש לי משאבות ממספרים שונים בהרבה נפח שונה Mean מילוי ושאיבת דרג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול כל משאבה (כולל הן את הגוף העיקרי ולזרום מנחה), ושים לב למשקל עד 4 ספרות אחרי נקודה עשרונית (לדוגמא, 1.1443 גרם של # עכבר 1). משקל זה, המכונה &quot;משאבת משקל ריק&quot; בתבנית (טבלת 1), ישמש לחישוב יחס המלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף את מחט מילוי משאבה למזרק סטרילי 1 סמ&quot;ק ולמלא את המזרק עם פתרון AngII מכראוי בזהירותצינור פלסטיק ממוספר. חשוב להימנע מציור אוויר לתוך המזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את כל בועות האוויר בזהירות מהמזרק בעוד המחט ממוקמת מטה. שמור את המחט / המזרק בעמדה זו כדי למנוע את כניסתה של בועות לתוך המשאבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס בעדינות את מחט המילוי לתוך גוף המשאבה. לקדם את קצה המחט לתוך המשאבה. אל תנוח קצה המחט בחוזקה בחלק התחתון של המשאבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדחוף את בוכנת המזרק לאט למלא את המשאבה עם פתרון AngII. צל כהה בתוך המשאבה מציין את רמת המילוי. מילוי הנפח הוא כ 246 μl, להוראות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפסיק למלא את המשאבה ולהסיר את המחט בזהירות בהקדם חרוז של נוזל עולה מתוך המשאבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס זרימת מנחה למשאבה דרך החור בחלק העליון של גוף משאבה עד שלא ראה פער בין ראש זרימת המנחה והעליון של גוף המשאבה (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קלטי moderatאו לגוף המשאבה מובילה לכמה נוזל דולף מפתיחת זרימת המנחה. למחוק בזהירות את כל נוזלים נוספים שייתכן שדלפו במהלך ההשמה של מנהלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול משאבה מלאה. רשום את המשקל תחת &quot;משאבת משקל מלא&quot; בתבנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב יחס תדלוק (%) = (משאבת משקל &quot;המלא&quot; - &quot;ריק&quot;) x 1000 / מתכוונים למלא נפח x 100. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב יחס תדלוק כפי שצוין בטבלה 1. באופן אידיאלי, מילוי יחס צריכה להיות שווה או גדול מ -100%. משאבת מילוי אם יחס המילוי הוא &lt;95% (להפליל שבועות האוויר יכול להיות נוכח במשאבה). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים משאבה מולא לתוך צינור שכותרתו 4 מיליליטר (שלב 2.5) עם ראש המנחה פונה כלפי מעלה. להוסיף נפח מספק של תמיסת מלח סטרילית כדי לכסות את המשאבה. שמור משאבה בצינור של תמיסת מלח עד השתלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינורות מקום באינקובטור 37 מעלות צלזיוס. דגירה משאבות O / N (שעה לפחות 12) כדי לאפשר תחול חלקי, ולאחר מכן להשתיל לעכברים. משאבהING של AngII מתחיל כ 24 שעות לאחר השתלה, המאפשרת לעכברים להתאושש מניתוח לפני כל לחץ פוטנציאלי הנובע במהלך עירוי AngII. </li></ol> 4. הכנה להשתלת משאבה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיטוי (מצב הכבידה, מחזור יבש, 15 דקות) גזה, צמר גפן וכלים כירורגיים כוללים מספריים, hemostat, מלקחיים, סיכות, ומהדק יום לפחות 1 לפני הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחדר הליך, להכין מאדה עבור הרדמה באמצעות isoflurane. פתח את וילונות סטרילי בזרימה למינרית, ולמקם את חרטומו להרדמת isoflurane. הנח בטאדין, 70% אתנול, מים סטריליים, מעקר את החרוז, handrub חיטוי, מטליות, גזה, ומשאבות מולא בברדס למינרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דון מסיכה וגלימה, ואז לפתוח וילון חיצוני במנדף למינרית בידיים נקיות. לשים על כפפות סטריליות ולפתוח את חבילה בתוך סטרילי. </li></ol> 5. נוהל כירורגי של השרשה המשאבה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר מקום בצ&#39;אם אינדוקציהתהמר עם זרם isoflurane בקצב זרימה של 1.5 - 2%. צג העכבר על 2 נוספות - 3 דקות אחרי שכיבה. לגלח אזור בערך בגודל של רבע, מעבר לכתף השמאל או ימין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר במנדף למינרית, עם אפה מיושר עם קונוס מחובר ליצוא isoflurane (איור 2 א). מניחים את ראשו של העכבר לכיוון היד הדומיננטית של המנתח. השתמש במשחת וטרינר בעיניו של העכבר כדי למנוע יובש ואילו בהרדמה. ודא שיש לו את העכבר אין תגובה לגירוי של כאב לפני הניתוח. לדוגמא, תגובת דוושה היא אינדיקטור טוב לכאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספוגית ולנגב אזור מגולח עם בטאדין ואחריו שלושה מגבונים עם 70% אתנול. דון או לשנות כפפות סטריליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באזמל כירורגי לעשות חתך סנטימטר ~ 1 מאחורי האוזן על כתפו של הרגל הקדמית. חתך זה צריך להיות בניצב לזנב. השתמש טיפול לחתוך רקמות רק העור ולא בבסיס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> forc שמירתeps ביד אחת כדי לפתוח חתך, ולהשתמש ביד השנייה כדי להפוך את מנהרה תת עורית מתחת לעור באמצעות hemostat (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקדם קצה hemostat כלפי הזנב, וליצור כיס למשאבה. המטרה זו מושגת על ידי פתיחת הלסתות של hemostat בזהירות מתחת לעור כדי לפתוח את כיס. למשוך את hemostat מחתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס משאבה לתוך החתך עם ראש המנחה בעמדה האחורית של העכבר (איור 2 ג). דחף בעדינות את המשאבה לגמרי לתוך הכיס. צריכה להיות מספיק מקום פנוי כדי לסגור את הפצע עם שום מתח או מתיחה של העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שמשאבה הוכנסה, בתקיפות לצבוט את שני הצדדים של החתך, מיישר כדי שהקצוות נפגשים, ואת מקום קליפים פצע 1 או 2 כדי לסגור (איור 2 ד). בדוק את אתר החתך על מנת להבטיח שיש סגירת הפצע מלאה, וכי המשאבה אינה לוחצת ישירות באתר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל ידוקאין שמנת אקטואלית(4% WT / WT) עם עכבר swab.Remove הכותנה נקי מהחרטום, ולמקם אותו על כרית חימום עד שחוזר להכרה. אחרי שהתאושש, העכבר חזר לכלוב שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח מכשירי ניתוח למעקר חרוז במשך 10 שניות בין עכברים. לאפשר מכשירים להתקרר לפני השימוש. כפפות נקיות עם handrub חיטוי בין עכברים. לפקח על כל העכברים עד להחלמה מלאה מושגת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג עכברים מקרוב לאחר הניתוח. הזרק בולוס של תמיסת מלח סטרילית (0.2-0.3 מיליליטר) תת עורי אם עכבר מראה סימנים של מצוקה, התייבשות או ירידה במשקל נראית לעין. שימו לב עכברים לפחות פעמיים ביום במהלך 10 הימים הראשונים, ולפחות פעם אחת בכל יום לאחר מכן. לבצע נתיחה לאחר מוות באופן מיידי אם כל עכברים מתים במהלך עירוי AngII. הסר קליפים פצע בין 7 - 14 ימים לאחר הניתוח. </li></ol> 6. קציר, תיקון, ניקוי, והדמיה של Aortas <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גזור לפתוח את בית חזה העכבר וחללים בטן ventrally, לחתוך אופn עלייה ימנית, perfuse עם מי מלח דרך החדר השמאלי של הלב כדי להסיר דם באב העורקים, ואז לקצור את אב העורקים 27. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח aortas נקטף בצינורות פלסטיק המכיל לפחות 3 מיליליטר של paraformaldehyde 4% או 10% פורמלין שנאגרו ניטראלי עבור 24 - 48 שעות 27. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר רקמות adventitial בזהירות. אב העורקים פין בשעווה שחורה עם סיכות. לרכוש תמונות של אב העורקים באותה הגדלה. כולל שליט בכל תמונה לכיול, כפי שמוצג באיור 3. </li></ol> 7. En פנים הדמיה של Aortas <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותך אב העורקים פתוחים לאורך ציר העקמומיות החיצונית ופנימית של קשת אב העורקים, ולחתוך ענפים עיקריים פתוחים כולל innominate, עורק תרדמה שמאלי, ועורק subclavian שמאל. אב העורקים פין שטוח עם adventitial החיצוני הנחה סמוך לשעווה השחורה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש en פנים תמונה של פני השטח של intimal אב העורקים בהגדלה זהה. כולל שליט בכל תמונה לכיול, כמופעn באיור 4. </li></ol>

<ol>
	<li>Pyo, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+disruption+of+matrix+metalloproteinase-9+(gelatinase+B)+suppresses+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms.">Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> J Clin Invest. 105 (11), 1641-1649 (2000).</li><li>Chiou, A. C., Chiu, B., Pearce, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+aortic+aneurysm+produced+by+periarterial+application+of+calcium+chloride.">Murine aortic aneurysm produced by periarterial application of calcium chloride.</a> J Surg Res. 99 (2), 371-376 (2001).</li><li>Daugherty, A., Cassis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+angiotensin+II+infusion+promotes+atherogenesis+in+low+density+lipoprotein+receptor+-/-+mice.">Chronic angiotensin II infusion promotes atherogenesis in low density lipoprotein receptor -/- mice.</a> Ann NY Acad Sci. 892 (1), 108-118 (1999).</li><li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+promotes+atherosclerotic+lesions+and+aneurysms+in+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Angiotensin II promotes atherosclerotic lesions and aneurysms in apolipoprotein E-deficient mice.</a> J Clin Invest. 105 (11), 1605-1612 (2000).</li><li>Deng, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urokinase-type+plasminogen+activator+plays+a+critical+role+in+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysm.">Urokinase-type plasminogen activator plays a critical role in angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm.</a> Circ Res. 92 (5), 510-517 (2003).</li><li>King, V. L., Trivedi, D., Gitlin, J. M., Loftin, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+cyclooxygenase-2+inhibition+with+celecoxib+decreases+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysm+formation+in+mice.">Selective cyclooxygenase-2 inhibition with celecoxib decreases angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm formation in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 26 (5), 1137-1143 (2006).</li><li>Uchida, H. A., Poduri, A., Subramanian, V., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urokinase-type+plasminogen+activator+deficiency+in+bone+marrow-derived+cells+augments+rupture+of+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms.">Urokinase-type plasminogen activator deficiency in bone marrow-derived cells augments rupture of angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 31 (12), 2845-2852 (2011).</li><li>Wang, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+increases+urokinase-type+plasminogen+activator+expression+and+induces+aneurysm+in+the+abdominal+aorta+of+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Angiotensin II increases urokinase-type plasminogen activator expression and induces aneurysm in the abdominal aorta of apolipoprotein E-deficient mice.</a> Am J Pathol. 159 (4), 1455-1464 (2001).</li><li>Bruemmer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II-accelerated+atherosclerosis+and+aneurysm+formation+is+attenuated+in+osteopontin-deficient+mice.">Angiotensin II-accelerated atherosclerosis and aneurysm formation is attenuated in osteopontin-deficient mice.</a> J Clin Invest. 112 (9), 1318-1331 (2003).</li><li>Gavrila, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitamin+E+inhibits+abdominal+aortic+aneurysm+formation+in+angiotensin+II-infused+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Vitamin E inhibits abdominal aortic aneurysm formation in angiotensin II-infused apolipoprotein E-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (8), 1671-1677 (2005).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgE+actions+on+CD4++T+cells,+mast+cells,+and+macrophages+participate+in+the+pathogenesis+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms.">IgE actions on CD4+ T cells, mast cells, and macrophages participate in the pathogenesis of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> EMBO Mol Med. 6 (7), 952-969 (2014).</li><li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regression+of+abdominal+aortic+aneurysm+by+inhibition+of+c-Jun+N-terminal+kinase.">Regression of abdominal aortic aneurysm by inhibition of c-Jun N-terminal kinase.</a> Nat Med. 11 (12), 1330-1338 (2005).</li><li>Usui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammasome+activation+by+mitochondrial+oxidative+stress+in+macrophages+leads+to+the+development+of+angiotensin+II-induced+aortic+aneurysm.">Inflammasome activation by mitochondrial oxidative stress in macrophages leads to the development of angiotensin II-induced aortic aneurysm.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (1), 127-136 (2015).</li><li>Mellak, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+mobilizes+spleen+monocytes+to+promote+the+development+of+abdominal+aortic+aneurysm+in+apoe-/-+mice.">Angiotensin II mobilizes spleen monocytes to promote the development of abdominal aortic aneurysm in apoe-/- mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (2), 378-388 (2015).</li><li>Krishna, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+antagonist+of+thrombospondin-1+promotes+abdominal+aortic+aneurysm+progression+in+the+angiotensin+II-infused+apolipoprotein-E-deficient+mouse.">Peptide antagonist of thrombospondin-1 promotes abdominal aortic aneurysm progression in the angiotensin II-infused apolipoprotein-E-deficient mouse.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (2), 389-398 (2015).</li><li>Norman, P. E., Curci, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+effects+of+tobacco+smoke+on+the+pathogenesis+of+aortic+aneurysm.">Understanding the effects of tobacco smoke on the pathogenesis of aortic aneurysm.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (7), 1473-1477 (2013).</li><li>Daugherty, A., Powell, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+highlights+of+ATVB:+aneurysms.">Recent highlights of ATVB: aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34 (4), 691-694 (2014).</li><li>Liu, J., Daugherty, A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+and+abdominal+aortic+aneurysms:+an+update.">Angiotensin II and abdominal aortic aneurysms: an update.</a> Curr Pharm Design. , (2015).</li><li>Rateri, D. L., Howatt, D. A., Moorleghen, J. J., Charnigo, R., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+infusion+of+angiotensin+II+in+apoE(-/-)+mice+promotes+macrophage+recruitment+with+continued+expansion+of+abdominal+aortic+aneurysm.">Prolonged infusion of angiotensin II in apoE(-/-) mice promotes macrophage recruitment with continued expansion of abdominal aortic aneurysm.</a> Am J Pathol. 179 (3), 1542-1548 (2011).</li><li>Saraff, K., Babamusta, F., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aortic+dissection+precedes+formation+of+aneurysms+and+atherosclerosis+in+angiotensin+II-infused,+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Aortic dissection precedes formation of aneurysms and atherosclerosis in angiotensin II-infused, apolipoprotein E-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (9), 1621-1626 (2003).</li><li>Daugherty, A., Cassis, L. A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+pathologies+of+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms.">Complex pathologies of angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms.</a> J Zhejiang Univ Sci B. 12 (8), 624-628 (2011).</li><li>Daugherty, A., Rateri, D. L., Charo, I. F., Owens, A. P., Howatt, D. A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+infusion+promotes+ascending+aortic+aneurysms:+attenuation+by+CCR2+deficiency+in+apoE-/-+mice.">Angiotensin II infusion promotes ascending aortic aneurysms: attenuation by CCR2 deficiency in apoE-/- mice.</a> Clin Sci (Lond). 118 (11), 681-689 (2010).</li><li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell-specific+deficiency+of+Ang+II+type+1a+receptors+attenuates+Ang+II-induced+ascending+aortic+aneurysms+in+LDL+receptor-/-+mice).">Endothelial cell-specific deficiency of Ang II type 1a receptors attenuates Ang II-induced ascending aortic aneurysms in LDL receptor-/- mice).</a> Circ Res. 108 (5), 574-581 (2011).</li><li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+endothelial+or+smooth+muscle+cell-specific+angiotensin+II+type+1a+receptors+does+not+influence+aortic+aneurysms+or+atherosclerosis+in+LDL+receptor+deficient+mice.">Depletion of endothelial or smooth muscle cell-specific angiotensin II type 1a receptors does not influence aortic aneurysms or atherosclerosis in LDL receptor deficient mice.</a> PLoS One. 7 (12), 10-1371 (2012).</li><li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+induces+region-specific+medial+disruption+during+evolution+of+ascending+aortic+aneurysms.">Angiotensin II induces region-specific medial disruption during evolution of ascending aortic aneurysms.</a> Am J Pathol. 184 (9), 2586-2595 (2014).</li><li>Davis, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+cell+deletion+of+low-density+lipoprotein+receptor-related+protein+1+augments+angiotensin+II-induced+superior+mesenteric+arterial+and+ascending+aortic+aneurysms.">Smooth muscle cell deletion of low-density lipoprotein receptor-related protein 1 augments angiotensin II-induced superior mesenteric arterial and ascending aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (1), 155-162 (2015).</li><li>Daugherty, A., Rateri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+experimental+designs+for+atherosclerosis+studies+in+mice.">Development of experimental designs for atherosclerosis studies in mice.</a> Methods. 36 (2), 129-138 (2005).</li><li>Henriques, T. A., Huang, J., D'Souza, S. S., Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orchidectomy,+but+not+ovariectomy,+regulates+angiotensin+II-induced+vascular+diseases+in+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Orchidectomy, but not ovariectomy, regulates angiotensin II-induced vascular diseases in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Endocrinology. 145 (8), 3866-3872 (2004).</li><li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonism+of+AT2+receptors+augments+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms+and+atherosclerosis.">Antagonism of AT2 receptors augments angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms and atherosclerosis.</a> Br J Pharmacol. 134 (4), 865-870 (2001).</li><li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+of+receptor-associated+protein+attenuates+angiotensin+II-induced+atherosclerosis+in+hypercholesterolemic+mice+without+influencing+abdominal+aortic+aneurysms.">Deficiency of receptor-associated protein attenuates angiotensin II-induced atherosclerosis in hypercholesterolemic mice without influencing abdominal aortic aneurysms.</a> Atherosclerosis. 220 (2), 375-380 (2011).</li><li>Daugherty, A., Rateri, D., Lu, H., Balakrishnan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+blood+pressure+in+mice+using+volume+pressure+recording,+a+tail-cuff+method.">Measuring blood pressure in mice using volume pressure recording, a tail-cuff method.</a> J Vis Exp. (27), e1291 (2009).</li></ol>

פרסומו של מאמר זה הוא בחסות Alzet.

משאבות אוסמוטי מתן תת עורי AngII היא גישה שגרתית לגרימת פרצת אב העורקים בעכברים. בהתבסס על נתונים ממעבדות רבות, היו ממצאים עקביים שזו שיטה אמינה לשחזור ללמוד שני AAAS 3,4 ותעש 22-26 בעכברים. לכן, מודל עכבר זה נחשב מודל שמשחזר כמה תכונות של מפרצת אב העורקים אנושית ומספק תובנות מכניסטית למחלות הרסניות אלה. בעוד הזדקנות היא גורם סיכון לAAAS בבני אדם, זה לא נחקר באופן שיטתי לAAAS המושרה AngII בעכברים. עם זאת, נראה שכיחות וחומרה של AAAS המושרה AngII דומות בעכברים בגיל 8-48 שבועות 4,5,7. נכון לעכשיו, יש רק מעט מחקרים שדיווחו תעש מושרה AngII בעכברים בגיל 8-24 שבועות 22-26, שלא הראו הבדלים הקשורים לגיל נראות לעין על היווצרות TAA. יש נקבות עכברים שכיחות נמוכה בהרבה של AAAS מאשר עכברי זכרי חדורי AngII 4,28. זה גם ראוי לציין כי השכיחות של AAAS המושרה AngII היא הרבה יותר גבוהה בהיפר מאשר עכברי normo-cholesterolemic, אשר הוא יותר מ -50% לעומת פחות מ -30%, בהתאמה. בנוסף, קרע של אב העורקים הוא תכוף (כ 10 - 30%) בשני עכברי normo- וhypercholesterolemic במהלך עירוי AngII. יש עכברים שקבלו תזונה רגילה או מערבית, אפקטים מקסימאלי בAAA - עירוי של AngII בשיעור של 1,000 ng / קילוגרם / דקה לעכברים hypercholesterolemic, כגון קולט LDL - / - עכברים שהוזנו בדיאטה מערבית או אפוליפופרוטאין (apoE) - / פיתוח 3,4,29. קצב עירוי זה הוא אופטימלי עבור מחקר שבו מניפולציה גן של עניין בעכברי hypercholesterolemic צפוי להפחית AAAS. אם מניפולציה בעכברי hypercholesterolemic צפויה להגדיל AAAS, מומלץ להשרות AngII בשיעור של 500 ng / קילוגרם / דקה או נמוכה 30. בניגוד לAAAS, אין הדגמהעמותת nstrated בין מין זכר או היפרכולסטרולמיה ותעש המושרה AngII 25. עם זאת, בדומה לAAAS, אם מניפולציה של גן של העניין צפוי להגדיל את תעש, אנו ממליצים קצב עירוי נמוך מ -1,000 ng / קילוגרם / דקה לעירוי AngII. כמו כן, חשוב לדעת כי שכיחות וחומרה של פרצת אב העורקים הנגרמת AngII להשתנות בין עכברים בודדים ובין מחקרים. אם עכברים לא לפתח מפרצת אב העורקים, אפשרות אחת היא שפוטנציאל AngII אולי לא נמסר בהצלחה לעכברים. לאימות של קצב עירוי גבוה של AngII, כגון 1,000 ng / קילוגרם / דקה, מדידת לחץ דם מומלצת לפני, ובמהלך, עירוי AngII באמצעות שיטת זנב שרוול לא פולשנית 31. עירוי AngII בשיעור של 1,000 ng / קילוגרם / דקה מגבירה את לחץ דם הסיסטולי בעכברים. כמו כן, ריכוזי רנין פלזמה ניתן למדוד בעירוי או בסיום AngII שכן יש AngII משוב שלילי על rהפרשת enin. לכן, עירוי AngII מוביל לירידה בריכוזי רנין פלזמה. אם יש עכבר חדורי AngII לא פתולוגיות לכאורה אב העורקים, אין עלייה בלחץ דם, ולא ירידה של ריכוז רנין הפלזמה, זה מצביע על כך שAngII לא נמסר ביעילות באמצעות משאבת מיני האוסמוטי המושתל. אנו ממליצים על הסרת העכבר הזה מהמחקר. כמו כן, חשוב לשים לב שחלק מעכברים לא לפתח מפרצת אב העורקים למרות לחצי דם סיסטולי מוגברים וירידת ריכוזי רנין פלזמה. עכברים אלו צריכים להישאר במחקר. לסיכום, עירוי AngII מושגת על ידי השתלה תת עורית באמצעות משאבות האוסמוטי לגרום לפרצת אב העורקים בעכברים. שיטה זו מספקת AngII כל הזמן בקצב מוגדר לתקופות ייעודיות המשמשות ללמוד שני AAAS ותעש.

מפרצת של אב העורקים להציג התרחבות luminal קבועה של אב העורקים שמבשר קרע ובדרך כלל מוביל למוות. מחלה זו מתרחשת בשני אזורי אב העורקים בבטן ובית חזה, הנקראים כמו מפרצת אב העורקים בבטן (AAAS) ופרצת אב העורקים החזי (תעש), בהתאמה. בשל הבנה חלקית של מנגנונים מולקולריים ותהליכי pathophysiologic, אין טיפול רפואי מוכח שיכול למנוע התפשטות או קרע של שני סוגי פרצות אב העורקים. מכיוון שקשה לרכוש דגימות מטופל ולבצע ניסויים בבני אדם באופן ישיר, מחקר מתמקד בהגדרת מנגנונים של AAAS כבר להסיק לעתים קרובות ממודלים של בעלי החיים. מודל חיה נפוץ הוא עירוי תת עורי של אנגיוטנסין II (AngII) לעכברים. בהשוואה לגישות כירורגיות אחרות לגרימת AAAS בעכברים, כגון זלוף תוך אב העורקים אלסטט או יישום פרי-אב העורקים של סידן כלורי הדורשים 1,2 laparotomy, metho זהד אינו מחייב כניסה לחלל הגוף ודורש מומחיות כירורגית מינימאלית 3,4. עירוי תת עורי של AngII באמצעות משאבות האוסמוטי לגרום AAAS בתחילה דווח בצפיפות הנמוכה-ליפופרוטאין קולט (LDL) - / - עכברים שקבלו תזונה מועשרת בשומן רווי 3, ולאחר מכן בapoE - / - עכברים שקבלו תזונה רגילה מעבדה 4. גם מחקרים שנעשה לאחרונה הראו כי רבים AngII גורם AAAS בעכברי normolipidemic 5-7. הגישה של AngII יציקת הוחל לגרום AAAS ולחקור מנגנונים מולקולריים כמו גם פיתוח אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות (למשל, 5-15) מאז מודל זה משחזר תכונות רבות נצפו בAAAS האנושי. לדוגמא, גורמי סיכון של AAAS האנושי כגון עישון, הזדקנות, ומין זכר גם להגדיל AAAS המושרה AngII בעכברי 16,17. העמותה של היפרכולסטרולמיה עם AAAS בבני אדם דורשת הבהרה. עם זאת, יש לה להיותen עקבי שהיפרכולסטרולמיה מרחיבה AngII-induced AAAS בעכברים 18. פתולוגיות של AAAS המושרה AngII בעכברים הטרוגניים מאוד ומתאפיינות בחדירה עמוקה מקרופאג, השפלה קולגן, היווצרות פקקה ורזולוציה, וneovascularization 19-21. בניגוד למיקום הנפוץ ביותר infrarenal אב העורקים של AAAS בבני אדם, הנגרם על-AngII AAAS בעכברים להתרחש באזור אב העורקים suprarenal. תכונה בכל מקום אחר של AAAS המושרה AngII היא ההפסקה המדיאלי transmural, שהוביל לפקק transmural. לא ברור אם קרע אלסטין transmural מתרחש בבני אדם מאז ההתפתחות פתולוגית של AAAS בבני אדם לא נחקרה באופן בלעדי בשל חוסר רקמות aneurysmal מהשלבים מוקדמים יותר. עירוי AngII לעכברים גם מוביל להרחבה עמוקה של אזור אב העורקים החזי, שהוא בעיקר מוגבלת לאב העורקים עולים שהוא האזור הנפוץ ביותר עבור תעש בבני אדם <sעד&gt; 19,22-26. בדומה לAAAS המושרה AngII, תעש מושרה במהלך עירוי AngII גם לשחזר תכונות רבות של תעש אנושי 25. עם זאת, בניגוד לAAAS המושרה AngII, תעש מושרה AngII אינם משויך היפרכולסטרולמיה ואין לי הבדלים בין המינים. המטרה הכוללת של עירוי תת עורי AngII לעכברים היא ללמוד תכונות פתולוגיים ומנגנונים מולקולריים של AAAS ותעש.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="711">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Angiotensin II</td>
			<td>Bachem</td>
			<td>H-1705</td>
			<td>compound used to induce aortic aneurysms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alzet Osmotic Pumps</td>
			<td>DURECT Corporation</td>
			<td>Alzet Model 2004</td>
			<td>feasible for 28-day infusion in mice weighed &#62; 20 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saturated fat-enriched diet</td>
			<td>Harlan Teklad</td>
			<td>TD.88137</td>
			<td>42% calories/calories to stimulate hypercholesterolemia in LDL receptor -/- mice</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

subcutaneous angiotensin ii infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice

Osmotic pumps continuously deliver compounds at a constant rate into small animals. This article introduces a standard protocol used to induce aortic aneurysms via subcutaneous infusion of angiotensin II (AngII) from implanted osmotic pumps. This protocol includes calculation of AngII amount and dissolution, osmotic pump filling, implantation of osmotic pumps subcutaneously, observation after pump implantation, and harvest of aortas to visualize aortic aneurysms in mice. Subcutaneous infusion of AngII through osmotic pumps following this protocol is a reliable and reproducible technique to induce both abdominal and thoracic aortic aneurysms in mice. Infusion durations range from a few days to several months based on the purpose of the study. AngII 1,000 ng/kg/min is sufficient to provide maximal effects on abdominal aortic aneurysmal formation in male hypercholesterolemic mouse models such as apolipoprotein E deficient or low-density lipoprotein receptor deficient mice. Incidence of abdominal aortic aneurysms induced by AngII infusion via osmotic pumps is 5 - 10 times lower in female hypercholesterolemic mice and also lower in both genders of normocholesterolemic mice. In contrast, AngII-induced thoracic aortic aneurysms in mice are not hypercholesterolemia or gender-dependent. Importantly, multiple features of this mouse model recapitulate those of human aortic aneurysms.

4 קולט LDL זכר - / - העכברים שתוארו בסעיף הפרוטוקול היו מורדמים לאחר 4 שבועות של עירוי AngII. Aortas נקצרו, ניקה, וצלם לדמיין dilations אב העורקים. כפי שניתן לראות באיור 3, יש לי aortas מספר מאפיינים שונים כולל הרחבה של אזור suprarenal (AAAS; איור 3 א), הרחבת האזור עולה (תעש; איור 3), או הרחבה של שני האזורים (נוכחות של שני AAAS ותעש; איור 3 ג), ואילו במורפולוגיה עכבר אחד היה גס נורמלי (איור 3D). התרחבות של אב העורקים בבטן היא לכמת על ידי מדידת הרוחב המקסימאלי vivo לשעבר של אזור suprarenal, כפי שמודגם על ידי הקו האדום באיור 3 א. כדי למדוד עולה התרחבות אב העורקים, aortas נחתכו פתוח והצמיד כפי שמוצג באיור 4. שטח פן intimal נמדדו באזור עולה אב העורקים (האזור המוקף הקווים אדומים דואר באיור 4 א) ללכמת תעש. שליט נכלל בכל תמונה כדי לתקנן מדידות, כפי שמוצג בשני האיורים 3 ו -4. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/53191/53191fig1.jpg" /> . 1. תמונת נציג איור של משאבה האוסמוטי מולא כל משאבה מכילה שני חלקים נפרדים: גוף עיקרי וזרימת מנחה. לאחר מילוי גוף המשאבה עם AngII, זרימת המנחה מוכנסת לאטום את המשאבה. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/53191/53191fig2.jpg" /> תהליך איור 2. ניתוח השתלת משאבה () עכבר ממוקם בברדס למינרית עם חרטום שהוא ברציפות שחרור isoflurane וחמצן.; Hemostat ישר (ב) מוכנס לתוך החתך בעור כדי להפוך את המנהרה תת עורית; (ג) המשאבה מוחדרת דרך<html> חתך בעור בעדינות; החתך בעור (ד &#39;) הוא מהודק לאחר כניסה משאבה. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/53191/53191fig3.jpg" /> 3. תמונות איור אבי העורקים (לשעבר vivo) מעכברי חדורי AngII ng AngII 1000 / קילוגרם / דקה הייתה חדור בקולטן ה- LDL זכר -. / - עכברים במשך 28 ימים. () AAAS מלווה פקקת; קו אדום (2.05 מ&quot;מ) מציג את המדידה של רוחב המקסימאלי של אב העורקים באזור suprarenal. (ב) עולה התרחבות אב העורקים (TAA) עם אב העורקים בבטן רגיל גס; (ג) dilations עמוק בשני עולה ואזורי אב העורקים suprarenal (תעש וAAAS); אב העורקים נורמלים בעליל ללא התרחבות ניכרת של עולה או אזור אב העורקים suprarenal (ד &#39;). 4.jpg &quot;/&gt; איור 4. תמונות פנים צמודים של אזורי אב העורקים החזי מעכברי חדורי AngII AngII 1000 ng / קילוגרם / דקה הייתה חדור בקולטן ה- LDL זכר -. / - עכברים במשך 28 ימים. השטח המתואר על ידי קו אדום מייצג את אזור אב העורקים עולה לרבות חלק מקשת אב העורקים. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> 1 </td><td colspan="2"> מינון הנדרש </td><td></td><td> 1,000 </td><td colspan="2"> ng / קילוגרם / דקה </td><td></td></tr><tr><td> 2 </td><td colspan="3"> התחל משקל גוף (עכבר הגדול ביותר) </td><td> 24.8 </td><td> ז </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3 </td><td colspan="3"> עלייה במשקל גוף מוערך סה&quot;כ </td><td> 1 </td><td> ז </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4 </td><td> שיעור שאיבה </td><td></td><td></td><td> 0.25 </td><td> μl / hr </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 5 </td><td colspan="2"> נוmber של עכברים </td><td></td><td> 4 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 6 </td><td colspan="2"> מנה לשעה לבעלי חיים </td><td></td><td> 1,518 </td><td> ng </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 7 </td><td> קונצרט כלשהו צורך </td><td></td><td></td><td> 6072 </td><td> ng / μl </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 8 </td><td colspan="2"> לפתרון ul 300 </td><td></td><td> 1.82 </td><td colspan="2"> מ&quot;ג / 300 μl </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td colspan="2"> דרושי פתרון </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 9 </td><td colspan="2"> AngII סה&quot;כ (מ&quot;ג) </td><td></td><td> 7.3 </td><td> מ&quot;ג </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10 </td><td colspan="2"> מומס בתמיסת מלח ו160 #; </td><td></td><td> 1,200 </td><td> μl </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> עכבר </td><td> משקל גוף </td><td> גורם לדילול </td><td colspan="2"> נפח (μl) </td><td colspan="2"> משאבת משקל (גרם) </td><td> יחס מולא </td></tr><tr><td> # </td><td> (ז) </td><td></td><td> AngII </td><td> מלוח </td><td> ריק </td><td> פָּטוּם </td><td> (%) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 24.5 </td><td> 1.0 </td><td> 296.4 </td><td> 3.6 </td><td> 1.1443 </td><td> 1.3877 </td><td> 99 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 23.0 </td><td> 0.9 </td><td> 278.2 </td><td> 21.8 </td><td> 1.1677 </td><td> 1.4145 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 24.8 </td><td> 1.0 </td><td> 300.0 </td><td> 0.0 </td><td> 1.1438 </td><td> 1.3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 21.8 </td><td> 0.9 </td><td> 263.7 </td><td> 36.3 </td><td> 1.1438 </td><td> 1.3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="7"> גורם לדילול = משקל גוף של משקל עכבר / גוף של העכבר הגדול </td><td></td></tr></tbody></table><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> עכבר </td><td> משקל גוף </td><td> גורם לדילול </td><td colspan="2"> נפח (μl) </td><td colspan="2"> משאבת משקל (גרם) </td><td> יחס מולא </td></tr><tr><td> # </td><td> (ז) </td><td></td><td> AngII </td><td> מלוח </td><td> ריק </td><td> פָּטוּם </td><td> (%) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 24.5 </td><td> 1.0 </td><td> 296.4 </td><td> 3.6 </td><td> 1.1443 </td><td> 1.3877 </td><td> 99 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 23.0 </td><td> 0.9 </td><td> 278.2 </td><td> 21.8 </td><td> 1.1677 </td><td> 1.4145 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 24.8 </td><td> 1.0 </td><td> 300.0 </td><td> 0.0 </td><td> 1.1438 </td><td> 1.3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 21.8 </td><td> 0.9 </td><td> 263.7 </td><td> 36.3 </td><td> 1.1438 </td><td> 1.3904 </td><td> 100 </td></tr></tbody></table> טבלה 1: חישוב לעירוי של 28 ימים באמצעות משאבות האוסמוטי.

Watch this Scientific Journal Video about Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice at JoVE.com

Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice

השתלה תת עורית של משאבות האוסמוטי מספקת גישה נוחה למסירה ממושכת ועקבית של תרכובות. גישה זו נעשתה שימוש נרחב כדי ללמוד שני פרצות אב העורקים בבטן ובית חזה בעכברים.

תת עורית אנגיוטנסין II עירוי באמצעות אוסמוטי משאבות גורם אבי העורקים מפרצת בעכברים

Osmotic pumps continuously deliver compounds at a constant rate into small animals.  This article introduces a standard protocol used to induce aortic ...

subcutaneous-angiotensin-ii-infusion-using-osmotic-pumps-induces

Research

JoVE Journal

Medicine

36.7K Views.  University of Kentucky.  השתלה תת עורית של משאבות האוסמוטי מספקת גישה נוחה למסירה ממושכת ועקבית של תרכובות. גישה זו נעשתה שימוש נרחב כדי ללמוד שני פרצות אב העורקים בבטן ובית חזה בעכברים. 

Video: Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. This is largely true, but there are a number of important principles that can reduce the difficulty of these procedures and enhance reproducibility. Orthotopic aortic transplantation is an excellent procedure in which to learn these principles because it involves only two end-to-end anastomoses, but requires good suturing technique and handling of the vessels for consistent success. This procedure begins with the procurement of a length of abdominal aorta from a donor animal, followed by division of the native aorta in the recipient. The procured aorta is then placed between the divided ends of the recipient aorta and sutured into place using end-to-end anastomoses. To accomplish this objective successfully requires a high degree of concentration, good tools, a steady hand, and an appreciation of how easily the vasculature of a mouse can be damaged, resulting in thrombosis. Learning these important principles is what occupies most of the beginner's time when learning microsurgery in small rodents. Throughout this protocol, we refer to these important points. This model can be used to study vascular disease in a variety of different experimental systems1-8. In the context shown here, it is most often used for the study of post-transplant vascular disease, a common long-term complication of solid organ transplantation in which intimal hyperplasia occurs within the allograft. The primary advantage of the model is that it facilitates quantitative morphometric analyses and the transplanted vessel lies contiguous to the endogenous vessel, which can serve as an additional control9. The technique shown here is most often used for mice weighing 18-25 grams. We have accumulated most of our experience using the C57BL/6J, BALB/cJ, and C3H/HeJ strains.

We describe a technique in which a section of the abdominal aorta from a mouse is transplanted orthotopically to just below the renal arteries in an allogeneic or syngeneic recipient. This technique can be useful in studies in which transplantation of large arteries of uniform size is deemed advantageous.

השתלת אב עורקים בעכברי orthotopic לחקר מחלת כלי דם

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

In vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate the human disease provide a valuable platform for research into disease pathophysiology and for the preclinical evaluation of novel therapies. We present a variety of methods to generate subcutaneous or orthotopic human HCC xenografts in immunodeficient mice that could be utilized in a variety of research applications. With a focus on the use of primary tumor tissue from patients undergoing surgical resection as a starting point, we describe the preparation of cell suspensions or tumor fragments for xenografting. We describe specific techniques to xenograft these tissues i) subcutaneously; or ii) intrahepatically, either by direct implantation of tumor cells or fragments into the liver, or indirectly by injection of cells into the mouse spleen. We also describe the use of partial resection of the native mouse liver at the time of xenografting as a strategy to induce a state of active liver regeneration in the recipient mouse that may facilitate the intrahepatic engraftment of primary human tumor cells. The expected results of these techniques are illustrated. The protocols described have been validated using primary human HCC samples and xenografts, which typically perform less robustly than the well-established human HCC cell lines that are widely used and frequently cited in the literature. In comparison with cell lines, we discuss factors which may contribute to the relatively low chance of primary HCC engraftment in xenotransplantation models and comment on technical issues that may influence the kinetics of xenograft growth. We also suggest methods that should be applied to ensure that xenografts obtained accurately resemble parent HCC tissues.

Human tumor xenografts in immunodeficient mice are valuable tools to study cancer biology. Specific protocols to generate subcutaneous and intrahepatic xenografts from human hepatocellular carcinoma cells or tumor fragments are described. Liver regeneration induced by partial hepatectomy in recipient mice is presented as a strategy to facilitate intrahepatic engraftment.

דור של תת עורי וintrahepatic אדם xenografts קרצינומה hepatocellular בעכברים עם מערכת חיסון חלשים

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Measuring Ascending Aortic Stiffness In Vivo in Mice Using Ultrasound

We present a protocol for measuring in vivo aortic stiffness in mice using high-resolution ultrasound imaging. Aortic diameter is measured by ultrasound and aortic blood pressure is measured invasively with a solid-state pressure catheter. Blood pressure is raised then lowered incrementally by intravenous infusion of vasoactive drugs phenylephrine and sodium nitroprusside. Aortic diameter is measured for each pressure step to characterize the pressure-diameter relationship of the ascending aorta. Stiffness indices derived from the pressure-diameter relationship can be calculated from the data collected. Calculation of arterial compliance is described in this protocol.
This technique can be used to investigate mechanisms underlying increased aortic stiffness associated with cardiovascular disease and aging. The technique produces a physiologically relevant measure of stiffness compared to ex vivo approaches because physiological influences on aortic stiffness are incorporated in the measurement. The primary limitation of this technique is the measurement error introduced from the movement of the aorta during the cardiac cycle. This motion can be compensated by adjusting the location of the probe with the aortic movement as well as making multiple measurements of the aortic pressure-diameter relationship and expanding the experimental group size.

Measuring Ascending Aortic Stiffness In Vivo in Mice Using Ultrasound

We describe a technique for measuring aortic stiffness from its pressure-diameter relationship in vivo in mice. Aortic diameter is recorded by ultrasound and aortic pressure is measured invasively with a solid-state pressure catheter. Blood pressure is changed incrementally and the resulting diameter is measured.

מדידה עולה אבי העורקים נוקשים<em&gt; In vivo</em&gt; בעכברים באמצעות אולטראסאונד

We present a protocol for measuring in vivo aortic stiffness in mice using high-resolution ultrasound imaging. Aortic diameter is measured by ultrasound ...

Neurodegeneration in an Animal Model of Chronic Amyloid-beta Oligomer Infusion Is Counteracted by Antibody Treatment Infused with Osmotic Pumps

Decline in hippocampal-dependent explicit memory (memory for facts and events) is one of the earliest clinical symptom of Alzheimer&#39;s disease (AD). It is well established that synapse loss and ensuing neurodegeneration are the best predictors for memory impairments in AD. Latest studies have emphasized the neurotoxic role of soluble amyloid-beta oligomers (A&#946;o) that begin to accumulate in the human brain approximately 10 to 15 yr before the clinical symptoms become apparent. Many reports indicate that soluble A&#946;o correlate with memory deficits in AD models and humans. The A&#946;o-induced neurodegeneration observed in neuronal and brain slice cultures has been more challenging to reproduce in many animal models. The model of repeated A&#946;o infusions shown here overcome this issue and allow addressing two key domains for developing new disease modifying therapies: identify biological markers to diagnose early AD, and determine the molecular mechanisms underpinning A&#946;o-induced memory deficits at the onset of AD. Since soluble A&#946;o aggregate relatively fast into insoluble A&#946; fibrils that correlate poorly with the clinical state of patients, soluble A&#946;o are prepared freshly and injected once per day during six days to produce marked cell death in the hippocampus. We used cannula specially design for simultaneous infusions of A&#946;o and continuous infusion of A&#946;o antibody (6E10) in the hippocampus using osmotic pumps. This innovative in vivo method can now be used in preclinical studies to validate the efficiency of new AD therapies that might prevent the deposition and neurotoxicity of A&#946;o in pre-dementia patients.

To study the effects of A&#946;o in vivo, we developed a model based on repeated hippocampal infusions of soluble A&#946;o coupled with continuous infusion of A&#946;o antibody (6E10) in the hippocampus using osmotic pumps to counteract the neurotoxic effect of A&#946;o.

מוחיים במודל חיה של עמילואיד-ביתא כרונית oligomer העירוי נוטרלה על ידי נוגדן טיפול חדורי משאבות אוסמוטי

Decline in hippocampal-dependent explicit memory (memory for facts and events) is one of the earliest clinical symptom of Alzheimer&#39;s disease (AD). It ...

Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard open-chest transverse aortic constriction (TAC). Although transverse aortic constriction is a highly functional method for the induction of high pressure in the left ventricle, it is a more difficult and lengthy procedure due to its use of artificial ventilation with tracheal intubation. TAC is oftentimes also less survivable, as the newer method, MTAC, neither requires the cutting of the ribs and intercostal muscles nor tracheal intubation with a ventilation setup. In MTAC, as opposed to a thoracotomy to access to the chest cavity, the aortic arch is reached through a midline incision in the anterior neck. The thyroid is pulled back to reveal the sternal notch. The sternum is subsequently cut down to the second rib level, and the aortic arch is reached simply by separating the connective tissues and thymus. From there, a suture can be wrapped around the arch and tied with a spacer, and then the sternal cut and skin can be closed. MTAC is a much faster and less invasive way to induce left ventricular hypertension and enables the possibility for high-throughput studies. The success of the constriction can be verified using high-frequency trans-thoracic echocardiography, particularly color Doppler and pulsed-wave Doppler, to determine the flow velocities of the aortic arch and left and right carotid arteries, the dimension of the blood vessels, and the left ventricular function and morphology. A successful constriction will also trigger significant histopathological changes, such as cardiac muscle cell hypertrophy with interstitial and perivascular fibrosis. Here, the procedure of MTAC is described, demonstrating how the resulting flow changes in the carotid arteries can be examined with echocardiography, gross morphology, and histopathological changes in the heart.

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) conserves the essentials of regular transverse aortic constriction (TAC) while eliminating the use of a ventilator with tracheal intubation. It proves to be a highly desirable method for high-throughput studies on left ventricular overload, particularly in translational studies.

פולשנית רוחבי אבי העורקים התכווצות עכברים

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to perform a partial thoracotomy to visualize the transverse aortic arch. However, the surgical trauma caused by the thoracotomy in open-chest models changes the respiratory physiology as the ribs are dissected and left unattached after chest closure. To prevent this, we established a minimally invasive, closed chest approach via lateral thoracotomy. Herein we approach the aortic arch via the 2nd intercostal space without entering the chest cavities, leaving the mouse with a less traumatic injury to recover from. We perform this operation using standard laboratory settings for open chest TAC procedures with equal survival rates. Apart from maintaining physiological breathing patterns due to the closed chest approach, the mice seem to benefit by showing rapid recovery, as the less invasive technique appears to facilitate a fast healing process and to reduce immune response after trauma.

Here, we present a protocol of Transverse Aortic constriction (TAC) via a lateral thoracotomy. This technique is a minimally invasive, closed chest surgical procedure aiming to simulate pressure overload and heart failure in mice utilizing standard TAC laboratory settings.

דגם סגור-החזה לזירוז רוחבי. התרחבות אבי העורקים בעכברים

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

Improved Registration of 3D CT Angiography with X-ray Fluoroscopy for Image Fusion During Transcatheter Aortic Valve Implantation

The fusion of 3D anatomical models derived from high-fidelity pre-interventional computed tomography angiography (CTA), and x-ray (XR) fluoroscopy to facilitate anatomical guidance is of huge interest for complex cardiac interventions like TAVI procedures with cerebral protection. Co-registration of CTA and XR has been introduced either based on additional intraoperative non-/contrast-enhanced cone-beam computed tomography (CBCT) or two separate aortograms. With the related increase of radiation exposure and/or contrast agent (CA) dose, a potential additional risk for the patient is introduced. Here, we propose a modified co-registration approach making use of arteriograms of the iliofemoral arteries, routinely performed during the femoral puncture and sheath introduction. On-the-fly refinement of the co-registration during the on-going procedure enables accurate co-registration without any additional angiograms, thus reducing CA, XR dose and procedure time, while simultaneously improving operator confidence and procedure safety.

The aim of this study was to improve the co-registration for image fusion (IF) of pre-interventional CT data with real-time x-ray (XR) fluoroscopy during transfemoral transcatheter aortic valve implantation (TAVI).

שיפור רישום של תלת-ממד CT Angiography עם הרנטגן Fluoroscopy פיוזן התמונה במהלך ההשתלה שסתום אבי העורקים Transcatheter

The fusion of 3D anatomical models derived from high-fidelity pre-interventional computed tomography angiography (CTA), and x-ray (XR) fluoroscopy to ...

Electrocardiogram Recordings in Anesthetized Mice using Lead II

The electrocardiogram is a valuable tool for evaluating the cardiac conduction system. Animal research has helped generate novel genetic and pharmacological information regarding the electrocardiogram. However, making electrocardiogram measurements in small animals in vivo, such as mice, has been challenging. To this end, we used an electrocardiogram recording method in anesthetized mice with many advantages: it is a technically simple procedure, is inexpensive, has short measuring time, and is affordable, even in young mice. Despite the limitations with using anesthesia, comparisons between control and experimental groups can be performed with enhanced sensitivity. We treated mice with agonists and antagonists of the autonomic nervous system to determine the validity of this protocol and compared our results with previous reports. Our ECG protocol detected increased heart rates and QTc intervals on treatment with atropine, decreased heart rates and QTc intervals after carbachol treatment, and higher heart rates and QTc intervals with isoprenaline but did not note any change in ECG parameters on administration of propranolol. These results are supported by previous reports, confirming the reliability of this ECG protocol. Thus, this method can be used as a screening approach to making ECG measurements that otherwise would not be attempted due to high cost and technical difficulties.

We present an ECG protocol that is technically easy, inexpensive, fast, and affordable in small mice, and can be performed with enhanced sensitivity. We suggest this method as a screening approach for studying pharmacological agents, genetic modifications, and disease models in mice.

הקלטות אלקטרוג בעכברים מונערים באמצעות הפניה II

The electrocardiogram is a valuable tool for evaluating the cardiac conduction system. Animal research has helped generate novel genetic and ...

The Intra-Aortic Balloon Pump

Cardiogenic shock remains one of the most challenging clinical syndromes in modern medicine. Mechanical support is being increasingly used in the management of cardiogenic shock. Intra-aortic balloon pump (IABP) is one of the earliest and most widely used types of mechanical circulatory support. The device acts by external counterpulsation and uses systolic unloading and diastolic augmentation of aortic pressure to improve hemodynamics. Although IABP provides less hemodynamic support when compared with newer mechanical circulatory support devices, it can still be the mechanical support device of choice in appropriate situations because of its relative simplicity of insertion and removal, need for smaller size vascular access and better safety profile. In this review, we discuss the equipment, procedural and technical aspects, hemodynamic effects, indications, evidence, current status and recent advances in the use of IABP in cardiogenic shock.

We describe the steps for the percutaneous implantation of the intra-aortic balloon pump (IABP), a mechanical circulatory support device. It acts by counterpulsation, inflating at the onset of diastole, augmenting diastolic aortic pressure and improving coronary blood flow and systemic perfusion, and deflating before systole, reducing left ventricular afterload.

משאבת הבלון התוך-אבי העורקים

Cardiogenic shock remains one of the most challenging clinical syndromes in modern medicine. Mechanical support is being increasingly used in the ...

Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the kidney capsule in most rodent preclinical islet transplantation studies. This model is commonly used because murine intrahepatic islet transplantation is technically challenging, and a high percentage of mice could die from surgical complications, especially bleeding from the injection site post-transplantation. In this study, two procedures that can minimize the incidence of post-infusion portal vein bleeding are demonstrated. The first method applies an absorbable hemostatic gelatin sponge to the injection site, and the second method involves penetrating the islet injection needle through the fat tissue first and then into the portal vein by using the fat tissue as a physical barrier to stop bleeding. Both methods could effectively prevent bleeding-induced mouse death. The whole liver section showing islet distribution and evidence of islet thrombosis post-transplantation, a typical feature for intrahepatic islet transplantation, were presented. These improved protocols refine the intrahepatic islet transplantation procedures and may help laboratories set up the procedure to study islet survival and function in pre-clinical settings.

Here we present refined surgical procedures on successfully performing intraportal islet transplantation, a clinically relevant but technically challenging surgical procedure, in mice.

מזעור דימום וריד פורטל לאחר עירוי במהלך השתלת איים תוך-הפטיים בעכברים

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the ...