גלאוקומה היא הגורם המוביל לעיוורון בלתי הפיך, המאופיין במוות תאי גנגליון רשתית ובאופטו-נוירודגנרציה. העלאת לחץ תוך עיני, המכונה גם יתר לחץ דם עיני, הוא גורם הסיכון המוכר ביותר עבור גלאוקומה. מודל פשוט אך יעיל של יתר לחץ דם עיני בבעלי חיים ניסיוניים כגון עכברים חשוב לחקירת גלאוקומטרים בניוון עצבי ובדיקת טיפול בהגנה עצבית.
לכן, עם תוצאות, אנו מפתחים מודל יתר לחץ דם עינית העכבר המחקה מקרוב את הגלאוקומה המשנית שנצפתה בחולים אנושיים. מודל זה משכפל בנאמנות את הגלאוקומה המשנית הנגרמת על ידי שמן סיליקון המושרה לחסימת אישונים. ההליך הוא פשוט העלאת IOP היא יציבה, ואם ניוון עצבי הקשורים יתר לחץ דם עיני הוא חמור בעיני העכבר, וחשוב יותר, יתר לחץ דם עיני הוא הפיך כי שמן סיליקון ניתן להסיר בקלות מן העיניים העכבר.
הדגמת ההליך תהיה ד"ר פאנג פאנג, עמית לאחר ניתוח מהמעבדה שלי. כדי להתחיל, לעשות micropipette זכוכית עבור הזרקת שמן סיליקון intracameral על ידי משיכת נימי זכוכית עם מושך פיפטה. חותכים פתח בקצה המיקרופיגט ומחדדים את הקצה באמצעות מכונת שיפוע מיקרו-מטחנה כדי ליצור שיפוע של 35 עד 40 מעלות.
ללטש את הקצוות של שיפה ולשטוף אותו עם מים כדי להסיר את כל הפסולת. יש לבודד אוטומטית את המיקרו-פיד לפני השימוש. כדי להכין את מחט paracentesis לכניסה הקרנית, לצרף מחט מד 32 למזרק חמישה מיליליטר על מנעול פיתוי עוד יותר לאבטח אותו עם קלטת.
לכופף את קצה המחט משופע, עם הפנים כלפי מעלה, ב 30 מעלות. כדי להכין את מזרק שמן סיליקון, לצרף ולאבטח מחט קהה סוף 18 מד על מזרק 10 מיליליטר. ואז לחבר צינור פלסטיק עם מחט 18 מד בקצה אחד להתמלא בשמן סיליקון לפי הצורך דרך הקצה השני.
לאחר הרדמה של עכבר C57 שחור 6J בן תשעה עד עשרה שבועות, בדוק את חוסר התגובה לצביטת בוהן עם חוסר התנועה של השפם או הזנב. מניחים את העכבר במצב בצד השני על פלטפורמת ניתוח. יש למרוח טיפה אחת של 5%proparacaine hydrochloride על הקרנית לפני ההזרקה כדי להפחית את רגישותה במהלך ההליך.
השתמש במחט paracentesis מד 32 כדי לבצע חתך כניסה ברביע הזמן סופר על 5 מילימטרים מן הלימבוס. מנהרה דרך השכבות של הקרנית במשך כ 3 מילימטרים לפני פירסינג לתוך התא הראשי, נזהר לא לגעת בעדשה או קשתית. מוציאים את המחט באיטיות כדי לשחרר בערך 1-2 מיקרוליטרים של הומור מים מהתא הראשי דרך המנהרה ומחכים כשמונה דקות כדי להפחית עוד יותר את הלחץ התוך עיני.
למדוד את עין השליטה ההיפרלטראלית כדי לקבוע את הלחץ. הכנס את micropipette זכוכית טעון מראש עם שמן סיליקון דרך מנהרת הקרנית לתוך התא הקדמי עם שיפוע פונה כלפי מטה אל פני הקשתית. לדחוף את הבוכנה מזרק לאט להזריק שמן סיליקון לתוך התא anterior עד טיפת השמן מכסה את רוב פני הקשתית, כ 2.3 כדי 2.4 מילימטרים בקוטר.
השאירו את המיקרופיגט בתא הראשי למשך 10 שניות נוספות לפני משיכתו באיטיות. בעדינות לדחוף את העפעף העליון כדי לסגור את חתך הקרנית כדי למזער את דליפת שמן סיליקון. ולאחר מכן להחיל משחה אנטיביוטית על פני העין.
שמור את העכבר על משטח החימום עד להתאוששות מלאה מהרדמה. כדי להסיר שמן סיליקון מהתא האחורי, הרדמה את העכבר ולאחר מכן לבדוק את חוסר התגובה קמצוץ בוהן כדי לקבוע את כוח ההרדמה ואת חוסר התנועה של השפם או הזנב. מניחים את העכבר על פלטפורמת ניתוח ומאבטחים אותו במצב בצד השני עם קלטת.
יש למרוח ירידה אחת של 5% בהידרוכלוריד פרופארקאין על הקרנית כדי להפחית את רגישותה. באמצעות מחט paracentesis 32 מד עשוי מראש, לעשות שני חתכים ברביע הזמני של הקרנית בין שתיים לחמש בערך בקצה טיפת שמן הסיליקון. הכנס מחט השקיה של 33 מד המחוברת לפתרון השקיה באמצעות חתך קרנית אחד במהירות המרבית.
הכנס עוד 33 מחט ניקוז מד מחובר המזרק ללא בוכנה דרך חתך הקרנית האחר כדי לאפשר טיפת שמן סיליקון לצאת התא הראשון תוך השקיה עם פתרון השקיה. משיכת מחט הניקוז ואז מחט ההשקיה. השתמש micropipette זכוכית מחובר מזרק המילטון להזריק בועת אוויר לתוך התא הראשי כדי לשמור על העומק הרגיל שלה ולחץ כדי לסגור את החתך הקרנית.
החל משחה אנטיביוטית על שתי העיניים ולשמור את העכבר על כרית התאוששות חימום עד התאושש לחלוטין מן ההרדמה. מניחים את העכבר בתא אינדוקציה. הרדמה כפי שמתואר בכתב היד ולשמור על קרנית לחה על ידי החלת קרעים מלאכותיים לאורך כל ההליך.
המתן כ-15 דקות כדי לאפשר לתלמיד להתהוות באופן מלא. למדוד את IOP של שתי העיניים באמצעות טון על פי הוראות המוצר. הביאו את הטונומטר ליד עין העכבר, תוך שמירה על המרחק מקץ הגשוש לקרנית העכבר בערך שלושה עד ארבעה מילימטרים.
לחץ על כפתור המדידה שש פעמים כדי ליצור קריאה אחת ולקבל שלוש קריאות שנוצר על ידי מכונה מכל עין כדי לרכוש את IOP הממוצע. בצע אימונוהיסטוכימיה של תא גנגליה רשתית כל הר רשתית ספירת חלקים דקים למחצה עצב הראייה כימות של אקסונים ששרדו על בעלי החיים הקריבו בשמונה שבועות לאחר הזרקת שמן סיליקון. לחץ תוך עיני של עיני עכבר עם טיפות שמן סיליקון גדול מ 1.6 מילימטרים נמדד פעם בשבוע במשך שמונה שבועות, לאחר הזרקת שמן סיליקון אחת.
הלחץ של העין המקבלת את השמן נותר גבוה, בעיקר כפול מהלחץ של עין השליטה ההתמדתית המצביע על חסימת אישונים יעילה. בקבוצה אחרת של עכברים, שמן סיליקון נשטף מהתא הראשי שבועיים לאחר ההזרקה. לאחר המתנה של שבוע כדי לאפשר לקרנית להתאושש, הלחץ ה תוך עיני חזר לנורמלי, כמו עין השליטה.
כדי לקבוע את ההשפעות של תת לחץ דם עיני הנגרמת על ידי שמן סיליקון על תאי גנגליון ברשתית, somata ששרד באזורים ההיקפיים של הרים שלמים ברשתית היה מכומת על ידי כתמי RBPMS מראה מוות דרמטי של תא גנגליון ברשתית לאחר הזרקת שמן סיליקון. האקסונים ששרדו בעצב הראייה חצי דק חתך היו מכומתים על ידי כתמי PBD שמונה שבועות לאחר הזריקה. הייתה ניוון אקסון גדול ביתר לחץ דם עיני המושרה משמן סיליקון.
ניתן לדמיין את בעלי החיים עם SLOOCT כדי לקבוע את השינוי ברשתית. הפונקציה החזותית של בעלי החיים ניתן לתייג על ידי דפוס ERG ו OKR, גם כן. מודל זה של יתר לחץ דם עיני יקל על חקירת ניוון עצבי גלאוקומטרים המושרה IOP גבוה.
זה יכול לשמש גם כדי לבדוק טיפולים נוירופרוטקטיביים מבטיחים פרה-קליניים.
