The research work presented in this manuscript was supported by a grant (HL107319 to Alan Daugherty and HL107326 to Lisa A. Cassis) from the National Institutes of Health of the United States of America. The content in this manuscript is solely the responsibility of the authors and does not necessarily represent the official views of the National Institutes of Health. The publication of this manuscript was sponsored by DURECT Corporation.

بيان الأخلاق: يتم إجراء دراسات الفأرة مع موافقة من جامعة كنتاكي المؤسسي رعاية الحيوان واللجنة الاستخدام (IACUC البروتوكول رقم: 2006-0009). يصرح باستخدامها الفئران في إنهاء باستخدام كوكتيل جرعة زائدة من الكيتامين (~ 210 ملغ / كلغ) وزيلازين (~ 30 ملغ / كلغ). 1. حساب AngII المبلغ ملاحظة: يستخدم هذا البروتوكول مثال ضخ AngII (1000 نانوغرام / كغ / دقيقة) لمدة 4 أسابيع في 4 الذكور مستقبلات LDL - / - تغذية الفئران حمية التخصيب الدهون المشبعة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن دراسة الفئران قبل احتساب مبلغ AngII اللازمة للتسريب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام القالب (الجدول 1) لحساب كتلة AngII اللازمة للتجربة. استخدام &quot;معدل يعني ضخ&quot; المشار إليها في التعليمات مضخات باسم &quot;معدل الضخ&quot; في الخطوة 4 من القالب. في القالب، سجل الخطوات 1-5 يدويا، وخطوات 6-10 تحسب تلقائيا. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في القالب، افترض أنسوف الفئران كسب 1 غرام من وزن الجسم خلال ضخ AngII 1000 نانوغرام / كغ / دقيقة لمدة 4 أسابيع. ملاحظة: قد يكون لكل ماوس مختلفة جدا الزيادة في وزن الجسم من شأنها أن تعتمد على العديد من المتغيرات، مثل سلالة الماوس والنظام الغذائي. نحن نستخدم بشكل روتيني &quot;0&quot; أو &quot;1 ز&quot; بناء على خبرتنا من الدراسات السابقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب الحجم الكلي 300 ميكرولتر من محلول AngII لكل الماوس لأن كل مضخة تتطلب ما يقرب من 250 ميكرولتر. </li></ol></li></ol> 2. حل من AngII <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متجر مجفف بالتجميد قارورة AngII في -20 ° C. تتوازن قارورة AngII لRT قبل الافتتاح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن كتلة AngII المحسوبة (7.3 ملغ كما هو مبين في الجدول رقم 1) في أنبوب بلاستيكية معقمة. ملاحظة: مؤشر ميرك لكل، لا تستخدم أنابيب زجاجية لحل منذ محلول مائي من AngII له صلة قوية للربط إلى الزجاج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة حجم المحسوبة لملحي معقم (1200 μل) في أنبوب من البلاستيك تحتوي على مجفف بالتجميد AngII، وكأب، ومزيج دقيق من قبل انعكاس حتى حل واضح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أرقام التسمية الماوس # 1، # 2، # 3، # 4 وعلى الفردية أنابيب بلاستيكية معقمة مع قبعات (0،5-1،5 مل). يعد حل AngII تحت غطاء الصفحي لكل الماوس على أساس وزن الجسم كما المحسوبة في الخطوة 1.2 و الجدول 1. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على سبيل المثال، ماصة 3.6 ملحي معقم ميكرولتر في أنبوب رقم 1، ثم 296.4 ميكرولتر AngII الحل، ومزيج دقيق من قبل pipetting صعودا وهبوطا بلطف. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أرقام التسمية الماوس على أنابيب من البلاستيك مع قبعات (4 مل، معقمة). وسوف تستخدم هذه لاحتضان مضخات كما هو موضح في الخطوة 3.13. </li></ol> 3. الأسموزي مضخة تعبئة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على مضخات في جزأين منفصلين: الجزء الرئيسي من المضخة ومشرف تدفق (الشكل 1). كل مربع يحتوي الهيئات 10 مضخة والمشرفين تدفق التي ملفوفة بشكل فردي. تسجيل الكثير الرقم. ملاحظة: دائما ارتداءقفازات لأن الزيوت نقلها من يد إلى الغلاف الخارجي للمضخات يؤثر سلبا على ضخ وظيفة. استخدام قفازات معقمة والشاش، وأنابيب، وملء الإبرة، وتزن القوارب لإعداد مضخات، لتجنب خطر العدوى من الزرع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فقط فتح عدد من الهيئات مضخة والمشرفين تدفق اللازمة للدراسة، وهذه لا يمكن خزنها فتحت مرة واحدة. إذا كانت هناك حاجة أكثر من 10 مضخات، تأكد من أن الكثير أعداد المضخات هي نفسها لدراسة واحدة، منذ مضخات من أرقام مختلفة ومختلفة الحجم المتوسط ​​التعبئة ومضخة أسعار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن كل مضخة (بما في ذلك كل من الجسم الرئيسي وتدفق المشرف)، ولاحظ الوزن إلى 4 منازل عشرية (على سبيل المثال، 1.1443 غرام من الماوس # 1). هذا الوزن، ويطلق عليه &quot;مضخة الوزن فارغة&quot; في القالب (الجدول 1)، وسوف تستخدم لحساب نسبة شغلها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق مضخة تعبئة الإبرة إلى حقنة معقمة 1 سم مكعب وملء بعناية المحاقن مع حل AngII من نحو مناسبأنبوب بلاستيكي معدودة. من المهم تجنب سحب الهواء في حقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة جميع فقاعات الهواء بعناية من حقنة أثناء وضع الإبرة إلى أسفل. الحفاظ على إبرة / محقنة في هذا الموقف لمنع دخول فقاعات في المضخة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج بلطف الإبرة ملء في الجسم مضخة. تقدم غيض من الإبرة إلى المضخة. لا تضع رأس الإبرة بإحكام على الجزء السفلي من المضخة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دفع المكبس حقنة ببطء لملء المضخة مع حل AngII. A الظل الداكن داخل المضخة يشير إلى مستوى التعبئة. حجم ملء ما يقرب من 246 ميكرولتر، في التعليمات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقف ملء المضخة وإزالة بعناية إبرة في أقرب وقت حبة من السائل ترتفع من المضخة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج مشرف التدفق إلى مضخة من خلال ثقب في أعلى جسم المضخة حتى يتم النظر إلى وجود فجوة بين رئيس مشرف تدفق والجزء العلوي من الجسم مضخة (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ادراج moderatأو في جسم المضخة يؤدي إلى بعض تسرب السائل من افتتاح مشرف التدفق. وصمة عار بعناية جميع السوائل الزائدة التي قد تسربت خلال وضع المشرفين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن المضخة شغلها. تسجيل وزن تحت &quot;مضخة الوزن معبأ&quot; في القالب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب ملء نسبة (٪) = (مضخة الوزن &quot;شغل&quot; - &quot;فارغ&quot;) × 1000 / يعني ملء حجم × 100. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب نسبة ملء كما هو مبين في الجدول رقم 1. ومن الناحية المثالية، ينبغي ملء نسبة تكون مساوية أو أكبر من 100٪. مضخة الملء إذا كانت نسبة الملء هو &lt;95٪ (فى اشارة الى ان فقاعات الهواء قد تكون موجودة في مضخة). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع مضخة شغل في المسمى 4 مل أنبوب (الخطوة 2.5) مع رئيس مشرف تواجه التصاعدي. إضافة كمية كافية من المياه المالحة عقيمة لتغطية المضخة. الحفاظ مضخة في أنبوب من المياه المالحة حتى الزرع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أنابيب مكان في حاضنة 37 درجة مئوية. احتضان مضخات O / N (لا يقل عن 12 ساعة) للسماح فتيلة الجزئي، ومن ثم زرع في الفئران. مضخةجي من AngII يبدأ ما يقرب من 24 ساعة بعد الزرع، والذي يسمح الفئران للتعافي من عملية جراحية قبل أي ضغوط محتملة تنشأ أثناء AngII التسريب. </li></ol> 4. التحضير لزرع مضخة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأوتوكلاف (الوضع خطورة، دورة الجافة، 15 دقيقة) الشاش، ومسحات قطنية والأدوات الجراحية بما في ذلك مقص، مرقئ، ملقط، والدبابيس، ودباسة 1 في اليوم على الاقل قبل الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في غرفة الإجراءات، وإعداد المرذاذ للتخدير باستخدام الأيزوفلورين. فتح الستائر معقمة في غطاء تدفق الصفحي، ووضع مخروط الأنف للتخدير الأيزوفلورين. وضع betadine، و 70٪ من الإيثانول، الماء المعقم، حبة تعقيم، handrub مطهر، ومسحات والشاش، ومضخات شغل في غطاء الصفحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دون قناع وثوب، ثم تفتح الستارة الخارجية في غطاء الصفحي مع الأيدي النظيفة. وضعت على قفازات معقمة وفتح حزمة داخل معقمة. </li></ol> 5. إجراء العمليات الجراحية لزرع مضخة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الماوس في شام التعريفيالبر مع تدفق الأيزوفلورين بمعدل تدفق 1،5-2٪. رصد الماوس لعدد إضافي من 2-3 دقيقة بعد الاستلقاء. حلاقة منطقة حول حجم ربع، على الكتف الأيسر أو الأيمن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في غطاء محرك السيارة الصفحي، مع أنفها مطاردة مع مخروط متصلة تدفق الأيزوفلورين (الشكل 2A). وضع رئيس الماوس نحو يدك المهيمنة الجراح. استخدام البيطري مرهم على العينين الماوس لمنع جفاف بينما تحت التخدير. تأكد من أن الفأر لديه أي رد على تحفيز الألم قبل الجراحة. على سبيل المثال، استجابة دواسة يعد مؤشرا جيدا للألم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المسحة ومسح منطقة حلق مع betadine تليها ثلاث مناديل مع 70٪ من الإيثانول. دون تغيير أو قفازات معقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مشرط جراحي لإجراء سم شق ~ 1 خلف الأذن على الكتف من الساق الأمامية. وينبغي أن يكون هذا شق عمودي على الذيل. استخدام الرعاية لقطع أنسجة الجلد فقط وليس الكامنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد forcالعائد على السهم في يد واحدة لفتح الشق، واستخدام اليد الأخرى لجعل نفق تحت الجلد تحت الجلد باستخدام مرقئ (الشكل 2B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقدم مرقئ طرف تجاه الذيل، وخلق جيب للمضخة. يتم ذلك عن طريق فتح بعناية بين فكي مرقئ تحت الجلد لفتح الحقيبة. سحب مرقئ من شق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج مضخة في شق مع رئيس مشرف وضعه على الجزء الخلفي من الماوس (الشكل 2C). دفع بلطف مضخة تماما في الجيب. يجب أن يكون هناك مساحة كافية لإغلاق الجرح مع أي توتر أو شد الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة وقد تم إدراج مضخة، قرصة بقوة كلا الجانبين من شق، واستقامة الحواف بحيث تلبي، ووضع 1 أو 2 الجرح لقطات لإغلاق (الشكل 2D). تفقد موقع شق لضمان عدم وجود إغلاق كامل للجرح، وأن المضخة لا تضغط مباشرة على الموقع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق موضعي كريم يدوكائين(4٪ وزن / وزن) مع تنظيف الماوس القطن swab.Remove من مخروط الأنف، ووضعه على وسادة التدفئة حتى يستعيد وعيه. بعد تعافيه، وعاد الماوس لقفصه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الأدوات الجراحية في التعقيم حبة لمدة 10 ثانية بين الفئران. تسمح أدوات ليبرد قبل الاستخدام. قفازات نظيفة مع handrub مطهر بين الفئران. رصد جميع الفئران حتى يتحقق الشفاء التام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة عن كثب الفئران بعد الجراحة. حقن البلعة من ملحي معقم (0،2-0،3 مل) تحت الجلد إذا تبين ماوس علامات الشدة، والجفاف أو فقدان الوزن واضحة. مراقبة الفئران على الأقل مرتين في اليوم خلال 10 أيام الأولى، ومرة ​​واحدة على الأقل كل يوم في وقت لاحق. إجراء تشريح على الفور إن وجدت الفئران تموت أثناء AngII التسريب. إزالة مقاطع الجرح بين 7-14 أيام بعد الجراحة. </li></ol> 6. حصاد، إصلاح، تنظيف، والتصوير من Aortas <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض فتح الصدر الماوس وتجاويف البطن من الناحية البطنية، خفض مكتب مستشار رئيس الوزراءن الأذين الأيمن، يروي مع المياه المالحة من خلال البطين الأيسر من القلب لإزالة الدم في الشريان الأبهر، ومن ثم حصاد الشريان الأورطي 27. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع aortas حصادها في أنابيب بلاستيكية تحتوي على 3 مل على الأقل من 4٪ لامتصاص العرق أو 10٪ من الفورمالين مخزنة بشكل محايد ل24 - 48 ساعة 27. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأنسجة الغلالة البرانية بعناية. الشريان الأورطي دبوس على الشمع الأسود مع دبابيس. الحصول على صور الأورطي مع نفس التكبير. تشمل الحاكم في كل صورة للمعايرة، كما هو مبين في الشكل (3). </li></ol> 7. أون التصوير مواجهة Aortas <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الشريان الأبهر مفتوحة طوليا من خلال انحناء الخارجي والداخلي من قوس الأبهر، وقطع الفروع الرئيسية مفتوحة بما في ذلك اللامسماة، الشريان السباتي الأيسر، والشريان تحت الترقوة الأيسر. دبوس الشريان الأورطي شقة مع براني الخارجية زرع المجاورة لالشمع الأسود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول أون الصورة مواجهة سطح باطنة الأبهر في نفس التكبير. تشمل الحاكم في كل صورة للمعايرة، كما تظهرن في الشكل (4). </li></ol>

<ol>
	<li>Pyo, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+disruption+of+matrix+metalloproteinase-9+(gelatinase+B)+suppresses+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms.">Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> J Clin Invest. 105 (11), 1641-1649 (2000).</li><li>Chiou, A. C., Chiu, B., Pearce, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+aortic+aneurysm+produced+by+periarterial+application+of+calcium+chloride.">Murine aortic aneurysm produced by periarterial application of calcium chloride.</a> J Surg Res. 99 (2), 371-376 (2001).</li><li>Daugherty, A., Cassis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+angiotensin+II+infusion+promotes+atherogenesis+in+low+density+lipoprotein+receptor+-/-+mice.">Chronic angiotensin II infusion promotes atherogenesis in low density lipoprotein receptor -/- mice.</a> Ann NY Acad Sci. 892 (1), 108-118 (1999).</li><li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+promotes+atherosclerotic+lesions+and+aneurysms+in+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Angiotensin II promotes atherosclerotic lesions and aneurysms in apolipoprotein E-deficient mice.</a> J Clin Invest. 105 (11), 1605-1612 (2000).</li><li>Deng, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urokinase-type+plasminogen+activator+plays+a+critical+role+in+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysm.">Urokinase-type plasminogen activator plays a critical role in angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm.</a> Circ Res. 92 (5), 510-517 (2003).</li><li>King, V. L., Trivedi, D., Gitlin, J. M., Loftin, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+cyclooxygenase-2+inhibition+with+celecoxib+decreases+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysm+formation+in+mice.">Selective cyclooxygenase-2 inhibition with celecoxib decreases angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm formation in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 26 (5), 1137-1143 (2006).</li><li>Uchida, H. A., Poduri, A., Subramanian, V., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urokinase-type+plasminogen+activator+deficiency+in+bone+marrow-derived+cells+augments+rupture+of+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms.">Urokinase-type plasminogen activator deficiency in bone marrow-derived cells augments rupture of angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 31 (12), 2845-2852 (2011).</li><li>Wang, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+increases+urokinase-type+plasminogen+activator+expression+and+induces+aneurysm+in+the+abdominal+aorta+of+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Angiotensin II increases urokinase-type plasminogen activator expression and induces aneurysm in the abdominal aorta of apolipoprotein E-deficient mice.</a> Am J Pathol. 159 (4), 1455-1464 (2001).</li><li>Bruemmer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II-accelerated+atherosclerosis+and+aneurysm+formation+is+attenuated+in+osteopontin-deficient+mice.">Angiotensin II-accelerated atherosclerosis and aneurysm formation is attenuated in osteopontin-deficient mice.</a> J Clin Invest. 112 (9), 1318-1331 (2003).</li><li>Gavrila, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitamin+E+inhibits+abdominal+aortic+aneurysm+formation+in+angiotensin+II-infused+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Vitamin E inhibits abdominal aortic aneurysm formation in angiotensin II-infused apolipoprotein E-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (8), 1671-1677 (2005).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgE+actions+on+CD4++T+cells,+mast+cells,+and+macrophages+participate+in+the+pathogenesis+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms.">IgE actions on CD4+ T cells, mast cells, and macrophages participate in the pathogenesis of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> EMBO Mol Med. 6 (7), 952-969 (2014).</li><li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regression+of+abdominal+aortic+aneurysm+by+inhibition+of+c-Jun+N-terminal+kinase.">Regression of abdominal aortic aneurysm by inhibition of c-Jun N-terminal kinase.</a> Nat Med. 11 (12), 1330-1338 (2005).</li><li>Usui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammasome+activation+by+mitochondrial+oxidative+stress+in+macrophages+leads+to+the+development+of+angiotensin+II-induced+aortic+aneurysm.">Inflammasome activation by mitochondrial oxidative stress in macrophages leads to the development of angiotensin II-induced aortic aneurysm.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (1), 127-136 (2015).</li><li>Mellak, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+mobilizes+spleen+monocytes+to+promote+the+development+of+abdominal+aortic+aneurysm+in+apoe-/-+mice.">Angiotensin II mobilizes spleen monocytes to promote the development of abdominal aortic aneurysm in apoe-/- mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (2), 378-388 (2015).</li><li>Krishna, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+antagonist+of+thrombospondin-1+promotes+abdominal+aortic+aneurysm+progression+in+the+angiotensin+II-infused+apolipoprotein-E-deficient+mouse.">Peptide antagonist of thrombospondin-1 promotes abdominal aortic aneurysm progression in the angiotensin II-infused apolipoprotein-E-deficient mouse.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (2), 389-398 (2015).</li><li>Norman, P. E., Curci, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+effects+of+tobacco+smoke+on+the+pathogenesis+of+aortic+aneurysm.">Understanding the effects of tobacco smoke on the pathogenesis of aortic aneurysm.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (7), 1473-1477 (2013).</li><li>Daugherty, A., Powell, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+highlights+of+ATVB:+aneurysms.">Recent highlights of ATVB: aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34 (4), 691-694 (2014).</li><li>Liu, J., Daugherty, A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+and+abdominal+aortic+aneurysms:+an+update.">Angiotensin II and abdominal aortic aneurysms: an update.</a> Curr Pharm Design. , (2015).</li><li>Rateri, D. L., Howatt, D. A., Moorleghen, J. J., Charnigo, R., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+infusion+of+angiotensin+II+in+apoE(-/-)+mice+promotes+macrophage+recruitment+with+continued+expansion+of+abdominal+aortic+aneurysm.">Prolonged infusion of angiotensin II in apoE(-/-) mice promotes macrophage recruitment with continued expansion of abdominal aortic aneurysm.</a> Am J Pathol. 179 (3), 1542-1548 (2011).</li><li>Saraff, K., Babamusta, F., Cassis, L. A., Daugherty, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aortic+dissection+precedes+formation+of+aneurysms+and+atherosclerosis+in+angiotensin+II-infused,+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Aortic dissection precedes formation of aneurysms and atherosclerosis in angiotensin II-infused, apolipoprotein E-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (9), 1621-1626 (2003).</li><li>Daugherty, A., Cassis, L. A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+pathologies+of+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms.">Complex pathologies of angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms.</a> J Zhejiang Univ Sci B. 12 (8), 624-628 (2011).</li><li>Daugherty, A., Rateri, D. L., Charo, I. F., Owens, A. P., Howatt, D. A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+infusion+promotes+ascending+aortic+aneurysms:+attenuation+by+CCR2+deficiency+in+apoE-/-+mice.">Angiotensin II infusion promotes ascending aortic aneurysms: attenuation by CCR2 deficiency in apoE-/- mice.</a> Clin Sci (Lond). 118 (11), 681-689 (2010).</li><li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell-specific+deficiency+of+Ang+II+type+1a+receptors+attenuates+Ang+II-induced+ascending+aortic+aneurysms+in+LDL+receptor-/-+mice).">Endothelial cell-specific deficiency of Ang II type 1a receptors attenuates Ang II-induced ascending aortic aneurysms in LDL receptor-/- mice).</a> Circ Res. 108 (5), 574-581 (2011).</li><li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+endothelial+or+smooth+muscle+cell-specific+angiotensin+II+type+1a+receptors+does+not+influence+aortic+aneurysms+or+atherosclerosis+in+LDL+receptor+deficient+mice.">Depletion of endothelial or smooth muscle cell-specific angiotensin II type 1a receptors does not influence aortic aneurysms or atherosclerosis in LDL receptor deficient mice.</a> PLoS One. 7 (12), 10-1371 (2012).</li><li>Rateri, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+induces+region-specific+medial+disruption+during+evolution+of+ascending+aortic+aneurysms.">Angiotensin II induces region-specific medial disruption during evolution of ascending aortic aneurysms.</a> Am J Pathol. 184 (9), 2586-2595 (2014).</li><li>Davis, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+cell+deletion+of+low-density+lipoprotein+receptor-related+protein+1+augments+angiotensin+II-induced+superior+mesenteric+arterial+and+ascending+aortic+aneurysms.">Smooth muscle cell deletion of low-density lipoprotein receptor-related protein 1 augments angiotensin II-induced superior mesenteric arterial and ascending aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (1), 155-162 (2015).</li><li>Daugherty, A., Rateri, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+experimental+designs+for+atherosclerosis+studies+in+mice.">Development of experimental designs for atherosclerosis studies in mice.</a> Methods. 36 (2), 129-138 (2005).</li><li>Henriques, T. A., Huang, J., D'Souza, S. S., Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orchidectomy,+but+not+ovariectomy,+regulates+angiotensin+II-induced+vascular+diseases+in+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Orchidectomy, but not ovariectomy, regulates angiotensin II-induced vascular diseases in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Endocrinology. 145 (8), 3866-3872 (2004).</li><li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonism+of+AT2+receptors+augments+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysms+and+atherosclerosis.">Antagonism of AT2 receptors augments angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms and atherosclerosis.</a> Br J Pharmacol. 134 (4), 865-870 (2001).</li><li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+of+receptor-associated+protein+attenuates+angiotensin+II-induced+atherosclerosis+in+hypercholesterolemic+mice+without+influencing+abdominal+aortic+aneurysms.">Deficiency of receptor-associated protein attenuates angiotensin II-induced atherosclerosis in hypercholesterolemic mice without influencing abdominal aortic aneurysms.</a> Atherosclerosis. 220 (2), 375-380 (2011).</li><li>Daugherty, A., Rateri, D., Lu, H., Balakrishnan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+blood+pressure+in+mice+using+volume+pressure+recording,+a+tail-cuff+method.">Measuring blood pressure in mice using volume pressure recording, a tail-cuff method.</a> J Vis Exp. (27), e1291 (2009).</li></ol>

برعاية نشر هذا المقال من قبل Alzet.

مضخات التناضحي تقديم AngII تحت الجلد هو نهج روتيني لإحداث تمدد الشريان الأورطى في الفئران. استنادا إلى بيانات من العديد من المختبرات، كانت هناك نتائج متسقة أن هذه هي طريقة موثوق بها وقابلة للتكرار لدراسة كل تمدد 3،4 وTAAS 22-26 في الفئران. ولذلك، يعتبر هذا نموذج الفأر نموذجا يلخص العديد من الميزات من تمدد الشريان الأورطى الإنسان، ورؤى الآلية الخاصة بمثل هذه الأمراض المدمرة. بينما الشيخوخة هو أحد عوامل الخطر لتمدد في البشر، فإنه لم يدرس بشكل منهجي للتمدد AngII التي يسببها في الفئران. ومع ذلك، يبدو حدوث وشدة تمدد AngII التي يسببها تشبه في الفئران في سن 8-48 أسابيع 4،5،7. حاليا، لا يوجد سوى عدد قليل من الدراسات الإبلاغ TAAS AngII التي يسببها في الفئران في سن 8-24 أسابيع 22-26، والتي لم تظهر الفروق المرتبطة بالعمر واضحة على تشكيل TAA. الفئران الإناث لديهم معدلات أقل بكثير من التمدد من الفئران الذكور التي غرست مع AngII 4،28. ومن الجدير بالذكر أيضا أن وقوع AngII التي يسببها التمدد هو أعلى من ذلك بكثير في فرط من الفئران normo-cholesterolemic، التي هي أكثر من 50٪ مقابل أقل من 30٪، على التوالي. بالإضافة إلى ذلك، وتمزق الأبهر المتكرر (حوالي 10-30٪) في كل من الفئران normo- ومفرط كوليستيرول الدم خلال AngII التسريب. ضخ AngII بمعدل 1000 نانوغرام / كغ / دقيقة في الفئران مفرط كوليستيرول الدم، مثل LDL مستقبلات - تغذية الفئران غذاء غربيا أو ئي (APOE) - - / / - تغذية الفئران اتباع نظام غذائي عادي أو غربي، له آثار القصوى على AAA تطوير 3،4،29. هذا المعدل التسريب هو الأمثل لدراسة شارك فيها التلاعب الجيني للاهتمام في الفئران مفرط كوليستيرول الدم ومن المتوقع للحد من التمدد. إذا كان من المتوقع التلاعب في الفئران مفرط كوليستيرول الدم لزيادة التمدد، فمن المستحسن للبث AngII بمعدل 500 نانوغرام / كغ / دقيقة أو أقل 30. في المقابل إلى التمدد، لا يوجد تجريبيجمعية nstrated بين الجنسين من الذكور أو ارتفاع الكولسترول وAngII التي يسببها TAAS 25. ومع ذلك، على غرار تمدد، إذا كان من المتوقع التلاعب في الجينات التي تهم زيادة TAAS، نوصي معدل ضخ أقل من 1000 نانوغرام / كغ / دقيقة لAngII التسريب. ومن المهم أيضا أن نعرف أن حدوث وشدة تمدد الشريان الأورطى AngII التي يسببها تختلف بين الفئران الفردية وبين الدراسات. إذا الفئران لا تتطور تمدد الشريان الأورطى، إمكانية محتملة واحدة هي أن AngII قد لم يتم تسليمها بنجاح في الفئران. للتأكد من صحة معدل ضخ عالية من AngII، مثل 1000 نانوغرام / كغ / دقيقة، وينصح بقياس ضغط الدم قبل وأثناء، AngII التسريب باستخدام غير الغازية طريقة الذيل الكفة 31. AngII ضخ بمعدل 1000 نانوغرام / كغ / دقيقة يزيد ضغط الدم الانقباضي لدى الفئران. أيضا، يمكن قياس تركيزات الرينين البلازما خلال AngII التسريب أو في إنهاء منذ AngII ديه ردود فعل سلبية على صإفراز العينين. ولذلك، AngII ضخ يؤدي إلى تخفيضات في تركيزات الرينين البلازما. إذا كان الماوس يملؤه AngII لا يوجد لديه الأمراض الظاهرة الأبهري، أي زيادة ضغط الدم، وأي انخفاض تركيز الرينين البلازما، فإنه يشير إلى أن AngII لم يتم تسليمها بكفاءة من خلال زرع مضخة صغيرة التناضحي. نود أن نوصي إزالة هذا الفأر من الدراسة. ومن المهم أيضا أن نلاحظ أن بعض الفئران لا تتطور تمدد الشريان الأورطى على الرغم من زيادة الضغوط الدم الانقباضي وانخفضت تركيزات الرينين البلازما. ينبغي أن تظل هذه الفئران في الدراسة. باختصار، ويتحقق AngII التسريب عن طريق زرع تحت الجلد باستخدام مضخات التناضحي للحث على تمدد الشريان الأورطى في الفئران. هذه الطريقة توفر AngII باستمرار بمعدل محددة لفترات المعينة التي تستخدم لدراسة كل تمدد وTAAS.

تمدد الشريان الأورطى يحمل التوسع اللمعية الدائمين في الشريان الأورطي الذي ينذر تمزق ويؤدي إلى الوفاة عادة. يحدث هذا المرض في كل من المناطق الأبهر في البطن والصدر، والتي توصف بأنها تمدد الأوعية الدموية في البطن الأورطي (تمدد) وتمدد الأوعية الدموية الأبهري الصدري (TAAS)، على التوالي. بسبب نقص فهم الآليات الجزيئية والعمليات الفسيولوجية المرضية، لا يوجد علاج طبي ثبت التي يمكن أن تمنع توسع أو تمزق أي نوع من تمدد الشريان الأورطى. وبما أنه من الصعب الحصول على عينات المريض وإجراء التجارب على البشر مباشرة، والبحوث التي تركز على تحديد آليات تمدد تم في كثير من الأحيان استقراء من نماذج حيوانية. A نموذج حيواني شيوعا هو التسريب تحت الجلد أنجيوتنسين II (AngII) في الفئران. مقارنة مع النهج جراحية أخرى لإحداث تمدد في الفئران، مثل داخل الأبهر نضح الإيلاستاز أو تطبيق شبه الأبهري من كلوريد الكالسيوم التي تتطلب فتح البطن 1،2، هذا methoد لا تتطلب الدخول إلى تجويف الجسم وتتطلب الحد الأدنى من الخبرة الجراحية 3،4. وذكر التسريب تحت الجلد AngII من خلال مضخات التناضحي للحث على التمدد في البداية في منخفض الكثافة البروتين الدهني (LDL) مستقبلات - / - الفئران التي غذيت على التخصيب الدهون النظام الغذائي المشبع 3، وبعد ذلك في APOE - / - تغذية الفئران حمية مختبر طبيعي 4. وقد أثبتت العديد من الدراسات الحديثة أيضا أن AngII يدفع تمدد في الفئران normolipidemic 5-7. وقد تم تطبيق هذا النهج من غرس AngII للحث على التمدد واستكشاف الآليات الجزيئية فضلا عن وضع استراتيجيات علاجية محتملة (على سبيل المثال، 5-15) لأن هذا النموذج يلخص العديد من الميزات التي لوحظت في تمدد الإنسان. على سبيل المثال، عوامل خطر تمدد الإنسان مثل التدخين، والشيخوخة، والذكورة أيضا تزيد تمدد AngII التي يسببها في الفئران 16،17. جمعية فرط كوليسترول الدم مع تمدد في البشر يتطلب التوضيح. ومع ذلك، فقد يكونأون يتفق أن ارتفاع الكولسترول تقوي AngII الناجم عن تمدد في الفئران 18. الأمراض من تمدد AngII التي يسببها في الفئران هي غير متجانسة للغاية وتتميز تسلل عميق بلعم، وتدهور الكولاجين، وتشكيل الجلطات والقرار، واتساع الأوعية الدموية 19-21. وعلى النقيض من موقع الأبهر infrarenal الأكثر شيوعا للتمدد في البشر، AngII الناجم عن تمدد في الفئران تحدث في منطقة الأبهري الكظرية. ميزة في كل مكان آخر من AngII التي يسببها التمدد هو كسر وسطي بطريق، مما يؤدي إلى تجلط الدم بطريق. ومن غير الواضح ما إذا كان بطريق الإيلاستين تمزق يحدث في البشر منذ المرضية الناتجة عن التمدد في البشر لم يتم دراستها بشكل خاص نظرا لعدم وجود أنسجة أم الدم من المراحل السابقة. AngII التسريب في الفئران يؤدي أيضا إلى التوسع العميق للمنطقة الأبهري الصدري، أن يقتصر في الغالب إلى الأبهر الصاعد والذي هو المنطقة الأكثر شيوعا لTAAS في البشر <sتصل&gt; 19،22-26. على غرار تمدد AngII التي يسببها، TAAS المستحثة خلال AngII التسريب أيضا تلخيص العديد من الميزات من البشر TAAS 25. ومع ذلك، وعلى النقيض من تمدد AngII التي يسببها، لا ترتبط TAAS AngII التي يسببها مع ارتفاع الكولسترول وليس لديهم الفروق بين الجنسين. الهدف العام المتمثل في ضخ AngII تحت الجلد في الفئران هو دراسة الخصائص المرضية والآليات الجزيئية للتمدد وTAAS.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="711">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Angiotensin II</td>
			<td>Bachem</td>
			<td>H-1705</td>
			<td>compound used to induce aortic aneurysms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alzet Osmotic Pumps</td>
			<td>DURECT Corporation</td>
			<td>Alzet Model 2004</td>
			<td>feasible for 28-day infusion in mice weighed &#62; 20 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saturated fat-enriched diet</td>
			<td>Harlan Teklad</td>
			<td>TD.88137</td>
			<td>42% calories/calories to stimulate hypercholesterolemia in LDL receptor -/- mice</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

subcutaneous angiotensin ii infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice

Osmotic pumps continuously deliver compounds at a constant rate into small animals. This article introduces a standard protocol used to induce aortic aneurysms via subcutaneous infusion of angiotensin II (AngII) from implanted osmotic pumps. This protocol includes calculation of AngII amount and dissolution, osmotic pump filling, implantation of osmotic pumps subcutaneously, observation after pump implantation, and harvest of aortas to visualize aortic aneurysms in mice. Subcutaneous infusion of AngII through osmotic pumps following this protocol is a reliable and reproducible technique to induce both abdominal and thoracic aortic aneurysms in mice. Infusion durations range from a few days to several months based on the purpose of the study. AngII 1,000 ng/kg/min is sufficient to provide maximal effects on abdominal aortic aneurysmal formation in male hypercholesterolemic mouse models such as apolipoprotein E deficient or low-density lipoprotein receptor deficient mice. Incidence of abdominal aortic aneurysms induced by AngII infusion via osmotic pumps is 5 - 10 times lower in female hypercholesterolemic mice and also lower in both genders of normocholesterolemic mice. In contrast, AngII-induced thoracic aortic aneurysms in mice are not hypercholesterolemia or gender-dependent. Importantly, multiple features of this mouse model recapitulate those of human aortic aneurysms.

الموت الرحيم كانت الفئران الموضحة في قسم البروتوكول بعد 4 أسابيع من AngII التسريب - 4 الذكور مستقبلات LDL - /. تم حصاد Aortas، وتنظيفها، وتصوير لتصور التوسعات الأبهري. كما هو مبين في الشكل (3)، aortas لها عدة خصائص مختلفة بما في ذلك التوسع في المنطقة الكظرية (تمدد؛ الشكل 3A)، والتوسع في المنطقة تصاعدي (TAAS؛ الشكل 3B)، أو التوسع في المنطقتين (وجود كل من التمدد وTAAS؛ الشكل 3C)، في حين التشكل في الماوس واحد كان بشكل فاضح وضعها الطبيعي (الشكل 3D). وكميا تمدد الشريان الأورطي البطني عن طريق قياس خارج الحي العرض القصوى من المنطقة الكظرية، كما يتضح من الخط الأحمر في الشكل 3A. لقياس تصاعدي تمدد الشريان الأورطي، وقطعت aortas مفتوحة ومعلقة كما هو مبين في الشكل (4). وقد تم قياس مساحة السطح باطنة في المنطقة الأبهر الصاعد (منطقة محاطة عشرخطوط حمراء الإلكترونية في الشكل 4A) ل quantitate TAAS. وأدرج الحاكم في كل صورة لتوحيد المقاييس، كما هو مبين في كلا الرقمين 3 و 4. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/53191/53191fig1.jpg" /> الشكل 1. صورة الممثل من شغل مضخة التناضحي تحتوي كل مضخة جزأين منفصلين: هيئة الرئيسي والمشرف التدفق. بعد ملء جسم المضخة مع AngII، يتم إدراج مشرف تدفق لختم المضخة. <img alt="الرقم 2" src="/files/ftp_upload/53191/53191fig2.jpg" /> الشكل 2. عملية جراحة زرع مضخة (A) يتم وضع الماوس في غطاء الصفحي مع مخروط الأنف الذي هو مستمر الإفراج الأيزوفلورين والأكسجين؛ يتم إدخال (B) A مرقئ على التوالي في شق الجلد لجعل نفق تحت الجلد. يتم إدخال (C) مضخة من خلال<html> شق الجلد بلطف. وتدبيس (D) شق الجلد بعد ضخ الإدراج. <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/53191/53191fig3.jpg" /> الشكل 3. الصور الأبهري (خارج الجسم الحي) من الفئران التي غرست مع AngII AngII 1000 نانوغرام / كغ / وقد أكسب دقيقة في LDL مستقبلات الذكور - / - الفئران لمدة 28 يوما. (A) تمدد يرافقه تجلط الدم. خط أحمر (2.05 ملم) يظهر قياس عرض الأبهر القصوى في المنطقة الكظرية. (B) تصاعدي تمدد الشريان الأورطي (TAA) مع الشريان الأورطي البطني العادي بشكل صارخ. (C) التوسعات عميقة في كل من المناطق الأبهر الصاعد والكظرية (TAAS وتمدد)؛ (D) الشريان الأورطي العادي بشكل صارخ مع عدم وجود تمدد واضح إما تصاعدي أو منطقة الأبهري الكظرية. 4.jpg و&quot;/&gt; الرقم 4. أون الصور مواجهة المناطق الأبهر الصدري من الفئران يملؤه AngII AngII 1000 نانوغرام / كغ / وقد أكسب دقيقة في الذكور مستقبلات LDL - / - الفئران لمدة 28 يوما. مساحة التي حددها خط أحمر تمثل المنطقة الأبهر الصاعد بما في ذلك جزء من قوس الأبهر. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> 1 </td><td colspan="2"> الجرعة المطلوبة </td><td></td><td> 1000 </td><td colspan="2"> نانوغرام / كغ / دقيقة </td><td></td></tr><tr><td> 2 </td><td colspan="3"> بدء وزن الجسم (أكبر الماوس) </td><td> 24.8 </td><td> ز </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3 </td><td colspan="3"> إجمالي الزيادة في وزن الجسم المقدرة </td><td> 1 </td><td> ز </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4 </td><td> معدل الضخ </td><td></td><td></td><td> 0.25 </td><td> ميكرولتر / ساعة </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 5 </td><td colspan="2"> نوmber من الفئران </td><td></td><td> 4 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 6 </td><td colspan="2"> الجرعة كل ساعة للحيوان </td><td></td><td> 1518 </td><td> نانوغرام </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 7 </td><td> اضرب المطلوبة </td><td></td><td></td><td> 6072 </td><td> نانوغرام / ميكرولتر </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 8 </td><td colspan="2"> 300 حل المجاهدين </td><td></td><td> 1.82 </td><td colspan="2"> ملغ / 300 ميكرولتر </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td colspan="2"> SOLUTION هناك حاجة </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 9 </td><td colspan="2"> مجموع AngII (ملغ) </td><td></td><td> 7.3 </td><td> ملغ </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10 </td><td colspan="2"> الذائبة في المياه المالحة و# 160؛ </td><td></td><td> 1200 </td><td> ميكرولتر </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> فأر </td><td> وزن الجسم </td><td> عامل التخفيف </td><td colspan="2"> الحجم (ميكرولتر) </td><td colspan="2"> مضخة الوزن (ز) </td><td> نسبة شغل </td></tr><tr><td> # </td><td> (ز) </td><td></td><td> AngII </td><td> ملحي </td><td> فارغ </td><td> متخم </td><td> (٪) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 24.5 </td><td> 1.0 </td><td> 296.4 </td><td> 3.6 </td><td> 1.1443 </td><td> 1.3877 </td><td> 99 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 23.0 </td><td> 0.9 </td><td> 278.2 </td><td> 21.8 </td><td> 1.1677 </td><td> 1.4145 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 24.8 </td><td> 1.0 </td><td> 300.0 </td><td> 0.0 </td><td> 1.1438 </td><td> 1.3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 21.8 </td><td> 0.9 </td><td> 263.7 </td><td> 36.3 </td><td> 1.1438 </td><td> 1.3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="7"> تخفيف عامل = وزن الجسم من وزن الفأر / جسم من أكبر الماوس </td><td></td></tr></tbody></table><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> فأر </td><td> وزن الجسم </td><td> عامل التخفيف </td><td colspan="2"> الحجم (ميكرولتر) </td><td colspan="2"> مضخة الوزن (ز) </td><td> نسبة شغل </td></tr><tr><td> # </td><td> (ز) </td><td></td><td> AngII </td><td> ملحي </td><td> فارغ </td><td> متخم </td><td> (٪) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 24.5 </td><td> 1.0 </td><td> 296.4 </td><td> 3.6 </td><td> 1.1443 </td><td> 1.3877 </td><td> 99 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 23.0 </td><td> 0.9 </td><td> 278.2 </td><td> 21.8 </td><td> 1.1677 </td><td> 1.4145 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 24.8 </td><td> 1.0 </td><td> 300.0 </td><td> 0.0 </td><td> 1.1438 </td><td> 1.3904 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 21.8 </td><td> 0.9 </td><td> 263.7 </td><td> 36.3 </td><td> 1.1438 </td><td> 1.3904 </td><td> 100 </td></tr></tbody></table> الجدول 1: حساب للتسريب 28 يوما عن طريق المضخات الأسموزية.

Watch this Scientific Journal Video about Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice at JoVE.com

Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice

يوفر زرع تحت الجلد من مضخات التناضحي نهج مناسب للتسليم لفترات طويلة وثابت من المركبات. وقد استخدم هذا الأسلوب على نطاق واسع لدراسة كل تمدد الشريان الأورطى البطنى والصدر في الفئران.

تحت الجلد أنجيوتنسين II تسريب باستخدام الأسموزي مضخات يقنع الأورطي تمدد الأوعية الدموية في الفئران

Osmotic pumps continuously deliver compounds at a constant rate into small animals.  This article introduces a standard protocol used to induce aortic ...

subcutaneous-angiotensin-ii-infusion-using-osmotic-pumps-induces

Research

JoVE Journal

Medicine

36.7K Views.  University of Kentucky.  يوفر زرع تحت الجلد من مضخات التناضحي نهج مناسب للتسليم لفترات طويلة وثابت من المركبات. وقد استخدم هذا الأسلوب على نطاق واسع لدراسة كل تمدد الشريان الأورطى البطنى والصدر في الفئران. 

Video: Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. This is largely true, but there are a number of important principles that can reduce the difficulty of these procedures and enhance reproducibility. Orthotopic aortic transplantation is an excellent procedure in which to learn these principles because it involves only two end-to-end anastomoses, but requires good suturing technique and handling of the vessels for consistent success. This procedure begins with the procurement of a length of abdominal aorta from a donor animal, followed by division of the native aorta in the recipient. The procured aorta is then placed between the divided ends of the recipient aorta and sutured into place using end-to-end anastomoses. To accomplish this objective successfully requires a high degree of concentration, good tools, a steady hand, and an appreciation of how easily the vasculature of a mouse can be damaged, resulting in thrombosis. Learning these important principles is what occupies most of the beginner's time when learning microsurgery in small rodents. Throughout this protocol, we refer to these important points. This model can be used to study vascular disease in a variety of different experimental systems1-8. In the context shown here, it is most often used for the study of post-transplant vascular disease, a common long-term complication of solid organ transplantation in which intimal hyperplasia occurs within the allograft. The primary advantage of the model is that it facilitates quantitative morphometric analyses and the transplanted vessel lies contiguous to the endogenous vessel, which can serve as an additional control9. The technique shown here is most often used for mice weighing 18-25 grams. We have accumulated most of our experience using the C57BL/6J, BALB/cJ, and C3H/HeJ strains.

We describe a technique in which a section of the abdominal aorta from a mouse is transplanted orthotopically to just below the renal arteries in an allogeneic or syngeneic recipient. This technique can be useful in studies in which transplantation of large arteries of uniform size is deemed advantageous.

زرع مثلي الشريان الأورطي في الفئران لدراسة أمراض الأوعية الدموية

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

In vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate the human disease provide a valuable platform for research into disease pathophysiology and for the preclinical evaluation of novel therapies. We present a variety of methods to generate subcutaneous or orthotopic human HCC xenografts in immunodeficient mice that could be utilized in a variety of research applications. With a focus on the use of primary tumor tissue from patients undergoing surgical resection as a starting point, we describe the preparation of cell suspensions or tumor fragments for xenografting. We describe specific techniques to xenograft these tissues i) subcutaneously; or ii) intrahepatically, either by direct implantation of tumor cells or fragments into the liver, or indirectly by injection of cells into the mouse spleen. We also describe the use of partial resection of the native mouse liver at the time of xenografting as a strategy to induce a state of active liver regeneration in the recipient mouse that may facilitate the intrahepatic engraftment of primary human tumor cells. The expected results of these techniques are illustrated. The protocols described have been validated using primary human HCC samples and xenografts, which typically perform less robustly than the well-established human HCC cell lines that are widely used and frequently cited in the literature. In comparison with cell lines, we discuss factors which may contribute to the relatively low chance of primary HCC engraftment in xenotransplantation models and comment on technical issues that may influence the kinetics of xenograft growth. We also suggest methods that should be applied to ensure that xenografts obtained accurately resemble parent HCC tissues.

Human tumor xenografts in immunodeficient mice are valuable tools to study cancer biology. Specific protocols to generate subcutaneous and intrahepatic xenografts from human hepatocellular carcinoma cells or tumor fragments are described. Liver regeneration induced by partial hepatectomy in recipient mice is presented as a strategy to facilitate intrahepatic engraftment.

جيل من تحت الجلد والخلايا الكبدية داخل الكبد سرطان Xenografts الإنسان في الفئران العوز المناعي

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Measuring Ascending Aortic Stiffness In Vivo in Mice Using Ultrasound

We present a protocol for measuring in vivo aortic stiffness in mice using high-resolution ultrasound imaging. Aortic diameter is measured by ultrasound and aortic blood pressure is measured invasively with a solid-state pressure catheter. Blood pressure is raised then lowered incrementally by intravenous infusion of vasoactive drugs phenylephrine and sodium nitroprusside. Aortic diameter is measured for each pressure step to characterize the pressure-diameter relationship of the ascending aorta. Stiffness indices derived from the pressure-diameter relationship can be calculated from the data collected. Calculation of arterial compliance is described in this protocol.
This technique can be used to investigate mechanisms underlying increased aortic stiffness associated with cardiovascular disease and aging. The technique produces a physiologically relevant measure of stiffness compared to ex vivo approaches because physiological influences on aortic stiffness are incorporated in the measurement. The primary limitation of this technique is the measurement error introduced from the movement of the aorta during the cardiac cycle. This motion can be compensated by adjusting the location of the probe with the aortic movement as well as making multiple measurements of the aortic pressure-diameter relationship and expanding the experimental group size.

Measuring Ascending Aortic Stiffness In Vivo in Mice Using Ultrasound

We describe a technique for measuring aortic stiffness from its pressure-diameter relationship in vivo in mice. Aortic diameter is recorded by ultrasound and aortic pressure is measured invasively with a solid-state pressure catheter. Blood pressure is changed incrementally and the resulting diameter is measured.

قياس تصاعدي الأورطي تصلب<em&gt; في فيفو</em&gt; في الفئران باستخدام الموجات فوق الصوتية

We present a protocol for measuring in vivo aortic stiffness in mice using high-resolution ultrasound imaging. Aortic diameter is measured by ultrasound ...

Neurodegeneration in an Animal Model of Chronic Amyloid-beta Oligomer Infusion Is Counteracted by Antibody Treatment Infused with Osmotic Pumps

Decline in hippocampal-dependent explicit memory (memory for facts and events) is one of the earliest clinical symptom of Alzheimer&#39;s disease (AD). It is well established that synapse loss and ensuing neurodegeneration are the best predictors for memory impairments in AD. Latest studies have emphasized the neurotoxic role of soluble amyloid-beta oligomers (A&#946;o) that begin to accumulate in the human brain approximately 10 to 15 yr before the clinical symptoms become apparent. Many reports indicate that soluble A&#946;o correlate with memory deficits in AD models and humans. The A&#946;o-induced neurodegeneration observed in neuronal and brain slice cultures has been more challenging to reproduce in many animal models. The model of repeated A&#946;o infusions shown here overcome this issue and allow addressing two key domains for developing new disease modifying therapies: identify biological markers to diagnose early AD, and determine the molecular mechanisms underpinning A&#946;o-induced memory deficits at the onset of AD. Since soluble A&#946;o aggregate relatively fast into insoluble A&#946; fibrils that correlate poorly with the clinical state of patients, soluble A&#946;o are prepared freshly and injected once per day during six days to produce marked cell death in the hippocampus. We used cannula specially design for simultaneous infusions of A&#946;o and continuous infusion of A&#946;o antibody (6E10) in the hippocampus using osmotic pumps. This innovative in vivo method can now be used in preclinical studies to validate the efficiency of new AD therapies that might prevent the deposition and neurotoxicity of A&#946;o in pre-dementia patients.

To study the effects of A&#946;o in vivo, we developed a model based on repeated hippocampal infusions of soluble A&#946;o coupled with continuous infusion of A&#946;o antibody (6E10) in the hippocampus using osmotic pumps to counteract the neurotoxic effect of A&#946;o.

التنكس العصبي في نموذج حيواني من المزمن اميلويد بيتا قليل وحدات ضخ وتصدى بواسطة الأجسام المضادة العلاج يملؤه المضخات الأسموزية

Decline in hippocampal-dependent explicit memory (memory for facts and events) is one of the earliest clinical symptom of Alzheimer&#39;s disease (AD). It ...

Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard open-chest transverse aortic constriction (TAC). Although transverse aortic constriction is a highly functional method for the induction of high pressure in the left ventricle, it is a more difficult and lengthy procedure due to its use of artificial ventilation with tracheal intubation. TAC is oftentimes also less survivable, as the newer method, MTAC, neither requires the cutting of the ribs and intercostal muscles nor tracheal intubation with a ventilation setup. In MTAC, as opposed to a thoracotomy to access to the chest cavity, the aortic arch is reached through a midline incision in the anterior neck. The thyroid is pulled back to reveal the sternal notch. The sternum is subsequently cut down to the second rib level, and the aortic arch is reached simply by separating the connective tissues and thymus. From there, a suture can be wrapped around the arch and tied with a spacer, and then the sternal cut and skin can be closed. MTAC is a much faster and less invasive way to induce left ventricular hypertension and enables the possibility for high-throughput studies. The success of the constriction can be verified using high-frequency trans-thoracic echocardiography, particularly color Doppler and pulsed-wave Doppler, to determine the flow velocities of the aortic arch and left and right carotid arteries, the dimension of the blood vessels, and the left ventricular function and morphology. A successful constriction will also trigger significant histopathological changes, such as cardiac muscle cell hypertrophy with interstitial and perivascular fibrosis. Here, the procedure of MTAC is described, demonstrating how the resulting flow changes in the carotid arteries can be examined with echocardiography, gross morphology, and histopathological changes in the heart.

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) conserves the essentials of regular transverse aortic constriction (TAC) while eliminating the use of a ventilator with tracheal intubation. It proves to be a highly desirable method for high-throughput studies on left ventricular overload, particularly in translational studies.

المناظير مستعرض الأورطي انقباض في الفئران

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to perform a partial thoracotomy to visualize the transverse aortic arch. However, the surgical trauma caused by the thoracotomy in open-chest models changes the respiratory physiology as the ribs are dissected and left unattached after chest closure. To prevent this, we established a minimally invasive, closed chest approach via lateral thoracotomy. Herein we approach the aortic arch via the 2nd intercostal space without entering the chest cavities, leaving the mouse with a less traumatic injury to recover from. We perform this operation using standard laboratory settings for open chest TAC procedures with equal survival rates. Apart from maintaining physiological breathing patterns due to the closed chest approach, the mice seem to benefit by showing rapid recovery, as the less invasive technique appears to facilitate a fast healing process and to reduce immune response after trauma.

Here, we present a protocol of Transverse Aortic constriction (TAC) via a lateral thoracotomy. This technique is a minimally invasive, closed chest surgical procedure aiming to simulate pressure overload and heart failure in mice utilizing standard TAC laboratory settings.

نموذج الصدر مغلقة للحث على انقباض الابهري عرضية في الفئران

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

Improved Registration of 3D CT Angiography with X-ray Fluoroscopy for Image Fusion During Transcatheter Aortic Valve Implantation

The fusion of 3D anatomical models derived from high-fidelity pre-interventional computed tomography angiography (CTA), and x-ray (XR) fluoroscopy to facilitate anatomical guidance is of huge interest for complex cardiac interventions like TAVI procedures with cerebral protection. Co-registration of CTA and XR has been introduced either based on additional intraoperative non-/contrast-enhanced cone-beam computed tomography (CBCT) or two separate aortograms. With the related increase of radiation exposure and/or contrast agent (CA) dose, a potential additional risk for the patient is introduced. Here, we propose a modified co-registration approach making use of arteriograms of the iliofemoral arteries, routinely performed during the femoral puncture and sheath introduction. On-the-fly refinement of the co-registration during the on-going procedure enables accurate co-registration without any additional angiograms, thus reducing CA, XR dose and procedure time, while simultaneously improving operator confidence and procedure safety.

The aim of this study was to improve the co-registration for image fusion (IF) of pre-interventional CT data with real-time x-ray (XR) fluoroscopy during transfemoral transcatheter aortic valve implantation (TAVI).

تحسين تسجيل 3D CT تصوير الأوعية بالأشعة السينية التنظير للانصهار الصورة أثناء زرع الصمام الابهري ترانسكاثيتير

The fusion of 3D anatomical models derived from high-fidelity pre-interventional computed tomography angiography (CTA), and x-ray (XR) fluoroscopy to ...

Electrocardiogram Recordings in Anesthetized Mice using Lead II

The electrocardiogram is a valuable tool for evaluating the cardiac conduction system. Animal research has helped generate novel genetic and pharmacological information regarding the electrocardiogram. However, making electrocardiogram measurements in small animals in vivo, such as mice, has been challenging. To this end, we used an electrocardiogram recording method in anesthetized mice with many advantages: it is a technically simple procedure, is inexpensive, has short measuring time, and is affordable, even in young mice. Despite the limitations with using anesthesia, comparisons between control and experimental groups can be performed with enhanced sensitivity. We treated mice with agonists and antagonists of the autonomic nervous system to determine the validity of this protocol and compared our results with previous reports. Our ECG protocol detected increased heart rates and QTc intervals on treatment with atropine, decreased heart rates and QTc intervals after carbachol treatment, and higher heart rates and QTc intervals with isoprenaline but did not note any change in ECG parameters on administration of propranolol. These results are supported by previous reports, confirming the reliability of this ECG protocol. Thus, this method can be used as a screening approach to making ECG measurements that otherwise would not be attempted due to high cost and technical difficulties.

We present an ECG protocol that is technically easy, inexpensive, fast, and affordable in small mice, and can be performed with enhanced sensitivity. We suggest this method as a screening approach for studying pharmacological agents, genetic modifications, and disease models in mice.

تسجيلات تخطيط القلب الكهربائي في الفئران المُضجرة باستخدام الرصاص الثاني

The electrocardiogram is a valuable tool for evaluating the cardiac conduction system. Animal research has helped generate novel genetic and ...

The Intra-Aortic Balloon Pump

Cardiogenic shock remains one of the most challenging clinical syndromes in modern medicine. Mechanical support is being increasingly used in the management of cardiogenic shock. Intra-aortic balloon pump (IABP) is one of the earliest and most widely used types of mechanical circulatory support. The device acts by external counterpulsation and uses systolic unloading and diastolic augmentation of aortic pressure to improve hemodynamics. Although IABP provides less hemodynamic support when compared with newer mechanical circulatory support devices, it can still be the mechanical support device of choice in appropriate situations because of its relative simplicity of insertion and removal, need for smaller size vascular access and better safety profile. In this review, we discuss the equipment, procedural and technical aspects, hemodynamic effects, indications, evidence, current status and recent advances in the use of IABP in cardiogenic shock.

We describe the steps for the percutaneous implantation of the intra-aortic balloon pump (IABP), a mechanical circulatory support device. It acts by counterpulsation, inflating at the onset of diastole, augmenting diastolic aortic pressure and improving coronary blood flow and systemic perfusion, and deflating before systole, reducing left ventricular afterload.

مضخة البالون داخل الأبهر

Cardiogenic shock remains one of the most challenging clinical syndromes in modern medicine. Mechanical support is being increasingly used in the ...

Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the kidney capsule in most rodent preclinical islet transplantation studies. This model is commonly used because murine intrahepatic islet transplantation is technically challenging, and a high percentage of mice could die from surgical complications, especially bleeding from the injection site post-transplantation. In this study, two procedures that can minimize the incidence of post-infusion portal vein bleeding are demonstrated. The first method applies an absorbable hemostatic gelatin sponge to the injection site, and the second method involves penetrating the islet injection needle through the fat tissue first and then into the portal vein by using the fat tissue as a physical barrier to stop bleeding. Both methods could effectively prevent bleeding-induced mouse death. The whole liver section showing islet distribution and evidence of islet thrombosis post-transplantation, a typical feature for intrahepatic islet transplantation, were presented. These improved protocols refine the intrahepatic islet transplantation procedures and may help laboratories set up the procedure to study islet survival and function in pre-clinical settings.

Here we present refined surgical procedures on successfully performing intraportal islet transplantation, a clinically relevant but technically challenging surgical procedure, in mice.

تقليل نزيف الوريد البابي بعد التسريب أثناء زراعة الجزر داخل الكبد في الفئران

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the ...