עבודה זו נתמכה על ידי מענקי מחקר מן המכון הלאומי לבריאות בארה&quot;ב (EY022383 ו EY022683; EJD) ומענק Core (P30EY001765), הדמיה מודול Core מיקרוסקופית.

משפט ואתיקה: כל הנהלים בוצעו בהתאם להנחיות שנקבעו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים באוניברסיטת ג&#39;ונס הופקינס ועדת שימוש. הערה: עכברים בשימוש בזמן צילומים הם עכברי C57BL / 6 מג&#39;קסון, למרות זני מכרסמים אחרים או מינים עשויים לשמש גם. בעת שימוש זנים או מינים אחרים, להיות מודע לכך במינוני הרדמה וציר זמן פציעה עשויים להשתנות. חשוב להתאים תנאי I / R כדי להתאים זן, מין, וריאציות ניסיון. 1. מכינים את הקוקטייל הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלב 1.25 מ&quot;ל קטמין, 0.625 מ&quot;ל Xylazine, 0.375 מ&quot;ל Acepromazine, ו 22.75 מ&quot;ל פוספט בופר בתוך שפופרת 50 צנטריפוגות מ&quot;ל. הערה: במשך שארית של כתב היד, פתרון זה יהיה המכונה קוקטייל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סנן את הקוקטייל לתוך צינור צנטריפוגות 50 מיליליטר סטרילי חדש באמצעות מזרק 60 מ&quot;ל ומסנן 0.20 מיקרומטר. תווית ותאריך זה tu חדשלִהיוֹת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגמרי לעטוף את צינור קוקטייל בנייר אלומיניום כדי למנוע השפלה אור-induced של ההרדמה. הערה: קוקטייל ניתן לאחסן בטמפרטורת החדר ולעשות בהם שימוש חוזר עד מועד פקיעת מרכיב המוקדם-שפג תוקפם שלה. </li></ol> 2. מכינים את Booster הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתוך צינור צנטריפוגות 50 מ&quot;ל, לשלב 4 מ&quot;ל קטמין ו -16 מ&quot;ל בופר פוספט. הערה: פתרון זה יהיה מעתה המכונה המאיץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סנן את המאיץ לתוך צינור צנטריפוגות 50 מ&quot;ל סטרילי חדשים באמצעות מזרק 60 מ&quot;ל ומסנן 0.20 מיקרומטר. תווית ותאריך את השפופרת החדשה הזאת. הערה: המאיץ ניתן לאחסן בטמפרטורת החדר ולעשות בהם שימוש חוזר עד מועד פקיעת מרכיב המוקדם-שפג תוקפם שלה. </li></ol> 3. מכינים את Suite כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את בטמפרטורת החדר בין 18 ° C ו- 21 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל על שולחן הניתוחים, ולהתאים חום המשטח שלו אל higheטמפרטורת st. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכסות את כל משטחי העבודה עם underpads כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסדרי כלוב ריק או מיכל אחר על שולחן הניתוחים כדי לחמם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסדרים בסולם וכן טאגר אוזן על משטח העבודה. </li></ol> 4. מכינים את תמיסת מלח מאוזן עם הפרין סודיום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 0.5 מ&quot;ל של נתרן הפרין כדי בקבוק IV 500 מ&quot;ל של תמיסת מלח מאוזנת (HBSS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הקצה החד של הסט העיקרי prepierced צינורות Y-האתר לבקבוק של נתרן הפרין 0.1%. </li></ol> 5. הגדרת הקוטב IV <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתלות את בקבוק נתרן הפרין 0.1% מתוך רחבת מוט IV, ולהצמיד לפתוח את מכסה מסנן אוויר על הסט העיקרי prepierced צינורות Y-אתר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגבהה של בקבוק נתרן 0.1% הפרין עד 163 ס&quot;מ (120 מ&quot;מ כספית). מדדו את גובה מן השולחן אל פסגת טפטוף הפרין סודיום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את כל בועות אוויר בצינור IV ידי מצליף הסט העיקרי prepierced ידני צינורות Y-האתר. </li&gt; </ol> 6. מגדירים את טיפות הפרין סודיום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את הערכה העיקרית prepierced צינורות Y-אתר סעפת החמישה השסתום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר 30-מד ½ מחטים אינץ סעפת חמש יציאות באמצעות זכר Luer כדי luer אביזרי צינור זכר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס כל אחד מחטים 30-מד ½ אינץ &#39;לתוך קטע 10 אינץ&#39; משלו של צינורות 30-מד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות hemostats, לשבור את טיפי מחט מחטי 30-מד ½ אינץ &#39;חדשות וכנס הקצוות הבוטים שלהם לתוך צינורות 30-מד. עקרות או חיטוי של טיפים מחט יהיה צורך עבור שלב 8.3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות קלטת, לסדר את צינורות 30-מד עם מחטים כך הצינורות מחוברים ליציאות הפנימיות מוצבים על גבי הצינורות מחוברים ליציאות החיצוניות. הסדר זה ימנע להסתבך של צינורות במהלך cannulation הלשכה הקדמית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את זרימת נתרן הפרין 0.1% סעפת חמש השסתום לכל יציאת הפרט. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כי 0.1%נתרן הפרין זורם מאוד עבור כל יציאה. אם יציאה זורמת בחולשה, להחליף את הנמל או לנקות אותו עם אוויר של מזרק סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר נתרן הפרין 0.1% לזרום עבור 2 - 3 דקות כדי להסיר בועות אוויר מן הצינורות 30-מד סעפת 5 שסתום. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את כל היציאות על סעפת 5 שסתום. </li></ol> 7. מכינים את העכברים לכירורגיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תביא עכברים לחדרי הניתוח. לספק בקבוקי מים עבור כל כלוב כדי למנוע התייבשות חיה במהלך ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את המשקל של כל עכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק כל עכבר intraperitoneally עם 0.02 מ&quot;ל קוקטייל לכל משקל גוף גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Tag ולהקליט את המספר של כל עכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את כל העכברים לתוך המיכל ריק על שולחן הניתוחים. אפשר 5-10 דקות עבור כל העכברים כדי להשיג הרדמה עמוקה כפי שאושר על ידי היעדר תגובת נסיגת דוושה כדי קמצוץ בוהן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור כל עכבר, לנהל טיפה אחת שלTropicamide לתוך כל עין עבור הרחבת אישון ושימון לטווח קצר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור כל עכבר, לנהל טיפה אחת של Proparacaine לתוך כל עין הרדמה מקומית ושימון לטווח קצר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסדרים את העכברים לפי סדר הרדמה כך העכבר הראשון להיות מורדם יהיה העכבר הראשון cannulated. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש להמתין לפחות 2 דקות עבור טיפות עיניים ייכנסו לתוקף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן חלקי 4 אינץ &#39;ישרים של קלטת ידי משייך בחוזקה בקלטת. מניחים בצד אחד חתיכת סרט עבור כל עכבר. הערה: אי למשוך בחוזקה בקלטת תגרום סלסול של הקלטת. </li></ol> 8. cannulate לשכת Anterior <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסדר את העכבר הראשון תחת מיקרוסקופ כירורגי, ולמקד את המיקרוסקופ על הקרנית העדיפה. הערה: Cannulation עשוי להתבצע משני העין. מנתחים דומיננטיים ימניים עלולים למצוא iקלת t כדי cannulate את עינו השמאלית, בשעה שרופאים דומיננטיים ימניים עשויים להעדיף את הזכות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את יציאת נתרן 0.1% הפרין הראשון על סעפת חמש שסתום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת מיקרוסקופ כירורגי, להשתמש זוג מלקחיים כדי proptose העין בעדינות. הכנס את המחט צינורית 30-מד לתוך החדר הקדמי בערך באמצע הדרך בין הסיבים zonule ואת הקודקוד של הקרנית. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תשמרי על עצמך כדי להימנע מגרד או ניקוב הקשתית, העדשה, או פני הקרנית הפנימית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הימנע חודר הקרני בשנית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות תנועת פיתול עדינה להתגבר חיכוך בין הצינורית ואת הקרנית, הכנס את הצינורית עמוקה בלשכה הקדמית. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש ברב של קלטת כדי לאבטח את צינורות 30-מד אל השולחן. כדי למזער את התנועה של הצינורית המוכנסת, לחץ על צינורות 30-מד מול השולחן בעוד לכת על הקלטת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את שעת ההתחלה של הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מיקרוסקופ, verify שאף דליפה ניכרת. אם הדליפה קיימת, תנועת נוזל תהיה גלויה ליד העין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראייה לאשר התנפחות עינית ידי התבוננות כי עין I / R היא גדולה יותר מאשר העין הנגדית. יחד, בהעדר דליפה ואת הנוכחות של התנפחות עינית להפגין העלאה מוצלחת של לחץ תוך עיני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל hypromellose לשתי העיניים. Hypromellose משמש כדי לשמן את microleaks הקרנית ואת החותם. מרחו את הקרם hypromellose לפי הצורך (בערך כל 30 דקות) עבור שימון מתמשכת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 8 עד שכל החיות כבר cannulated. </li></ol> 9. הרדמה צג <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש קמצוץ הבוהן, תצפית ויזואלית של שפם, או תצפית ויזואלית של הזנב כדי לוודא כי כל עכבר נשאר בהרדמה. האם עכבר להפגין תגובת נסיגת דוושה, עוויתות זיף, או תנועת זנב, פנה מייד אל שלב 9.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם עכבר מתחיל להתעורר במהלך ניתוח, מעליתהזנב להזריק מאיץ 0.05 מיליליטר intraperitoneally לתוך הבטן התחתונה מאחורי העכבר. אפשר 1 - 2 דקות עבור המאיץ ייכנס לתוקף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האם עכבר דורש הרגעה נוספת, חזור על שלב 9 לפי צורך. </li></ol> 10. להסיר את הצינורית מן הלשכה הקדמית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור כל חיה, לאחר 90 דק &#39;חלפו, משוך בעדינות את הצינורית מן החדר הקדמי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Untape העכבר מהשולחן כירורגית, נזהר שלא להפריע את צינורות הצינורית של חיות סמוכות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סוך בשני העיניים עם סיכת ג&#39;לי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כפי cannulae הבאים יוסרו, לארגן העכברים במיכל ריק על שולחן הניתוחים להתאושש מהניתוח. אל תכבה את החום של שולחן הניתוחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר, לכל הפחות, 2 - 3 שעות להתאוששות על השולחן כירורגית המחומם. שים העכברים לעתים קרובות עד שהם התאוששו לחלוטין מן ההרדמה. </li></ol> 11. נקה את המשוואהuipment <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את cannulae באמצעות מגבוני אלכוהול. הערה: שיטות אחרות לחיטוי או עיקור, כגון מעוקר, ניתן להחליף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרש נתרן הפרין 0.1% לעומת סעפת 5-שסתום, מחטים 30-מד, צינורות 30-מד, ו cannulae באמצעות מזרק 60 מ&quot;ל מלא אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את סעפת 5-שסתום, מחטים 30-מד, צינורות 30-מד, ו cannulae באמצעות מזרק 60 מ&quot;ל מלא מים מזוקקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרש מים מזוקקים מן סעפת 5 יציאות, מחטים 30-מד, צינורות 30-מד, ו cannulae באמצעות מזרק 60 מ&quot;ל מלא אוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר חיטוי cannulae ושטיפת מנגנון הצינורות, לאחסן ציוד זה לשימוש חוזר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות, להשליך, או לכבות את כל ציוד אחר. השאר את החום של שולחן הניתוחים על. </li></ol> 12. להחזיר את כל העכברים בכלובים בביתם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר העכברים להתעורר מניתוח (לאחר 2 - 3 שעות), לחזור כל חיה בכלוב בבית שלה. לספק מזון ג&#39;ל עבור כל כלוב. להחזיר את כל הכלובים לחדרים המיועדים שלהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכבים את האש של שולחן הניתוחים. מחק את כל הפסולת, ולנגב לחדרי הניתוח. </li></ol> 13. בצע הערכת רשתית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם לצורך, לאסוף רשתיות לניתוח היסטולוגית או עכברים להתאים כהים להקלטת electroretinogram. </li></ol>

<ol>
	<li>Osborne, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+ischemia:+mechanisms+of+damage+and+potential+therapeutic+strategies.">Retinal ischemia: mechanisms of damage and potential therapeutic strategies.</a> Prog Retin Eye Res. 23 (1), 91-147 (2004).</li><li>Bonne, C., Muller, A., Villain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+radicals+in+retinal+ischemia.">Free radicals in retinal ischemia.</a> Gen Pharmacol. 30 (3), 275-280 (1998).</li><li>Smith, G. G., Baird, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+time+of+retinal+cells+when+deprived+of+their+blood+supply+by+increased+intraocular+pressure.">Survival time of retinal cells when deprived of their blood supply by increased intraocular pressure.</a> Am J Ophthalmol. 35 (5:2), 133-136 (1952).</li><li>Buchi, E. R., Suivaizdis, I., Fu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure-induced+retinal+ischemia+in+rats:+an+experimental+model+for+quantitative+study.">Pressure-induced retinal ischemia in rats: an experimental model for quantitative study.</a> Ophthalmologica. 203 (3), 138-147 (1991).</li><li>Block, F., Schwarz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+b-wave+of+the+electroretinogram+as+an+index+of+retinal+ischemia.">The b-wave of the electroretinogram as an index of retinal ischemia.</a> Gen Pharmacol. 30 (3), 281-287 (1998).</li><li>Katai, N., Yoshimura, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+retinal+neuronal+death+by+ischemia-reperfusion+is+executed+by+two+distinct+caspase+family+proteases.">Apoptotic retinal neuronal death by ischemia-reperfusion is executed by two distinct caspase family proteases.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 40 (11), 2697-2705 (1999).</li><li>Toriu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lomerizine,+a+Ca2++channel+blocker,+reduces+glutamate-induced+neurotoxicity+and+ischemia/reperfusion+damage+in+rat+retina.">Lomerizine, a Ca2+ channel blocker, reduces glutamate-induced neurotoxicity and ischemia/reperfusion damage in rat retina.</a> Exp Eye Res. 70 (4), 475-484 (2000).</li><li>Kawai, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+of+risk+factors+for+the+degeneration+of+retinal+ganglion+cells+after+ischemia/reperfusion+in+rats:+effects+of+age,+caloric+restriction,+diabetes,+pigmentation,+and+glaucoma.">Modeling of risk factors for the degeneration of retinal ganglion cells after ischemia/reperfusion in rats: effects of age, caloric restriction, diabetes, pigmentation, and glaucoma.</a> FASEB J. 15 (7), 1285-1287 (2001).</li><li>Chidlow, G., Schmidt, K. G., Wood, J. P., Melena, J., Osborne, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-lipoic+acid+protects+the+retina+against+ischemia-reperfusion.">Alpha-lipoic acid protects the retina against ischemia-reperfusion.</a> Neuropharmacology. 43 (6), 1015-1025 (2002).</li><li>Fei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+Homer1a+Promoted+Retinal+Ganglion+Cell+Survival+After+Retinal+Ischemia+and+Reperfusion+via+Interacting+with+Erk+Pathway.">Upregulation of Homer1a Promoted Retinal Ganglion Cell Survival After Retinal Ischemia and Reperfusion via Interacting with Erk Pathway.</a> Cell Mol Neurobiol. , (2015).</li><li>Xu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+role+of+Nrf2+for+retinal+ganglion+cells+in+ischemia-reperfusion.">Neuroprotective role of Nrf2 for retinal ganglion cells in ischemia-reperfusion.</a> J Neurochem. 133 (2), 233-241 (2015).</li><li>Kim, B. J., Braun, T. A., Wordinger, R. J., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+morphological+changes+and+impaired+retinal+function+associated+with+temporal+regulation+of+gene+expression+after+retinal+ischemia/reperfusion+injury+in+mice.">Progressive morphological changes and impaired retinal function associated with temporal regulation of gene expression after retinal ischemia/reperfusion injury in mice.</a> Mol Neurodegener. 8 (21), (2013).</li><li>Portillo, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40+mediates+retinal+inflammation+and+neurovascular+degeneration.">CD40 mediates retinal inflammation and neurovascular degeneration.</a> J Immunol. 181 (12), 8719-8726 (2008).</li><li>Wei, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nrf2+has+a+protective+role+against+neuronal+and+capillary+degeneration+in+retinal+ischemia-reperfusion+injury.">Nrf2 has a protective role against neuronal and capillary degeneration in retinal ischemia-reperfusion injury.</a> Free Radic Biol Med. 51 (1), 216-224 (2011).</li><li>Abcouwer, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+ischemic+preconditioning+and+bevacizumab+on+apoptosis+and+vascular+permeability+following+retinal+ischemia-reperfusion+injury.">Effects of ischemic preconditioning and bevacizumab on apoptosis and vascular permeability following retinal ischemia-reperfusion injury.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (11), 5920-5933 (2010).</li><li>Abcouwer, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minocycline+prevents+retinal+inflammation+and+vascular+permeability+following+ischemia-reperfusion+injury.">Minocycline prevents retinal inflammation and vascular permeability following ischemia-reperfusion injury.</a> J Neuroinflammation. 10 (149), (2013).</li><li>Zheng, L., Gong, B., Hatala, D. A., Kern, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+ischemia+and+reperfusion+causes+capillary+degeneration:+similarities+to+diabetes.">Retinal ischemia and reperfusion causes capillary degeneration: similarities to diabetes.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 48 (1), 361-367 (2007).</li><li>Weyker, P. D., Webb, C. A., Kiamanesh, D., Flynn, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+ischemia+reperfusion+injury:+a+bench-to-bedside+review.">Lung ischemia reperfusion injury: a bench-to-bedside review.</a> Semin Cardiothorac Vasc Anesth. 17 (1), 28-43 (2013).</li><li>Raedschelders, K., Ansley, D. M., Chen, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cellular+and+molecular+origin+of+reactive+oxygen+species+generation+during+myocardial+ischemia+and+reperfusion.">The cellular and molecular origin of reactive oxygen species generation during myocardial ischemia and reperfusion.</a> Pharmacol Ther. 133 (2), 230-255 (2012).</li><li>Di, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+expression+and+function+in+cerebral+ischemia+reperfusion+injury.">MicroRNAs expression and function in cerebral ischemia reperfusion injury.</a> J Mol Neurosci. 53 (2), 242-250 (2014).</li><li>Saidi, R. F., Kenari, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+ischemia/reperfusion+injury:+an+overview.">Liver ischemia/reperfusion injury: an overview.</a> J Invest Surg. 27 (6), 366-379 (2014).</li><li>Malek, M., Nematbakhsh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+ischemia/reperfusion+injury;+from+pathophysiology+to+treatment.">Renal ischemia/reperfusion injury; from pathophysiology to treatment.</a> J Renal Inj Prev. 4 (2), 20-27 (2015).</li><li>Mallick, I. H., Yang, W., Winslet, M. C., Seifalian, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+injury+of+the+intestine+and+protective+strategies+against+injury.">Ischemia-reperfusion injury of the intestine and protective strategies against injury.</a> Dig Dis Sci. 49 (9), 1359-1377 (2004).</li><li>Hesketh, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+ischaemia+reperfusion+injury:+a+mouse+model+of+injury+and+regeneration.">Renal ischaemia reperfusion injury: a mouse model of injury and regeneration.</a> J Vis Exp. (88), (2014).</li><li>Stefansson, E., Wilson, C. A., Schoen, T., Kuwabara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+ischemia+induces+cell+mitosis+in+the+adult+rat+retina.">Experimental ischemia induces cell mitosis in the adult rat retina.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 29 (7), 1050-1055 (1988).</li><li>Honjo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statin+inhibits+leukocyte-endothelial+interaction+and+prevents+neuronal+death+induced+by+ischemia-reperfusion+injury+in+the+rat+retina.">Statin inhibits leukocyte-endothelial interaction and prevents neuronal death induced by ischemia-reperfusion injury in the rat retina.</a> Arch Ophthalmol. 120 (12), 1707-1713 (2002).</li><li>Otori, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+c-fos+and+c-jun+mRNA+following+transient+retinal+ischemia:+an+approach+using+ligation+of+the+retinal+central+artery+in+the+rat.">Expression of c-fos and c-jun mRNA following transient retinal ischemia: an approach using ligation of the retinal central artery in the rat.</a> Surv Ophthalmol. 42, 96-104 (1997).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epac2-deficiency+leads+to+more+severe+retinal+swelling,+glial+reactivity+and+oxidative+stress+in+transient+middle+cerebral+artery+occlusion+induced+ischemic+retinopathy.">Epac2-deficiency leads to more severe retinal swelling, glial reactivity and oxidative stress in transient middle cerebral artery occlusion induced ischemic retinopathy.</a> Sci China Life Sci. 58 (6), 521-530 (2015).</li><li>Zhang, Y., Zhang, Z., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simvastatin+inhibits+ischemia/reperfusion+injury-induced+apoptosis+of+retinal+cells+via+downregulation+of+the+tumor+necrosis+factor-alpha/nuclear+factor-kappaB+pathway.">Simvastatin inhibits ischemia/reperfusion injury-induced apoptosis of retinal cells via downregulation of the tumor necrosis factor-alpha/nuclear factor-kappaB pathway.</a> Int J Mol Med. , (2015).</li><li>Li, B., Pang, I. H., Barnes, G., McLaughlin, M., Holt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+and+device+to+induce+transient+retinal+ischemia+in+the+rat.">A new method and device to induce transient retinal ischemia in the rat.</a> Curr Eye Res. 24 (6), 458-464 (2002).</li></ol>

The authors have no disclosures.

אני רשתית / R פציעה ידי גבוהות IOP הוכיחה השירות שלה בדוגמנות נזק וחוסר תפקוד הסלולר, במיוחד ניווניות של מערכת העצבים, ביחידה העצבים וכלי הדם מכרסם הרשתית. הליך זה מספק רקמות מלאות חזקות והוא נגיש בקלות במונחים של תחכום טכנולוגי. זה כבר ציין זה ומודלים פציעה I / R אחרים שה?...

איסכמיה-רה-פרפוזיה רשתית (I / R) מאפיינת פתולוגיות רשתית אדם רבים, כולל גלאוקומה, רטינופתיה סוכרתית, ו חסימות כלי דם ברשתית 1. ב- I / R רשתית, זרימת דם מופחתת (איסכמיה) בכלי הדם ברשתית יוצרת מצב של רגישות יתר רשתית חמצן וחומרים מזינים אחרים, מזרז חמצונים חמורים וניזק דלקתי כאשר הזרימה תמשיך כרגיל לאחר מכן (רה-פרפוזיה) 2. הרשתית העצבית מופיע פגיעים במיוחד לשינויים אלה, עם ניוון מוחיים רשתית להיות אולי התכונה הבולטת ביותר של I / R-induced נזק. אנו מציגים כאן פרוטוקול למידול פציעת I / R רשתית בתוך העכבר. טכניקה זו מאפשרת לחוקרים לבחון מנגנונים פוטנציאל ואסטרטגיות טיפול למחלות בבני אדם של היחידה העצבה וכלי דם של הרשתית. חלוץ ב -1952 על ידי מנתחים המבקשים להבין את ההשלכות ניווניות של אנמיה כירורגית 3, רודןt רשתית I / R על ידי לחץ תוך עיני מוגבר (IOP) הוקמה מחדש בשנת 1991 לצורך סטנדרטיזציה נקודות קצה ניווניות אחרי העלבון איסכמי 4. באמצעות הטפטוף של מאגר מלוח להעלות IOP מעל לחץ דם סיסטולי, מחקרים אלה הראו כי cannulation עיני בלחץ הייתה מספיק כדי להשעות את זרימת רשתית ובכך ליזום ניוון עצבי. מאמצים נוספים האחרונים באמצעות רשתית I / R ידי גבוהה IOP החלו לפרט את מנגנוני I / R-induced ניוון מוחיי רשתית 5-12. קבוצות מרובות דיווחו שינויים פתולוגיים נוספים, כולל דלקת 13,14, חדירות כלי הדם 15,16, ו נימי ניוון 14,17. יחדיו, מחקרים אלה הקימו פציעת I / R ברשתית ידי IOP הגבוהה כמודל למחלת עצבים וכלי דם של רשתית באופן כללי יותר. אפיון מנגנוני פציעה I / R הוא חיוני לחקר vaהמחלה scular. פציעת I / R רשתית ידי IOP הגבוהה היא אחד דגמי פציעה רבים הנגרמת היפוקסיה, כוללים פציעות I / R ב ריאות 18, לב 19, מוח 20, כבד 21, כליות 22 ומעי 23. מודלים אלה היו עליונים בקידום הבנתנו של מחל וסקולרית והסעדים הקליניים שלה. על ידי הרחבת החקירה של תהליכים I / R לרקמות העין, אני רשתית / פציעה R לפי גבוהות IOP עוזר לצייר תמונה מקיפה יותר של תנאים אלה קשורים. מקביל בשיתוף פעולה הדוק עם תנאים ניווניות קליניים רשתית, אני רשתית / R פציעה ידי IOP הגבוהה מציג כלי רב ערך עבור חוקרים המעוניינים לחקור בפתוגנזה איסכמי. הפרוטוקול המתואר לעיל הינו ממוקד, ממושמע, ונגיש. היא מושלמת גם על ידי נקודות קצה ב ניוון עצבי, כגון כימות של נוירונים ברשתית, מדידת עובי הרשתית, ו r אלקטרוecording של פונקצית נוירון רשתית. מודל זה הוכיח השירות שלה בקידום חקירה עצבה וכלי דם, וזה נראה מבטיח סטטוס כפרוטוקול יסוד במחקר רפואה חזותי.

<table><tbody><tr><td>Heparin Sodium Injection, USP</td><td>Abraxis Pharmaceutical Products</td><td></td><td>1,000 USP/ml</td></tr><tr><td>BSS Sterile Irrigating Solution</td><td>Alcon Laboratories, Inc.</td><td>9007754-0212</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>SC-2 kg Digital Pocket Scale</td><td>American Weigh Scales, Inc.</td><td>SC-2 kg</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamide Ophthalmic Solution USP 1%</td><td>Bausch + Lomb</td><td></td><td>1% (10 mg/ml)</td></tr><tr><td>Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution USP, 0.5%</td><td>Bausch + Lomb</td><td></td><td>0.5% (5 mg/ml)</td></tr><tr><td>INTRAMEDIC Polyethylene Tubing</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>427400</td><td>Inner diameter: 427400</td></tr><tr><td>30 G 1/2 PrecisionGlide Needles</td><td>Benton Dickinson and Company</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>BC 1 ml TB Syringe, Slim Tip with Intradermal Bevel Needle, 26 G x 3/8</td><td>Benton Dickinson and Company</td><td>309625</td><td></td></tr><tr><td>BD 60 ml Syringe Luer-Lok Tip</td><td>Benton Dickinson and Company</td><td>309653</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss OPMI Visu 200/S8 Microscope</td><td>Carl Zeiss AG</td><td>000000-1179-101</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Syringe Filter</td><td>Corning Inc.</td><td>CLS431224</td><td>0.20 &amp;micro;m</td></tr><tr><td>Durasorb Underpads</td><td>Covidien</td><td>1038</td><td>23 x 24 inches</td></tr><tr><td>Alcohol Prep</td><td>Covidien</td><td>6818</td><td>2 Ply, Medium</td></tr><tr><td>Student Dumont #5 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>Hartman Hemostats</td><td>Fine Science Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>Primary Set, Macrobore, Prepierced Y-Site, 80 Inch</td><td>Hospira</td><td>12672-28</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline pH 7.4 (1x)</td><td>Invitrogen</td><td>10010-049</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Distilled water</td><td>Invitrogen</td><td>15230-204</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>C57BL/6J Mice</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>AnaSed Injection: Xylazine Sterile Solution</td><td>LLOYD, Inc.</td><td></td><td>20 mg/ml</td></tr><tr><td>Lubricating Jelly, Water Soluble Bacteriostatic</td><td>MediChoice</td><td></td><td>3-Gram Packet</td></tr><tr><td>NAMIC Angiographic Pressure Monitoring Manifold</td><td>Navilyst Medical, Inc.</td><td>70039355</td><td>5-Valve Manifold with Seven Female Ports</td></tr><tr><td>Goniosoft, Hypromellose 2.5% Ophthalmic Demulcent Solution: Hydroxypropyl Methylcellulose</td><td>OCuSOFT, Inc.</td><td></td><td>2.5% (25 mg/ml)</td></tr><tr><td>Ketaset CIII: Ketamine Hydrochloride</td><td>Pfizer, Inc.</td><td></td><td>100 mg/ml</td></tr><tr><td>Trans-Pal I.V. Stand&amp;nbsp;</td><td>Pryor Products</td><td>372</td><td>Furnished with a home-constructed 60-cm stainless steel extension</td></tr><tr><td>Acepromazine: Acepromazine Maleate Injection, USP</td><td>Vet One</td><td></td><td>10 mg/ml</td></tr><tr><td>V-Top Surgery Table/Adjustable Hydraulic</td><td>VSSI</td><td>100-4041-21</td><td></td></tr><tr><td>Tube Fitting Luer Male to Luer Male</td><td>Warner Instruments</td><td>64-1579</td><td></td></tr></tbody></table>

a mouse model of retinal ischemia-reperfusion injury through elevation of intraocular pressure

איסכמיה-רה-פרפוזיה רשתית (I / R) הוא תהליך pathophysiological תורם ניזק לתאים בתנאים עיניים מרובים, כוללים גלאוקומה, רטינופתיה סוכרתית, ו חסימות כלי דם ברשתית. במודלים של מכרסמים של פציעה I / R מספקים תובנות משמעותיות לתוך מנגנוני ואסטרטגיות טיפול אנושי I / פציעה R, במיוחד בכל הנוגע לנזק ניווניות ביחידה העצבים וכלי הדם של הרשתית. אנו מציגים כאן פרוטוקול גרימת פציעה I / R רשתית בעכברים באמצעות העלאת רמת הלחץ התוך עיני (IOP). בפרוטוקול זה, החדר הקדמי של העין הוא cannulated עם מחט, שדרכו זורם הטפטוף של מאגר מלוח גבוה. באמצעות טפטוף זה להעלות IOP מעל לחץ דם סיסטולי עורק, מתרגל זמני עוצר את זרימת דם ברשתית פנימית (איסכמיה). כאשר זרימת ימשיך כרגיל (רה-פרפוזיה) על ידי הסרה של צינורית, נזק לתאים חמור מתפתח, וכתוצאה מכך בסופו של דבר בתהליכי ניוון מוחיים רשתית. ההרבעה אחרונהies להדגים דלקת, חדירות כלי דם, וניוון נימים כמו אלמנטים נוספים של דגם זה. לעומת מתודולוגיות I / R רשתית חלופיות, כגון קשירת עורקי רשתית, אני רשתית / פציעת R ידי גבוה IOP מציע יתרונות במוגדרותו אנטומיים, עקיבות ניסיון, ונגישות טכנית, להציג את עצמו ככלי בעל ערך לבחינת בפתוגנזה וטיפול עצביים יחידת העצבים וכלי הדם של הרשתית.

התופעות ניווניות של רשתית לי / R ידי גבוה IOP הן בדרך כלל נבחנו ע&quot;י שתי גישות סטנדרטיות. NeuN immunolabeling של גרעינים עצביים חשף הפסד תאים עצביים משמעותי הבא I / R עלבון (איור 1). בקצרה, עיני enucleated 7 ימים לאחר I / R היה קבועים paraformaldehyde, שכותרתו עם סמן התאים...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure at JoVE.com

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

מאמר זה מתאר הליך גרימת פציעה איסכמיה-רה-פרפוזיה הרשתית על ידי לחץ תוך עיני מוגבר בעכברים. פציעת איסכמיה-רה-פרפוזיה רשתית על ידי לחץ תוך עיני מוגבר משמשת מודל פתולוגיות אנושי מתאפיין חמצן שנפרץ משלוח מזין ברשתית, המאפשר לחוקרים לבחון מנגנונים הסלולר פוטנציאל וטיפולים למחל אדם של היחידה העצבה וכלי דם ברשתית.

במודל עכבר של רשתית איסכמיה reperfusion נזק ע&quot;י העלאת רמת הלחץ התוך עיני

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

a-mouse-model-retinal-ischemia-reperfusion-injury-through-elevation

Research

JoVE Journal

Medicine

14.9K Views.  Johns Hopkins University.  מאמר זה מתאר הליך גרימת פציעה איסכמיה-רה-פרפוזיה הרשתית על ידי לחץ תוך עיני מוגבר בעכברים. פציעת איסכמיה-רה-פרפוזיה רשתית על ידי לחץ תוך עיני מוגבר משמשת מודל פתולוגיות אנושי מתאפיין חמצן שנפרץ משלוח מזין ברשתית, המאפשר לחוקרים לבחון מנגנו...

Video: A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Laser-Induced Chronic Ocular Hypertension Model on SD Rats

Glaucoma is one of the major causes of blindness in the world. Elevated intraocular pressure is a major risk factor. Laser photocoagulation induced ocular hypertension is one of the well established animal models. This video demonstrates how to induce ocular hypertension by Argon laser photocoagulation in rat.

Glaucoma is one of the major causes of blindness in the world. Elevated intraocular pressure is a major risk factor. Laser photocoagulation induced ocular hypertension is one of the well established animal models. This video demonstrates how to induce ocular hypertension by Argon laser photocoagulation in rat.

לייזר המושרה Ocular יתר לחץ דם כרוני דגם SD על חולדות

Glaucoma is one of the major causes of blindness in the world. Elevated intraocular pressure is a major risk factor. Laser photocoagulation induced ocular ...

Biology

A Laser-induced Mouse Model of Chronic Ocular Hypertension to Characterize Visual Defects

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model of ocular hypertension to mimic human high-tension glaucoma. Here laser illumination is applied to the corneal limbus to photocoagulate the aqueous outflow, inducing angle closure. The changes of IOP are monitored using a rebound tonometer before and after the laser treatment. An optomotor behavioral test is used to measure corresponding changes in visual capacity. The representative result from one mouse which developed sustained IOP elevation after laser illumination is shown. A decreased visual acuity and contrast sensitivity is observed in this ocular hypertensive mouse. Together, our study introduces a valuable model system to investigate neuronal degeneration and the underlying molecular mechanisms in glaucomatous mice.

Chronic ocular hypertension is induced using laser photocoagulation of the trabecular meshwork in mouse eyes. The intraocular pressure (IOP) is elevated for several months after laser treatment. The decrease of visual acuity and contrast sensitivity of experimental animals are monitored using the optomotor test.

מודל עכבר לייזר המושרה של לחץ תוך עיני מוגבר כרוני לאפיון פגמים חזותיים

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the brain for visual perception. Damage to RGCs and their axons leads to vision loss and/or blindness. Although the specific cause of glaucoma is unknown, the primary risk factor for the disease is an elevated intraocular pressure. Glaucoma-inducing procedures in animal models are a valuable tool to researchers studying the mechanism of RGC death. Such information can lead to the development of effective neuroprotective treatments that could aid in the prevention of vision loss. The protocol in this paper describes a method of inducing glaucoma - like conditions in an in vivo rat model where 50 &#181;l of 2 M hypertonic saline is injected into the episcleral venous plexus. Blanching of the vessels indicates successful injection. This procedure causes loss of RGCs to simulate glaucoma. One month following injection, animals are sacrificed and eyes are removed. Next, the cornea, lens, and vitreous are removed to make an eyecup. The retina is then peeled from the back of the eye and pinned onto sylgard dishes using cactus needles. At this point, neurons in the retina can be stained for analysis. Results from this lab show that approximately 25% of RGCs are lost within one month of the procedure when compared to internal controls. This procedure allows for quantitative analysis of retinal ganglion cell death in an in vivo rat glaucoma model.

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma is characterized by damage to retinal ganglion cells. Inducing glaucoma in animal models can provide insight into the study of this disease. Here, we outline a procedure that induces loss of RGCs in an in vivo rat model and demonstrates the preparation of whole-mount retinas for analysis.

גלאוקומה וישכנע נוהל בבית<em&gt; In vivo</em&gt; מודל עכברוש ואת כל הר רשתית הכנה

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known risk factor for glaucoma. This protocol demonstrates a step-by-step guide on this technique in Long Evans rats and C57BL/6 mice. Under general anesthesia, a "purse-string" suture is applied on the conjunctiva, around the equator and behind the limbus of the eye. The fellow eye serves as an untreated control. Over the duration of our study, which was a period of 8 weeks for rats and 12 weeks for mice, IOP remained elevated, as measured regularly by rebound tonometry in conscious animals without topical anesthesia. In both species, the sutured eyes showed electroretinogram features consistent with preferential inner retinal dysfunction. Optical coherence tomography showed selective thinning of the retinal nerve fiber layer. Histology of the rat retina in cross-section found reduced cell density in the ganglion cell layer, but no change in other cellular layers. Staining of flat-mounted mouse retinae with a ganglion cell specific marker (RBPMS) confirmed ganglion cell loss. The circumlimbal suture is a simple, minimally invasive and cost-effective way to induce ocular hypertension that leads to ganglion cell injury in both rats and mice.

Chronic ocular hypertension is induced by applying a circumlimbal suture in rats and mice, leading to functional and structural deterioration of the retinal ganglion cells consistent with glaucoma.

דגם של גלאוקומה המושרה על ידי תפרים Circumlimbal אצל חולדות ועכברים

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known ...

A Reversible Silicon Oil-Induced Ocular Hypertension Model in Mice

Elevated intraocular pressure (IOP) is a well-documented risk factor for glaucoma. Here we describe a novel, effective method for consistently inducing stable IOP elevation in mice that mimics the post-operative complication of using silicone oil (SO) as a tamponade agent in human vitreoretinal surgery. In this protocol, SO is injected into the anterior chamber of the mouse eye to block the pupil and prevent inflow of aqueous humor. The posterior chamber accumulates aqueous humor and this in turn increases the IOP of the posterior segment. A single SO injection produces reliable, sufficient, and stable IOP elevation, which induces significant glaucomatous neurodegeneration. This model is a true replicate of secondary glaucoma in the eye clinic. To further mimic the clinical setting, SO can be removed from the anterior chamber to reopen the drainage pathway and allow inflow of aqueous humor, which is drained through the trabecular meshwork (TM) at the angle of the anterior chamber. Because IOP quickly returns to normal, the model can be used to test the effect of lowering IOP on glaucomatous retinal ganglion cells. This method is straightforward, does not require special equipment or repeat procedures, closely simulates clinical situations, and may be applicable to diverse animal species. However, minor modifications may be required.

Here, we present a protocol to induce ocular hypertension and glaucomatous neurodegeneration in mouse eyes by intracameral injection of silicone oil and the procedure for silicone oil removal from the anterior chamber to return elevated intraocular pressure to normal.

סיליקון הפיך שמן המושרה מודל יתר לחץ דם בעכברים

Elevated intraocular pressure (IOP) is a well-documented risk factor for glaucoma. Here we describe a novel, effective method for consistently inducing ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

מודל רטינופתיה הנגרמת על ידי חמצן למחלות רשתית איסכמיות במכרסמים

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

Full-Circle Cauterization of Limbal Vascular Plexus for Surgically Induced Glaucoma in Rodents

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic nerve and retinal ganglion cell (RGC) degeneration, resulting in visual dysfunction by interrupting the transmission of visual information from the eye to the brain. Elevated intraocular pressure is the most important risk factor; thus, several models of ocular hypertension have been developed in rodents by either genetic or experimental approaches to investigate the causes and effects of the disease. Among those, some limitations have been reported such as surgical invasiveness, inadequate functional assessment, requirement of extensive training, and highly variable extension of retinal damage. The present work characterizes a simple, low-cost, and efficient method to induce ocular hypertension in rodents, based on low-temperature, full-circle cauterization of the limbal vascular plexus, a major component of aqueous humor drainage. The new model provides a technically easy, noninvasive, and reproducible subacute ocular hypertension, associated with progressive RGC and optic nerve degeneration, and a unique post-operative clinical recovery rate that allows in vivo functional studies by both electrophysiological and behavioral methods.

The goal of this protocol is to characterize a novel model of glaucomatous neurodegeneration based on 360&#176; thermic cauterization of limbal vascular plexus, inducing subacute ocular hypertension.

צריבה במעגל מלא של מקלעת כלי הדם הלימבלית לגלאוקומה הנגרמת בניתוח במכרסמים

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic ...

Neuroscience

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. To investigate pathological mechanisms of retinal ischemia, relevant experimental models need to be developed. Anatomically, a main retinal blood supplying vessel is the ophthalmic artery (OpA) and OpA originates from the internal carotid artery of the common carotid artery (CCA). Thus, disruption of CCA could effectively cause retinal ischemia. Here, we established a mouse model of retinal ischemia by transient bilateral common carotid artery occlusion (tBCCAO) to tie the right CCA with 6-0 silk sutures and to occlude the left CCA transiently for 2 seconds via a clamp, and showed that tBCCAO could induce acute retinal ischemia leading to retinal dysfunction. The current method reduces reliance on surgical instruments by only using surgical needles and a clamp, shortens occlusion time to minimize unexpected animal death, which is often seen in mouse models of middle cerebral artery occlusion, and maintains reproducibility of common retinal ischemic findings. The model can be utilized to investigate the pathophysiology of ischemic retinopathies in mice and further can be used for in vivo drug screening.

Here, we describe a mouse model of retinal ischemia by transient bilateral common carotid artery occlusion using simple sutures and a clamp. This model can be useful for understanding the pathological mechanisms of retinal ischemia caused by cardiovascular abnormalities.

דגם מורין של פגיעה איסכמית ברשתית הנגרמת על ידי חסימת עורקים דו-צדדית משותפת חולפת

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), proliferative diabetic retinopathy (PDR), and retinal vein occlusion (RVO). Most OIR studies observe retinal neovascularization at specific time points; however, the dynamic vessel growth in live mice along a time course, which is essential for understanding the OIR-related vessel diseases, has been understudied. Here, we describe a step-by-step protocol for the induction of the OIR mouse model, highlighting the potential pitfalls, and providing an improved method to quickly quantify areas of vaso-obliteration (VO) and neovascularization (NV) using immunofluorescence staining. More importantly, we monitored vessel regrowth in live mice from P15 to P25 by performing fluorescein fundus angiography (FFA) in the OIR mouse model. The application of FFA to the OIR mouse model allows us to observe the remodeling process during vessel regrowth.

This protocol describes a detailed method for the preparation and immunofluorescence staining of mice retinal flat mounts and analysis. The use of fluorescein fundus angiography (FFA) for mice pups and image processing are described in detail as well.

ניטור צמיחה דינמית של כלי רשתית במודל עכבר רטינופתיה המושרה על ידי חמצן

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...

<meta charset="utf8"></head><body>מודל עכבר לפגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה ברשתית לחקר פתולוגיות רשתית

Induction of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury in a Mouse Eye Model

Ischemia-reperfusion injuries are known to cause a range of retinal pathologies, including diabetic retinopathy, glaucoma, retinal vascular occlusions, and other vaso-occlusive conditions. This manuscript presents a method for inducing ischemia-reperfusion injury in a mouse model. The method utilized anterior chamber cannulation attached to a saline reservoir, generating hydrostatic pressure to raise the intraocular pressure to 90-100 mmHg. This method effectively caused constriction of retinal capillaries to induce retinal ischemia. At the end of the ischemic period (60 min), the intraocular pressure was normalized (&#8804;20 mmHg) before removing the cannula from the anterior chamber to initiate reperfusion. Days after the ischemia/reperfusion procedure, the eyes were collected and sectioned for histological staining. The histopathology of the retinal sections was scored by evaluating eight parameters of retinal injury: folds, hemorrhage, deformation, cell loss in the ganglion cell, inner nuclear, outer nuclear, and photoreceptor layers, and damage to retinal pigment epithelial cells. This method provided a reproducible model to study the mechanisms and pathology of retinal ischemia/reperfusion injury. In addition, this model can facilitate the discovery of potential therapeutic targets to treat retinal ischemia/reperfusion injury, advancing the study of retinal pathologies and improving patient outcomes.

<meta charset="utf8"></head><body>אינדוקציה של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה ברשתית במודל עין עכבר

This protocol models retinal ischemia-reperfusion injury in a mouse eye by inducing retinal ischemia via anterior chamber cannulation and intraocular pressure elevation, followed by intraocular pressure normalization to initiate the reperfusion.

אינדוקציה של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה ברשתית במודל עין עכבר

Ischemia-reperfusion injuries are known to cause a range of retinal pathologies, including diabetic retinopathy, glaucoma, retinal vascular occlusions, ...

במודל עכבר של רשתית איסכמיה reperfusion נזק ע"י העלאת רמת הלחץ התוך עיני

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video